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Expressão, purificação e avaliação da proteína recombinante Nc56 de Neospora caninum para o sorodiagnóstico da neosporose bovina pelas técnicas de ELISA e Western-blotting; Expression, purification and evaluation of Neospora caninum recombinant protein Nc56 for neosporosis serodiagnosis by ELISA and Western-blotting

Ruiz, Vera Letticie de Azevedo
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 13/04/2007 PT
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66.56%
O Neospora caninum é um protozoário filogeneticamente relacionado a vários coccídeos de importância em medicina veterinária e humana, além de ser um parasita intracelular obrigatório capaz de causar abortamentos em bovinos e paralisia neuromuscular em cães. O estudo de antígenos e proteínas recombinantes de N. caninum gerou uma série de informações para um melhor diagnóstico e diferenciação deste protozoário e demais agentes a ele relacionados. No presente trabalho, propomos a expressão do clone do gene da proteína interna Nc56 de N. caninum em sistema procarioto (Escherichia coli), para avaliar sua antigenicidade frente a soros de bovinos imunoreativos contra Neospora caninum e Toxoplasma gondii. Para tanto, estabelecemos as condições ideais de expressão da proteína (indução por 4 horas e concentração de L-arabinose de 0,2%) e posteriormente avaliamos duas formas de purificação do produto recombinante (cromatografia de afinidade por metal imobilizado e eluição direta do gel de SDS-PAGE), constatando que a eluição de proteínas recombinantes diretamente do gel de SDS-PAGE mostrou-se o procedimento mais adequado para evitar a presença de proteínas contaminantes advindas do sistema procarioto de expressão. Foi selecionado um painel de soros bovinos (animais de campo)...

Diagnóstico de laboratório da sífilis adquirida e congênita e definição das fases clínicas da doença por western-blotting; Industrialization and evaluation of Western blotting method - WB Tp-IgG - as confirmatory for syphilis serology

Lemos, Elaine Antunes de
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 13/09/2002 PT
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66.53%
A sífilis adquirida e a congênita continuam aumentando e preocupando as autoridades sanitárias do mundo, ao verem que as metas estabelecidas para o seu controle estão longe de serem atingidas. Apesar dos esforços feitos na descoberta de novas ferramentas para o diagnóstico e monitoramento da sífilis, vemos um despreparo muito grande, principalmente entre os laboratoristas, em processar corretamente os reagentes disponíveis e melhor selecionar aqueles que apresentem qualidade para serem usados na rotina do laboratório. O que constatamos neste estudo é um espelho da realidade do diagnóstico da sífilis e mostra a dificuldade que os clínicos enfrentam ao receberem um laudo do laboratório. Trabalhando em colaboração com diferentes serviços e grupos de pesquisa, selecionamos aqueles que trabalhavam com: gestantes atendidas no pré-natal, doadores de sangue, pacientes infectados pelo HIV e pacientes de laboratório clínico e fizemos um estudo crítico da sorologia utilizada em cada serviço. Verificamos discrepância dos resultados obtidos nos testes não-treponêmicos VDRL e RPR, principalmente entre os soros de baixa reatividade, e nos treponêmicos FTA-abs, TPHA e ELISA. Decidimos aplicar o método de Western blotting e analisar o seu comportamento em todas as amostras de soros ensaiadas. Para obtenção de resultados reprodutíveis...

Tuberculose pulmonar: aumento da eficiência diagnóstica pela associação de métodos microbiológicos e imunológicos para pesquisa de anticorpos IgG anti - Mycobacterium tuberculosis por Western blotting e interferon-gama; Pulmonary tuberculosis: enhanced efficiency diagnostic combining microbiological and immunological methods to detect IgG anti Mycobacterium tuberculosis antibodies by Western blotting and interferon-gamma

Kanunfre, Kelly Aparecida
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 09/08/2007 PT
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66.67%
A tuberculose permanece como um dos maiores problemas de saúde pública mundial. O diagnóstico precoce e o tratamento rápido e eficiente dos indivíduos com tuberculose pulmonar ativa são medidas essenciais para a redução da morbidade, mortalidade e da incidência da tuberculose no mundo. As limitações encontradas nos métodos microbiológicos tradicionais, fizeram com que metodologias alternativas fossem desenvolvidas para melhorar o diagnóstico e o prognóstico da tuberculose humana. Neste trabalho verificamos o desempenho diagnóstico do Western blotting para pesquisa de anticorpos IgG anti - Mycobacterium tuberculosis, a utilização do teste QuantiFERON® - TB Gold e a detecção de moléculas de adesão celular (ICAM-1 e selectinas) como marcadores de prognóstico. Foram acompanhados até o final do tratamento 31 pacientes com tuberculose pulmonar diagnosticados por critérios clínicos e laboratoriais. Como controles, selecionamos população de indivíduos sadios, doadores de banco de sangue e indivíduos com outras pneumopatias. Os resultados mostraram que o Western blotting apresentou sensibilidade de 94% e especificidade de 96% no diagnóstico da tuberculose pulmonar, atendendo os requisitos da OMS para testes sorológicos. O QuantiFERON® - TB Gold apresentou sensibilidade de 83% e especificidade de 100%...

