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DEVELOPMENT AND VALIDATION OF AN ANALYTICAL METHOD FOR QUANTITATION OF THE DRUG BEVACIZUMAB BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY. In this study, an analytical method was developed and validated for quantitation of the drug bevacizumab (Avastin (R)) by high performance liquid chromatography (HPLC). The HPLC column was a BioSuite 250 (R) HR SEC, 300 x 7.8 mm x 5 mu m (Waters, USA). The mobile phase consisted of phosphate buffered saline (PBS). The results revealed that the method was specific, precise. accurate, robust and linear (r(2) = 0.998) from 5 to 75 mu g mL(-1). Therefore, this method can be used in drug release studies or in quality control ampoules of the drug.

A hidroxicloroquina (HCQ) é um importante fármaco quiral usado, principalmente, no tratamento de artrite reumatóide, lupus eritematoso sistêmico e malária e cujas propriedades farmacocinéticas e farmacodinâmicas são estereosseletivas. Em relação às propriedades farmacocinéticas, alguns estudos prévios indicam que o metabolismo estereosseletivo parece ser função da espécie estudada, o que implica na necessidade de métodos seletivos para a determinação de seus enantiômeros em materiais biológicos. Assim, propôs-se o desenvolvimento e a validação de métodos para análise dos enantiômeros do fármaco inalterado e de seus principais metabólitos em frações microssomais de homogeneizados de fígado de ratos e camundongos. Para tanto foram empregadas as técnicas de eletroforese capilar (CE) e de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). Inicialmente foi desenvolvido um método por HPLC, em uma etapa, para a quantificação dos enantiômeros de dois metabólitos da HCQ, desetilcloroquina (DCQ) e desetilhidroxicloroquina (DHCQ) em microssomas de fígado de ratos e camundongos. A separação foi efetuada utilizando-se a coluna Chiralpak AD-RH e hexano:isopropanol (92:8, v/v) acrescido de 0,1% de dietilamina como fase móvel. O procedimento de extração líquido-líquido foi utilizado para a preparação das amostras. A metodologia desenvolvida resultou na completa resolução dos enantiômeros da HCQ...

A apramicina é um antibiótico aminoglicosídeo produzido por uma cepa de Streptomyces Tenebrarius, utilizada na medicina veterinária na forma de sulfato para tratar e prevenir doenças infecciosas produzidas por bactérias gram-negativas em porcos, bezerros e aves domésticas. As preparações comercialmente disponíveis são injetável, premix para adição em rações e pó oral solúvel, sendo esta última objeto de estudo deste trabalho. A Farmacopéia Britânica é o único compêndio oficial que descreve a apramicina (tanto a matéria-prima quanto as preparações) e recomenda o método microbiológico turbidimétrico para o seu doseamento. Embora os métodos microbiológicos ainda sejam os métodos de escolha na determinação da potência de antibióticos, há uma tendência crescente em substituí-los pelos métodos físico-químicos, sobretudo a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), a qual proporciona sensibilidade, especificidade, exatidão e precisão; ela já vem sendo usada com sucesso na determinação do teor de antibióticos, embora a sua potência possa estar sujeita a confirmação por um método microbiológico. Considerando-se as vantagens da CLAE, bem como a inexistência de métodos físico-químicos oficiais para a análise de apramicina...

