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Estudo da imobilização de porfirinas em sílica nanoparticulada e da sua interação com oxigênio e ferro: possíveis aplicações biomédicas e analíticas; Study of the immobilization of porphyrins in silica nanoparticles and their interaction with oxygen and iron: possible biomedical and analytical applications

Silva, Paulo Rogerio da
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 17/12/2008 PT
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O presente estudo teve por objetivo desenvolver metodologias para imobilização de sondas moleculares fluorescentes em matrizes de sílica de tamanho controlado, bem como estudar a interação das sondas livres e imobilizadas com oxigênio e ferro. A classe de fluoróforos escolhida foi a das porfirinas, que apresentam baixa solubilidade em água e têm seu uso limitado, apesar de apresentarem pelo menos duas propriedades interessantes: (i) interagem com oxigênio formando oxigênio singlete, sendo candidatas a drogas para terapia fotodinâmica, e (ii) têm sua fluorescência suprimida ao complexarem metais, podendo atuar como sondas fluorescentes. A imobilização de porfirinas em esferas de sílica de tamanho inferior a 100 nm foi realizada através de um processo sol-gel ou pelo uso de microemulsões. O método sol-gel exigiu a modificação prévia da molécula da porfirina com reagente organosilano e resultou em esferas na faixa de 70 nm. O método da microemulsão dispensou a modificação da porfirina e resultou em esferas na faixa de 30 nm, muito estáveis em água. Os fluoróforos imobilizados preservaram suas propriedades óticas e a sua capacidade de gerar oxigênio singlete. Os estudos envolvendo a detecção de oxigênio singlete foram realizados pelo método físico direto...

Avaliação dos precursores da apoptose neuronal em preparados citosólicos, mitocondriais e nucleares do córtex cerebral frontal e hipocampo de porcos submetidos à hemodiluição normovolêmica aguda; Evaluation of neuronal apoptosis precursors in citosolic, mitochondrial and nuclear fraction of cerebral cortex and hipocamppus in pigs after acute normovolemic hemodilution

Frazilio, Fabrício de Oliveira
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 27/01/2012 PT
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Introdução: A anemia aguda tem sido associada com distúrbios neurofisiológicos e cognitivos em pacientes saudáveis. Evidências experimentais sugerem que a hemodiluição pode aumentar lesões cerebrais, limitando o suprimento de oxigênio ao tecido cerebral. No entanto, o mecanismo exato pelo qual as lesões cerebrais ocorrem em pacientes anêmicos ainda não está claramente definido. O objetivo desse estudo foi avaliar os precursores da apoptose neuronal Bax, Bcl-x no córtex frontal, atividade das caspases 3 e 9 na fração citosólica do hipocampo e na fração mitocondrial do córtex frontal, assim como a fragmentação do DNA na fração nuclear e mitocondrial do córtex frontal, após hemodiluição normovolêmica aguda. Métodos: Vinte e quatro porcos foram anestesiados e randomizados em 4 grupos de 6 animais: Controle, hemodiluição normovolêmica aguda (HNA) com hematócrito alvo de 15% (Ht 15%), HNA com hematócrito alvo de 10% (Ht 10%) e hipóxia-hipóxica (HH). A HNA foi realizada com 1ml de hidroxetil amido (130/0,4) por ml de sangue retirado, até o hematócrito alvo desejado (10 ou 15%). O HH consistiu de ventilação com baixa fração expirada de O2 (FiO2), sendo de 6% por 60 minutos, servindo como grupo controle positivo. Os animais do grupo controle não sofreram nenhuma dessas intervenções. As proteínas pró-apoptótica Bax e anti-apoptótica Bcl-x foram avaliadas por Western blotting nas frações nucleares e mitocondriais do córtex frontal. A atividade das caspases 3 e 9 foi avaliada nas frações mitocondrial e citosólica do hipocampo por espectrofluorometria. A fragmentação do DNA foi avaliada por eletroforese nas frações nuclear e mitocondrial do córtex frontal. Os dados foram comparados por análise de variância (ANOVA) seguida por teste de Tukey (p<0...