Estudo da presença de osteoaderina durante a ossificação intramembranosa e endocondral através de imunocitoquímica e Western Blotting; Study of the osteoadherin presence during the intramembranous and endochondral ossification by immunocytochemistry and western blotting analysis

Janones, Daniela Scarabucci
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 05/02/2010 PT
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66.58%
A osteoaderina (OSAD) tem sido identificada nos tecidos mineralizados, porém, seu papel na mineralização óssea não está claro. Foi feita uma comparação do momento em que a OSAD aparece na ossificação intramembranosa e endocondral, em relação aos estágios iniciais de mineralização. O osso parietal de fetos de ratos Wistar com 17, 18 e 21 dias e o côndilo mandibular de ratos com 30 dias foram removidos. A expressão de OSAD foi analisada por imunocitoquímica e Western blotting. Nos dois tipos de ossificação, a imunomarcação foi detectada nos osteoblastos; porém, na matriz extracelular a OSAD apareceu somente na fase fibrilar de mineralização, mantendo-se constante posteriormente. A análise por Western blotting revelou que os fetos com 17 dias continham pouco menos OSAD que os de 18 dias, enquanto a imunorreatividade diminuía nos fetos com 21 dias. Os resultados sugerem que a OSAD tem um papel na mineralização da matriz, atuando, provavelmente como organizadora de seu arcabouço ou retendo o mineral, além de exercer atividades de adesão entre os componentes da matriz.; Osteoadherin (OSAD) had been identified in mineralized tissues, but its specific role in mineralization remains unclear. The present study compared the appearance of OSAD at early stages of mineralization during both intramembranous and endochondral ossification. Parietal bone of 17...

Industrialização e avaliação do método de Western blotting - WB Tp-IgG - como confirmatório na sorologia da sífilis; Industrialization and evaluation of Western blotting method - WB Tp-IgG - as confirmatory for syphilis serology

Lemos, Elaine Antunes de
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 17/08/2007 PT
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66.53%
A sífilis adquirida e a congênita continuam aumentando e preocupando as autoridades sanitárias do mundo, ao verem que as metas estabelecidas para o seu controle estão longe de serem atingidas. Apesar dos esforços feitos na descoberta de novas ferramentas para o diagnóstico e monitoramento da sífilis, vemos um despreparo muito grande, principalmente entre os laboratoristas, em processar corretamente os reagentes disponíveis e melhor selecionar aqueles que apresentem qualidade para serem usados na rotina do laboratório. O que constatamos neste estudo é um espelho da realidade do diagnóstico da sífilis e mostra a dificuldade que os clínicos enfrentam ao receberem um laudo do laboratório. Trabalhando em colaboração com diferentes serviços e grupos de pesquisa, selecionamos aqueles que trabalhavam com: gestantes atendidas no pré-natal, doadores de sangue, pacientes infectados pelo HIV e pacientes de laboratório clínico e fizemos um estudo crítico da sorologia utilizada em cada serviço. Verificamos discrepância dos resultados obtidos nos testes não-treponêmicos VDRL e RPR, principalmente entre os soros de baixa reatividade, e nos treponêmicos FTA-abs, TPHA e ELISA. Decidimos aplicar o método de Western blotting e analisar o seu comportamento em todas as amostras de soros ensaiadas. Para obtenção de resultados reprodutíveis...