Foram desenvolvidas metodologias de cromatografia a líquido de fase reversa baseadas em injeção sequencial (SIC) e em cromatografia a líquido de alta eficiência (HPLC) para determinação de triclosan em amostras de produtos de higiene pessoal e em estudos de adsorção em argilominerais naturais e modificados, visando determinar parâmetros de adsorção de triclosan frente a alguns de seus metabólitos. A determinação de triclosan em enxaguadores bucais foi realizada por SIC com eluição isocrática usando fase móvel constituída por acetonitrila: tampão fosfato de trietilamina 70 mM pH 3,5 na proporção 70:30 (v v-1), obtendo-se limites de detecção e de quantificação de 0,22 e 0,72 mg L-1, respectivamente. Taxas de recuperação entre 96 e 98% foram obtidas da aplicação a amostras reais, sendo que os resultados obtidos pelo método proposto não apresentaram evidências de diferenças estatisticamente significativas em comparação a uma metodologia de referência baseada em HPLC com coluna empacotada. A separação de triclosan (TCS), 2-clorofenol (2-CP), 2,4-diclorofenol (2,4-DCP), 2,4,6-triclorofenol (2,4,6-TCP), 2,3,4-triclorofenol (2,3,4-TCP) e metiltriclosan (MTCS) foi estudada por SIC, obtendo-se a separação de TCS...

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); High-performance liquid chromatography/electrospray ionization mass spectrometry (HPLC/ESI-MS) and high-performance liquid chromatography/electrospray ionization tandem mass spectrometry (HPLC-ESI-MS/MS) techniques were applied for the detection, purification, monitoring, and sequencing of two novel and biologically active peptides occurring at very low levels in the venom of the wasp Agelaia pallipes pallipes. These peptides were sequenced under LC/ESI-MS/MS conditions and designated as Agelaia-CP (I/L-L-G-T-I-L-G-L-L-K-G-I/L-NH2, MW 1207.8Da) and Agelaia-MP (I/L-N-W-L-K-L-G-K-A-I-I-D-A-I/L-NH2, MW 1565.0Da). The peptide Agelaia-CP showed no hemolytic activity, but it behaved as a mast cell degranulator and induced a potent chemotaxis in polymorphonucleated leukocyte (PMNL) cells, typical of a wasp chemotactic peptide. The peptide Agelaia-MP showed both powerful mast cell degranulation and hemolysis of washed rat red blood cells, and is thus assigned as a new member of the mastoparan family of peptides. Both peptides seem to be directly involved in the strong inflammatory reactions associated with wasp stings. © Copyright 2004 John Wiley & Sons, Ltd.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP); Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); A reversed-phase high performance liquid chromatography method was validated for the determination of cefazolin sodium in lyophilized powder for solution for injection to be applied for quality control in pharmaceutical industry. The liquid chromatography method was conducted on a Zorbax Eclipse Plus C-18 column (250 Chi 4.6 mm, 5 mu m), maintained at room temperature. The mobile phase consisted of purified water: acetonitrile (60: 40 v/v), adjusted to pH 8 with triethylamine. The flow rate was of 0.5 mL min(-1) and effluents were monitored at 270 nm. The retention time for cefazolin sodium was 3.6 min. The method proved to be linear (r(2)= 0.9999) over the concentration range of 30-80 mu g mL(-1). The selectivity of the method was proven through degradation studies. The method demonstrated satisfactory results for precision, accuracy, limits of detection and quantitation. The robustness of this method was evaluated using the Plackett-Burman fractional factorial experimental design with a matrix of 15 experiments and the statistical treatment proposed by Youden and Steiner. Finally, the proposed method could be also an advantageous option for the analysis of cefazolin sodium...

Este trabalho apresenta o desenvolvimento de fases estacionárias (FE) para utilização em Cromatografia Líquida de Alta Eficiência em Fase Reversa (CLAE-FR) a partir da imobilização térmica de poli (2-fenilpropil) metilsiloxano (PFPMS) sobre suporte de sílica. Diferentes quantidades de copolímero foram avaliadas, alcançando-se um bom desempenho cromatográfico com uma carga polimérica de 50 % (m/m, polissiloxano/sílica). As melhores condições de temperatura e tempo para a imobilização do copolímero sobre o suporte por tratamento térmico foram: 140 ºC e 6 h, respectivamente. A extração do excesso de copolímero não imobilizado também foi otimizada, obtendo-se o melhor resultado com a utilização de clorofórmio por 3 horas, seguido de metanol por 2 horas, ambos a uma vazão de 1 mL min. A caracterização físico-química do suporte de sílica, copolímero e da FE através de análise elementar, espectroscopia de absorção na região do infravermelho e determinação da área superficial específica, volume e diâmetro de poros das partículas indicam a presença do copolímero sobre o suporte e a espectroscopia de ressonância magnética nuclear sugere que o copolímero se encontra sorvido e quimicamente ligado ao suporte de sílica. As FE preparadas com 50 % de PFPMS apresentaram aproximadamente 16...