Caracterização dos efeitos inflamatorios induzidos pelo veneno bruto e pela LmTX-I de Lachesis muta muta (Surucucu) em ratos; Characterization of inflamatory effects induced by Lachesis muta muta (Surucucu) and LmTX-I in rats

Tatiane Ferreira
Fonte: Biblioteca Digital da Unicamp Publicador: Biblioteca Digital da Unicamp
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 18/08/2008 PT
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A habilidade do veneno bruto de Lachesis muta muta e da fosfolipase A2 básica (LmTX-I) de induzir aumento da permeabilidade microvascular na pata e pele de ratos foi investigada nesse trabalho. O veneno bruto ou LmTX-I foi injetado subplantar ou intradermicamente e o edema foi medido após intervalos de tempo específicos. O volume da pata foi medido usando um hidropletismômetro, enquanto o extravasamento na pele foi medido através do acúmulo de albumina humana marcada com 125I (injetada previamente i.v.) nos sítios de pele. A liberação de histamina dos mastócitos de ratos foi medida por espectrofluorometria. O veneno bruto (0,3-3 µg/pata) ou LmTX-I (0,1-1 µg/pata) induziu edema de pata de maneira dose-dependente. A injeção intradérmica do veneno bruto (0,003-10 µg/sítio) ou LmTX-I (0,003-0,3 µg/sítio) na pele dorsal também resultou em extravasamento de proteínas plasmáticas de maneira dose-dependente. O extravasamento plasmático induzido pelo veneno bruto foi significativamente diminuído pelo tratamento com mepiramina (antagonista de receptor H1, 6 mg/kg), ciproeptadina (antagonista H1 e 5-HT2, 2 mg/kg), LNAME (inibidor não seletivo da síntese de óxido nítrico, 100 nmol/sítio), SR140333 (antagonista de receptor NK1...

Detecção de lesões neoplásicas induzidas em mucosa oral de hamster utilizando espectroscopia de fluorescência

Silveira Junior,Landulfo; Paleckis,Laura Guimarães Pagliuso; Nicolau,Renata Amadei; Nogueira,Grazielle Vilela; Busanello,Rosane Zélia; Mardegan,Daniela Aparecida; Fonseca,Sonia Maria; Zângaro,Renato Amaro; Pacheco,Marcos Tadeu T.
Fonte: Associação Médica Brasileira Publicador: Associação Médica Brasileira
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/09/2004 PT
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OBJETIVO: Este trabalho teve por objetivo a utilização da técnica de espectroscopia de fluorescência induzida por laser para a caracterização de tecido normal e neoplásico em mucosa jugal de hamster, visando diagnosticar tecidos neoplásicos in vivo. MÉTODOS: O carcinógeno DMBA foi aplicado na bochecha direita de 31 hamsters com 150 ± 10g, três vezes por semana durante 12 semanas. Um animal foi mantido como controle (sem aplicação da droga). Após este período, os animais foram submetidos à espectroscopia de fluorescência induzida por laser de argônio (488nm), acoplado a um cabo de fibras ópticas. A autofluorescência do tecido foi guiada pelo cabo de fibras e analisada por um espectrógrafo e uma câmera CCD 1024X256 pixels, cobrindo a faixa espectral de 550nm a 700nm. Os espectros foram coletados na área da lesão induzida e na bochecha contralateral (normal) de todos os animais, além do animal de controle. Subseqüente à espectroscopia, foi realizada a biópsia da lesão para a análise histopatológica. Dois algoritmos de diagnóstico dos espectros de tecido neoplásico, baseados na razão entre regiões espectrais e na técnica de análise das componentes principais (PCA) foram implementados. RESULTADOS: Foi demonstrada a existência de um pico intenso na região de 630nm nos tecidos neoplásicos (atribuído à protoporfirina IX)...