Estudo da resposta imunológica de anticorpos IgG, IgM e IgA, subclasses de IgG (IgG1 e IgG3) e avidez de IgG, por Western Blotting, em amostras de soros de pacientes com tuberculose pulmonar e comparação de resultados com métodos microbiológicos e dosagem de interferon-gama; Study of the immune response of IgG, IgM and IgA, IgG subclasses (IgG1 and IgG3) and IgG avidity by Western blotting in serum samples collected from patients with pulmonary tuberculosis and comparing results with microbiological methods and gamma interferon determination

Felix, Alvina Clara
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 29/04/2011 PT
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66.53%
Apesar das recomendações da Organização Mundial da Saúde, na reunião ministerial realizada em Amsterdam, Holanda em 2000, a tuberculose continua em ritmo crescente, atingindo principalmente os países em desenvolvimento e pessoas com o sistema imunológico comprometido, principalmente as infectadas pelo vírus da imunodeficiência adquirida. Os métodos utilizados no diagnóstico continuam os mesmos utilizados por muitos anos, cujas limitações impedem a ação rápida dos programas de saúde que buscam interromper a cadeia de transmissão da doença. Continuando uma linha de pesquisa do Laboratório de Soroepidemiologia e Imunobiologia do IMTSP, utilizando o método do Western Blotting, procuramos neste trabalho ampliar os conhecimentos da resposta imunológica de anticorpos em pacientes com tuberculose pulmonar, clinica e laboratorialmente definida, avaliando a participação das imunoglobulinas IgG, IgA e IgM, subclasses de IgG (IgG1 e IgG3) e a avidez da imunoglobulina IgG em amostras de soros colhidas no início e no final do tratamento. Nossos resultados mostraram que o melhor marcador imunológico foi a imunoglobulina IgG por apresentar melhor desempenho diagnóstico quando comparada com os resultados dos métodos microbiológicos e de dosagem de interferon gama...

Investigação dos níveis da proteína S100β (técnica de Western Blot) no líquor de cães com extrusão de disco intervertebral tóraco-lombar submetidos à eletroacupuntura; S100β Western blotting searching in cerebrospinal fluid of dogs with thoracolumbar intervertebral disk disease submitted by electroacupuncture treatment.

Hayashi, Ayne Murata
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 11/06/2010 PT
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56.4%
O tratamento da afecção de disco intervertebral tóraco-lombar com eletroacupuntura tem o objetivo de analgesia e reabilitação motora e sensorial. As melhoras funcionais observadas após lesão medular decorrem de fenômenos de plasticidade sináptica, correspondendo a um mecanismo compensatório e não de reparo estrutural. S100β é considerado um fator neurotrófico glial que pode estar relacionado a estas alterações. Durante o período de fevereiro de 2007 a junho de 2008 foi realizado um estudo clínico prospectivo em cães com extrusão de disco intervertebral (n=10) submetidos à eletroacupuntura (grupo EA) sem o uso de corticosteróides. Foram coletadas amostras de líquido cefalorraquidiano (LCR) destes animais em dois momentos: durante o exame de mielografia e/ou tomografia computadorizada (M1) e após 35.5±21.33 dias de tratamento (M2). Níveis de S100&beta foram investigados no LCR de cães do grupo EA através da técnica de Western blot. LCR de cães sem sinais neurológicos (grupo normal, n=7) foram utilizados para comparação. Para a análise estatística, com nível de significância de 5%, foram utilizadas ANOVA para medidas repetidas e medidas independentes e comparação múltipla de Bonferroni, teste t-Student para a comparação entre duas médias e correlação linear de Pearson para as variáveis quantitativas. Todos os animais do grupo EA...

Deglicosilação de antígenos de excreção-secreção de Toxocara canis e a sua aplicação no sorodiagnóstico da toxocaríase humana; Deglycosylation of the excretory-secretory antigens of Toxocara canis and their application for the serodiagnosis of human toxocariasis

Gonzales, William Henry Roldan
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 26/08/2014 PT
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46.53%
O sorodiagnóstico da toxocaríase humana é geralmente baseado na detecção de anticorpos IgG anti-Toxocara spp. em amostras de soro pelo teste ELISA utilizando os antígenos de excreção-secreção de larvas de T. canis (TES). No entanto, observa-se uma ocorrência de reatividade cruzada com outras helmintíases nas áreas endémicas de poliparasitismo. Vários estudos têm mostrado que as glicanas presentes nos antígenos dos helmintos podem ser as responsáveis pela reatividade cruzada. Neste estudo, avaliamos o efeito da deglicosilação dos antígenos TES na sensibilidade e especificidade dos testes de ELISA e Western-blotting para detecção de anticorpos IgG, IgM e IgE. Para a deglicosilação dos antígenos TES, estes foram tratados com diferentes concentrações de hidróxido de sódio (NaOH) ou metaperiodato de sódio (NaIO4) e foram testados 58 amostras de soro de pacientes com toxocaríase visceral, 75 amostras de soros de pacientes com outras helmintíases, e 95 amostras de soro de indivíduos saudáveis. Nossos resultados mostraram que os antígenos TES foram totalmente deglicosilados com NaOH 100mM por 4 horas a 37°C (dTES), enquanto que o tratamento com NaIO4 não gerou bons resultados. A sensibilidade e especificidade dos antígenos TES e dTES na detecção de anticorpos IgG pelo teste de ELISA foi de 100%...