Este trabalho apresenta o desenvolvimento de fases estacionárias (FE) para cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (CLAE-FR) e cromatografia com fluido supercrítico (CFS) a partir da imobilização térmica de poli(metiloctadecilsiloxano) (PMODS) sobre suportes de sílicas metalizadas com zircônio e titânio. O processo de imobilização térmica do PMODS foi otimizado aplicando-se planejamento composto central. O polímero, os suportes e as fases estacionárias foram caracterizados por testes físicoquímicos e cromatográficos. As fases estacionárias Si(PMODS), Si-Zr(PMODS) e Si-Ti(PMODS) apresentaram os melhores resultados quando foi aplicada a temperatura de 120 °C por 16 horas. As melhores FE foram submetidas ao processo de capeamento. Estas FE mostraram eficiências entre 82.000 e 90.000 pratos m e boas separações com picos simétricos para compostos apolares e picos com simetria adequada, segundo parâmetros estabelecidos pela Farmacopéia Americana (United States Pharmacopeia), para compostos polares, avaliados pelos testes de Engelhardt, Tanaka, Neue, SRM 870 e pelo modelo dos parâmetros de solvatação utilizando CFS. A presença do óxido metálico no suporte resultou em FE com maior estabilidade química em condições drásticas de fase móvel (pH 1...

In this study, a vortex-assisted three-phase hollow fiber liquid-phase microextraction (VA-HF-LPME) coupling with high performance liquid chromatography (HPLC) method was developed for determination of three synthetic endocrine disrupting compounds[EDCs, bisphenol-A (BPA), bisphenol-AF (BPAF) and tetrabromobisphenol-A (TBBPA)] in milk samples. Vortex provided effective and mild mixing of the sample solution and increased the contact between analytes and boundary layers of the hollow fibre, thereby enhancing mass transfer rate and leading to high extraction efficiency of the target analytes. The influencing parameters of VA-HF-LPME sample preparation method, such as organic solvents (acceptor phase), pH of sample solution (donor phase), sample volume, concentration of NaOH, extraction time, and ionic strength were systematically optimized. The instrumental calibration curves of BPA, BPAF and TBBPA show good linear relations (R² > 0.9988) in the concentration range of 0.5-200, 0.5-200 and 1.0-250 µg L-1, respectively. The relative standard deviations (RSD, n = 5) were 1.3-3.7%. The limits of detection (LOD, S/N = 3) were in the range of 0.16-0.35 µg L-1 and the limits of quantification (LOQ, S/N = 10) were in the range of 0.51-1.12 µg L-1. The proposed method was successfully applied to the extraction of EDCs in milk samples.

In the present study, a method using high performance liquid chromatography to quantify LSD, in blotter papers seized in Minas Gerais, was optimized and validated. Linearity, precision, recovery, limits of detection and quantification, and selectivity were the parameters used to evaluate performance. The samples were extracted with methanol:water (1: 1) in an ultra-sound bath. The linearity between 0.05 and 20.00 μg/mL (0.5 and 200.0μg of LSD/blotter) was observed with satisfactory mean intra and inter assay precision (RSDr = 4.4% and RSD R = 6.4%, respectively) and with mean recoveries of 83.4% and 84.9% to the levels of 1.00 and 20.00 μg/mL (10 and 200μg LSD/blotter). The limits of detection and quantification were 0.01 and 0.05 μg/mL, respectively (0.1 and 0.5 μg of LSD/blotter). The samples of blotters (n =22) were analyzed and the mean value of 67.55 μg of LSD/blotter (RSD=27.5%) was found. Thus, the method used showed satisfactory analytical performance, and proved suitable as an analytical tool for LSD determination in illicit samples seized by police forces.