Evaluación de las actividades antibacteriana y antisap de extractos de la parte aérea de Palicourea guianensis (Rubiaceae)

Bonilla Castañeda, Sandra Milena; Martínez Acosta, Jaime Alejandro
Fonte: Universidad Tecnológica de Pereira; Facultad de Tecnologías Publicador: Universidad Tecnológica de Pereira; Facultad de Tecnologías
Tipo: Tese de Doutorado Formato: PDF
ES
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En el presente trabajo se llevó a cabo la evaluación de las actividades antibacteriana y antiSAP (Proteinasa Aspártica Secretada) de Candida albicans de los extractos crudos de n-hexano, diclorometano, acetato de etilo y agua de la parte aérea de Palicourea guianensis; adicionalmente, se realizó un perfil fitoquímico por medio de espectrofotometría ultravioleta (UV) y pruebas características de determinados metabolitos secundarios. La determinación de la actividad antibacteriana se realizó por medio de la técnica de difusión en agar, frente a los microorganismos Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa y Bacillus cereus; los extractos no mostraron resultados positivos a las concentraciones evaluadas. La evaluación de la actividad antiSAP, se determinó mediante cuatro técnicas diferentes: Espectrofluorometría, HPLC, electroforesis SDS-PAGE y RT-PCR en tiempo real, mostrando porcentajes de inhibición del 50% con relación al control positivo, pepstatina A; siendo los más promisorios el extracto en diclorometano y el acuoso. También se estudió de la cinética de inhibición tanto enzimática como a nivel de expresión de genes usando las técnicas de fluorometría y RT-PCR en tiempo real, respectivamente.

La alfa hemolisina de Escherichia coli induce aumentos en el calcio citoplásmico de neutrófilos y monocitos humanos

García,Jorge
Fonte: Revista Costarricense de Ciencias Médicas Publicador: Revista Costarricense de Ciencias Médicas
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/06/2000 ES
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Leucocitos polimorfo-nucleares neutrófilos (PMN) y monocitos (MN) humanos fueron expuestos a la alfa hemolisina (AH) de Escherichia coli, y los cambios en calcio citoplásmico se evaluaron mediante espectrofluorometría, usando como indicador el fluorocromo fura 2, previamente incorporado a las células. La AH causó un aumento en el calcio citoplásmico, que fue proporcional a la dosis hemolítica, y que también se observó en células expuestas a los ionóforos de calcio ionomicina y 4 Br A23187. La quelación de calcio extracelular previno los incrementos en calcio citoplásmico inducidos por 2 HU50/ ml de AH; sin embargo, bajo estas condiciones, PMN expuestos a 5 µM de ionomicina mostraron una alza pequeña en fluorescencia, sugiriendo movilización de calcio citoplásmico; ello indica que la mayor parte del incremento en el calcio citoplásmico en respuesta a ionóforos y AH se debió al ingreso de calcio externo al citoplasma. La AH, así como el ionóforo de calcio A23187 y el péptido quimiotáctico FMLP, causaron liberación de mieloperoxidasa (MPO) al medio externo de PMN, lo que evidencia que el incremento en el calcio citoplásmico causó degranulación de éstas células.

Estandarización de un método espectrofluorométrico para medición de proteasa aspártica secretada (Sap) de Candida albicans

Ramírez Aristizábal,Luz Stella; Arias,Cristian Mauricio; Marulanda Osorio,Jackeline
Fonte: Revista Cubana de Farmacia Publicador: Revista Cubana de Farmacia
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/06/2014 ES
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Introducción: la proteasa aspártica secretada (Sap) es considerada un factor de virulencia en el proceso de infección por Candida albicans. La frecuencia de candidiasis a nivel mundial aumenta cada día, razón por la cual se hace necesario encontrar nuevos medicamentos que combatan esta enfermedad, al mismo tiempo desarrollar métodos que evalúen en forma rápida compuestos inhibidores de Sap. Objetivo: estandarizar un método fluorescente para identificar la inhibición de actividad de Sap. Métodos: se indujo la producción de Sap en cultivos de C. albicans según la metodología descrita por Capobiancoy se evaluaron sus niveles por electroforesis en geles SDS-PAGE en diferentes lapsos de tiempos. La actividad de Sap fue verificada por espectrofluorometría, para lo cual se determinaron las condiciones de reacción, variando las concentraciones de cobre y fluorexon, y los resultados de inhibición, se expresaron como disminución en la señal de fluorescencia. Como control de inhibición de Sap se utilizó Pepstatin A y como control positivo de actividad proteasa se utilizó pancreatina. Resultados: se establecieron concentraciones de 5,5 y 5,0 µM para fluorexon y cobre respectivamente; el tiempo óptimo de acoplamiento de estos fue de 120 min y la mayor actividad de Sap se alcanzó a las 22 h de incubación. Conclusiones: las condiciones estandarizadas para el método espectrofluorométrico...