Cross-reactions between Toxocara canis and Ascaris suum in the diagnosis of visceral larva migrans by western blotting technique

Nunes, Cáris Maroni; Tundisi, Regina Nardini; Garcia, José Fernando; Heinemann, Marcos Brayan; Ogassawara, Saemi; Richtzenhain, Leonardo José
Fonte: Universidade Estadual Paulista Publicador: Universidade Estadual Paulista
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 253-256
ENG
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66.41%
Visceral larva migrans (VLM) is a clinical syndrome caused by infection of man by Toxocara spp, the common roundworm of dogs and cats. Tissue migration of larval stages causes illness specially in children. Because larvae are difficult to detect in tissues, diagnosis is mostly based on serology. After the introduction of the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using the larval excretory-secretory antigen of T. canis (TES), the diagnosis specificity was greatly improved although cross-reactivity with other helminths are still being reported. In Brazil, diagnosis is routinely made after absorption of serum samples with Ascaris suum antigens, a nematode antigenicaly related with Ascaris lumbricoides which is a common intestinal nematode of children. In order to identify T. canis antigens that cross react to A. suum antigens we analyzed TES antigen by SDS-PAGE and Western blotting techniques. When we used serum samples from patients suspected of VLM and positive result by ELISA as well as a reference serum sample numerous bands were seen (molecular weight of 210-200 kDa, 116-97 kDa, 55-50 kDa and 35-29 kDa). Among these there is at least one band with molecular weight around 55-66 kDa that seem to be responsible for the cross-reactivity between T. canis and A. suum once it disappears when previous absorption of serum samples with A. suum antigens is performed.

Cross-Reactions between Toxocara canis and Ascaris suum in the diagnosis of visceral larva migrans by western blotting technique

NUNES,Cáris Maroni; TUNDISI,Regina Nardini; GARCIA,José Fernando; HEINEMANN,Marcos Brayan; OGASSAWARA,Saemi; RICHTZENHAIN,Leonardo José
Fonte: Instituto de Medicina Tropical Publicador: Instituto de Medicina Tropical
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/09/1997 EN
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66.31%
Visceral larva migrans (VLM) is a clinical syndrome caused by infection of man by Toxocara spp, the common roundworm of dogs and cats. Tissue migration of larval stages causes illness specially in children. Because larvae are difficult to detect in tissues, diagnosis is mostly based on serology. After the introduction of the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using the larval excretory-secretory antigen of T. canis (TES), the diagnosis specificity was greatly improved although cross-reactivity with other helminths are still being reported. In Brazil, diagnosis is routinely made after absorption of serum samples with Ascaris suum antigens, a nematode antigenicaly related with Ascaris lumbricoides which is a common intestinal nematode of children. In order to identify T. canis antigens that cross react to A. suum antigens we analyzed TES antigen by SDS-PAGE and Western blotting techniques. When we used serum samples from patients suspected of VLM and positive result by ELISA as well as a reference serum sample numerous bands were seen (molecular weight of 210-200 kDa, 116-97 kDa, 55-50 kDa and 35-29 kDa). Among these there is at least one band with molecular weight around 55-66 kDa that seem to be responsible for the cross-reactivity between T. canis e A. suum once it disappears when previous absorption of serum samples with A. suum antigens is performed

ANALYSIS OF Treponema pallidum RECOMBINANT ANTIGENS FOR DIAGNOSIS OF SYPHILIS BY WESTERN BLOTTING TECHNIQUE

SATO,Neuza Satomi; HIRATA,Mário H.; HIRATA,Rosário D.C.; ZERBINI,Lia Carmen M.S.; SILVEIRA,Edilene P.R.; MELO,Carmem Silvia de; UEDA,Mirthes
Fonte: Instituto de Medicina Tropical Publicador: Instituto de Medicina Tropical
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/03/1999 EN
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66.31%
Three GST fusion recombinant antigen of Treponema pallidum, described as GST-rTp47, GST-rTp17 and GST-rTp15 were analyzed by Western blotting techniques. We have tested 53 serum samples: 25 from patients at different clinical stages of syphilis, all of them presenting anti-treponemal antibody, 25 from healthy blood donors and three from patients with sexually transmitted disease (STD) other than syphilis. Almost all samples from patients with syphilis presented a strong reactivity with GST-rTp17 antigen. Some samples were non-reactive or showed a weak reaction with GST-rTp47 and/or GST-rTp15, and apparently there was no correlation with the stage of disease. There was no seropositivity among blood donors. No sample reacted with purified GST. We concluded that due to their specificity these recombinant antigens can be used as GST fusion protein for development of syphilis diagnostic assays.