A liquid-liquid extraction (LLE) combined with high-performance liquid chromatography-diode array detection method for simultaneous analysis of four chemically and structurally different antineoplastic drugs (cyclophosphamide, doxorubicin, 5-fluorouracil and ifosfamide) was developed. The assay was performed by isocratic elution, with a C18 column (5 µm, 250 x 4.6 mm) and mobile phase constituted by water pH 4.0- acetonitrile-methanol (68:19:13, v/v/v), which allowed satisfactory separation of the compounds of interest. LLE, with ethyl acetate, was used for sample clean-up with recoveries ranging from 60 to 98%. The linear ranges were from 0.5 to 100 µg mL-1, for doxorubicin and 1 to 100 µg mL-1, for the other compounds. The relative standard deviations ranged from 5.5 to 17.7%. This method is a fast and simple alternative that can be used, simultaneously, for the determination of the four drugs in plasma, with a range enabling quantification of the drugs in pharmacokinetics, bioequivalence and therapeutic drug-monitoring studies.

Following optimization of extraction, separation and analytical conditions, a rapid, sensitive and simple reverse-phase high performance liquid chromatography-photo diode array (HPLC-PDA) method has been developed for the identification and quantification of wedelolactone in different extracts of Eclipta alba. The separation of wedelolactone was achieved on a C18 column using the solvent system consisting of a mixture of methanol: water: acetic acid (95: 5: 0.04) as a mobile phase in isocratic elution mode followed by photo diode array detection at 352 nm. The developed method was validated as per the guidelines of the International Conference on Harmonization (ICH). Calibration curve presented good linear regression (r²>0.998) within the test range and the maximum relative standard deviation (RSD, %) values for intra-day assay were found to be 0.15, 1.30 and 1.1 for low (5 µg/mL), medium (20 µg/mL) and high (80 µg/mL) concentrations of wedelolactone. For inter-day assay the maximum RSD (%) values were found to be 2.83, 1.51 and 2.06 for low, medium and high concentrations, respectively. Limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) were calculated to be 2 and 5 µg/mL respectively. Analytical recovery of wedelolactone was greater than 95%. Wedelolactone in different extracts of Eclipta alba was identified and quantified using the developed HPLC method. The validated HPLC method allowed precise quantitative analysis of wedelolactone in Eclipta. alba extracts.

A reversed-phase high performance liquid chromatography method was validated for the determination of cefazolin sodium in lyophilized powder for solution for injection to be applied for quality control in pharmaceutical industry. The liquid chromatography method was conducted on a Zorbax Eclipse Plus C18 column (250 x 4.6 mm, 5 μm), maintained at room temperature. The mobile phase consisted of purified water: acetonitrile (60: 40 v/v), adjusted to pH 8 with triethylamine. The flow rate was of 0.5 mL min-1 and effluents were monitored at 270 nm. The retention time for cefazolin sodium was 3.6 min. The method proved to be linear (r2=0.9999) over the concentration range of 30-80 µg mL-1. The selectivity of the method was proven through degradation studies. The method demonstrated satisfactory results for precision, accuracy, limits of detection and quantitation. The robustness of this method was evaluated using the Plackett–Burman fractional factorial experimental design with a matrix of 15 experiments and the statistical treatment proposed by Youden and Steiner. Finally, the proposed method could be also an advantageous option for the analysis of cefazolin sodium, contributing to improve the quality control and to assure the therapeutic efficacy.