Propranolol y sus ésteres: detección y resolución enantiomérica

Ruiz Caballero,Ritsie; Ávila González,Rizette; González Lavaut,José A
Fonte: Revista Cubana de Farmacia Publicador: Revista Cubana de Farmacia
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/08/1998 ES
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Se realizó una revisión bibliográfica sobre el racemato del clorhidrato de propranolol y sus ésteres, con el objetivo de recopilar los métodos más actuales para su detección y la resolución de su mezcla racémica, de forma que se mantengan informados los farmacéuticos, químicos sintetizadores y otros profesionales relacionados con la temática. Se consultaron las bases de datos MEDLINE (1986-1994), Analytical Abstracts (1985-1994), Chemicals Abstracts (1990-1992) y los Current Contents (Life Science y Physical, Chemical & Earth Sciences) desde 1990-1996. Se reportan como técnicas de análisis para su detección: espectrofluorometría, colorimetría, cromatografía de placa delgada y cromatografía líquida de alta resolución. Se reflejan diferentes métodos de resolución de enantiómeros, como: cromatografía de fluido supercrítico, electroforesis capilar, cromatografía de placa delgada y cromatografía líquida de alta resolución utilizando fases y/o aditivos quirales, empleados estos 2 últimos tanto para la detección como para la resolución del clorhidrato de propranolol y sus ésteres.

Peroxidación lipídica en embarazos con preeclampsia y diabetes

Reyna-Villasmil,Eduardo; Prieto-Franchi,Mary; Torres-Montilla,Marielys; Reyna-Villasmil,Nadia; Mejías-Montilla,Jorly
Fonte: Sociedad de Obstetricia y Ginecología de Venezuela Publicador: Sociedad de Obstetricia y Ginecología de Venezuela
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/06/2002 ES
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Objetivo: Evaluar el estrés oxidativo y el sistema de defensa antioxidante en embarazadas preeclámpticas no diabéticas, preeclámpticas diabéticas y diabetes de la gestación en relación con los niveles de glucosa sanguínea. Método: El estudio fue realizado en 83 mujeres. Un primer grupo que consistió de 25 mujeres con preeclampsia: 12 con diabetes y 13 sin diabetes. Un segundo grupo de 33 embarazadas normotensas de las cuales 8 tenían diabetes de la gestación y las restantes 25 eran embarazadas sanas. El grupo control lo integraban 25 mujeres sanas no embarazadas entre 18 y 40 años de edad. Las muestras de sangre venosa, heparinizadas se tomaron en la mañana después de 12 horas de ayuno. La peroxidación lipídica produce malonilaldehído que fue estimado por la prueba ácido tiobarbitúrico. Los niveles de vitamina E se estimaron por espectrofluorometría después de la extracción de la vitamina del plasma en hexano. Ambiente: Maternidad "Dr. Nerio Belloso" y Hospital Central "Dr. Urquinaona". Resultados: El malonilaldehído estaba aumentado en las preeclámpticas y en las preeclámpticas diabéticas cuando se comparó con los controles (P< 0,001). Los niveles de malonilaldehído fueron mayores en las preeclámpticas cuando se comparó con las preeclámpticas diabéticas (P< 0...