A simple and environmentally friendly microextraction technique was used for determination of chlorpheniramine (CPM), an antihistamine drug, in human urine samples using dispersive liquid-liquid microextraction (DLLME) followed by high performance liquid chromatography with diode array detection (HPLC-DAD). In this extraction technique, an appropriate mixture of acetonitrile (disperser solvent) and carbon tetrachloride (extraction solvent) was rapidly injected into the urine sample containing the target analyte. Tiny droplets of extractant were formed and dispersed into the sample solution and then sedimented at the bottom of the conical test tube by centrifugation. Under optimal conditions, the calibration curve was linear in the range of 0.055-5.5 µg mL-1, with a detection limit of 16.5 ng mL-1. This proposed method was successfully applied to the analysis of real urine samples. Low consumption of toxic organic solvents, simplicity of operation, low cost and acceptable figures of merit are the main advantages of the proposed technique.

A presença de resíduos de antibióticos no leite resulta da aplicação de diferentes substâncias antimicrobianas no gado leiteiro para o tratamento de infecções e uso profilático na prevenção de doenças e como aditivos adicionados à ração para promover o crescimento do animal. A utilização indiscriminada dos antibióticos pode estar associada à presença de resíduos no leite e em seus derivados acima dos Limites Máximos de Resíduos (LMR) permitidos. A demanda por um controle da qualidade deste produto levou a necessidade de métodos analíticos confiáveis que permitam avaliar o teor desses resíduos, visando garantir a qualidade dos alimentos, a segurança do consumidor e o reconhecimento mútuo a nível internacional. Esta pesquisa descreve o procedimento de validação intralaboratorial de um método para identificar e quantificar resíduos de anfenicóis e de treze antibióticos da classe dos B-lactâmicos em leite UHT e em pó integrais por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada ao espectrômetro de massas (CLAE/EM), de acordo com os critérios de validação preconizados pela Diretiva 2002/657/EC. Foram analisadas 475 amostras de leites integrais UHT e 140 em pó, perfazendo um total de 615 amostras. A coleta foi realizada pela Vigilância Sanitária dos estados de MG...

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); High-performance liquid chromatography/electrospray ionization mass spectrometry (HPLC/ESI-MS) and high-performance liquid chromatography/electrospray ionization tandem mass spectrometry (HPLC-ESI-MS/MS) techniques were applied for the detection, purification, monitoring, and sequencing of two novel and biologically active peptides occurring at very low levels in the venom of the wasp Agelaia pallipes pallipes. These peptides were sequenced under LC/ESI-MS/MS conditions and designated as Agelaia-CP (I/L-L-G-T-I-L-G-L-L-K-G-I/L-NH2, MW 1207.8Da) and Agelaia-MP (I/L-N-W-L-K-L-G-K-A-I-I-D-A-I/L-NH2, MW 1565.0Da). The peptide Agelaia-CP showed no hemolytic activity, but it behaved as a mast cell degranulator and induced a potent chemotaxis in polymorphonucleated leukocyte (PMNL) cells, typical of a wasp chemotactic peptide. The peptide Agelaia-MP showed both powerful mast cell degranulation and hemolysis of washed rat red blood cells, and is thus assigned as a new member of the mastoparan family of peptides. Both peptides seem to be directly involved in the strong inflammatory reactions associated with wasp stings. © Copyright 2004 John Wiley & Sons, Ltd.

Desenvolveu-se método rápido, sensível e simples de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência em fase reversa, utilizando-se arranjo de fotodiodo (HPLC-PDA), visando à separação, extração e às condições analíticas para a identificação e quantificação de wedelolactona em diferentes extratos de Eclipta alba. A separação de wedelolactona foi efetuada por meio de uma coluna C18, utilizando mistura de metanol:água:ácido acético (95:5:0.04) como fase móvel, em sistema de eluição isocrática, seguida de detecção por arranjo de fotodiodo a 352 nm. O método desenvolvido foi validado de acordo com as diretrizes da Conferência Internacional de Harmonização (ICH). As curvas de calibração apresentaram boa regressão linear (r²>;0,998), dentro dos intervalos de teste, e os valores máximos de desvio padrão relativo (RSD,%) dos ensaios intra-dia foram 0,15, 1,30 e 1,1 para concentrações de wedelolactona baixa (5 µg/mL), média (20 µg/mL) e elevada (80 µg/mL) Para o ensaio inter-dia,os máximos de RSD (%) foram 2,83, 1,51 e 2,06 para as concentrações baixa, média e alta, respectivamente. O Limite de Detecção (LD) e o Limite de Quantificação (LOQ) foram de 2 e 5 µg/mL, respectivamente. A recuperação analítica de wedelolactona foi maior do que 95%. A wedelolactona em diferentes extratos de Eclipta alba foi identificada e quantificada pelo método de HPLC desenvolvido. O método de HPLC validado permitiu a análise quantitativa precisa de wedelolactona em extratos de Eclipta alba.; Following optimization of extraction...

Um método de extração líquido-líquido (ELL) combinado com cromatografia líquida de alta eficiência-detector de arranjo de diodos foi desenvolvido para análise simultânea de quatro fármacos antineoplásicos quimicamente e estruturalmente diferentes (ciclofosfamida, doxorrubicina, fluoruracila e ifosfamida). O estudo foi realizado sob condições isocráticas, com coluna C18 (5µm, 250 x 4.6 mm) e fase móvel constituída por água pH 4.0-acetonitrila-metanol (68:19:13, v/v/v), que permitiu separação satisfatória dos analitos de interesse. A ELL, com acetato de etila, foi utilizada para limpeza da amostra, com recuperação variando de 60 a 98%. As faixas foram lineares de 0,5 a 100 µg mL-1 para doxorrubicina e 1 a 100 µg mL-1 para os outros compostos. O desvio padrão relativo variou de 5,5 a 17,7%. Este método é uma alternativa rápida e simples que pode ser usado, simultaneamente, para a determinação dos quatro fármacos em plasma, com uma faixa que permite quantificá-los em estudos de farmacocinética, bioequivalência e monitorização terapêutica.; A liquid-liquid extraction (LLE) combined with high-performance liquid chromatography-diode array detection method for simultaneous analysis of four chemically and structurally different antineoplastic drugs (cyclophosphamide...

Investigation of the Hummel and Dreyer method for the estimation of stability constants by high performance liquid chromatography (HPLC) is described. Comparison of the results obtained for binding of cimetidine (2a) and 2-(p-tolyl)ethylamine (2b) to β-c

High performance liquid chromatography and capillary gas chromatography were compared for simultaneous measurement of hyppuric and methyl hyppuric acids in urine of workers co-exposed to toluene and xilene. Quantitative advantages offered by HPLC over capillary GC method are observed: better average recovery, wider dynamic interval in calibration curve and lower detection and quantification limits mainly when MHA measurement was performed. No significant difference was found between the values of HA higher than 1.0 g/g creatinine measured by the two chromatographic procedures. Regarding to MHA concentration the methods gave similar results and there was no significant difference between the values.; O presente trabalho foi realizado objetivando-se comparar a eficiência de dois métodos analíticos, um por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e outro por cromatografia em fase gasosa com coluna capilar (CG), na determinação conjunta do ácido hipúrico (AH) e ácido metil-hipúrico (AMH) em urina de indivíduos expostos ocupacionalmente ao tolueno e xileno. Após a validação analítica foi observado que o método CLAE apresentou melhores precisão intra e interensaio, porcentagem de recuperação e sensibilidade. Amostras de urina de trabalhadores expostos aos dois solventes em fábrica de tintas-látex foram analisadas pelos dois métodos validados e os resultados avaliados estatisticamente. Não se encontrou diferença significativa entre os valores de AH superiores a 1...