Western blotting using Strongyloides ratti antigen for the detection of IgG antibodies as confirmatory test in human strongyloidiasis

Silva,Luciana Pereira; Barcelos,Ivanildes Solange da Costa; Passos-Lima,Andréia Barcelos; Espindola,Foued Salmen; Campos,Dulcinéa Maria Barbosa; Costa-Cruz,Julia Maria
Fonte: Instituto Oswaldo Cruz, Ministério da Saúde Publicador: Instituto Oswaldo Cruz, Ministério da Saúde
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/07/2003 EN
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66.31%
The present study was conducted to evaluate the frequency of antigenic components recognized by serum IgG antibodies in Western blotting (WB) using a Strongyloides ratti larval extract for the diagnosis of human strongyloidiasis. In addition, the WB results were compared to the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and the indirect immunofluorescence antibody test (IFAT) results. Serum samples of 180 individuals were analyzed (80 with strongyloidiasis, 60 with other intestinal parasitoses, and 40 healthy individuals). S. ratti was obtained from fecal culture of experimentally infected Rattus rattus. For IFAT, S. ratti larvae were used as antigen and S. ratti larval antigenic extracts were employed in WB and ELISA. Eleven S. ratti antigenic components were predominantly recognized by IgG antibodies in sera of patients with strongyloidiasis. There was a positive concordance for the three tests in 87.5% of the cases of strongyloidiasis. The negative concordance in the three tests was 94% and 97.5%, in patients with other intestinal parasitoses and healthy individuals, respectively. In cases of positive ELISA and negative IFAT results, diagnosis could be confirmed by WB. ELISA, IFAT, and WB using S. ratti antigens showed a high rate of sensitivity and specificity. In conclusion...

Standardisation of Western blotting to detect HTLV-1 antibodies synthesised in the central nervous system of HAM/TSP patients

Ribeiro,Luiz Claudio Pereira; Goncalves,Cassia Cristina Alves; Slater,Carla Maria Sena Andrade; Carvalho,Silvia Maia Farias de; Puccioni-Sohler,Marzia
Fonte: Instituto Oswaldo Cruz, Ministério da Saúde Publicador: Instituto Oswaldo Cruz, Ministério da Saúde
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/09/2013 EN
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56.26%
Intrathecal synthesis of human T-lymphotropic virus type 1 (HTLV-1) antibodies (Abs) represents conclusive evidence of a specific immune response in the central nervous system of HTLV-1 associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP) patients. Western blotting (WB) for HTLV Abs in serum is a confirmatory test for HTLV-1 infection. The aim of this study was to standardise the Western blot to demonstrate the intrathecal pattern of Abs against HTLV-1 proteins in HAM/TSP patients. Paired cerebrospinal fluid (CSF) and serum samples were selected from 20 patients with definite HAM/TSP, 19 HTLV-1 seronegative patients and two HTLV-1 patients without definite HAM/TSP. The presence of reactive bands of greater intensity in the CSF compared to serum (or bands in only the CSF) indicated the intrathecal synthesis of anti-HTLV-1 Abs. All definite HAM/TSP patients presented with an intrathecal synthesis of anti-HTLV-1 Abs; these Abs were not detected in the control patients. The most frequent intrathecal targets of anti-HTLV-1 Abs were GD21, rgp46-I and p24 and, to a lesser extent, p19, p26, p28, p32, p36, p53 gp21 and gp46. The intrathecal immune response against env (GD21 and rgp46-I) and gag (p24) proteins represents the most important humoral pattern in HAM/TSP. This response may be used as a diagnostic marker...

Evaluation of western blotting for the diagnosis of enzootic bovine leukemia

Gonzalez,E.T.; Oliva,G.A.; Norimine,J.; Cid de la Paz,V.; Echeverría,M.G.
Fonte: Universidade Federal de Minas Gerais, Escola de Veterinária Publicador: Universidade Federal de Minas Gerais, Escola de Veterinária
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/08/1999 EN
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66.31%
A western blotting (WB) procedure has been developed for detecting antibodies to bovine leukosis virus (BLV) in cattle sera. Two hundred and thirty three serum samples from naturally infected cattle with BLV virus and serial bleedings from experimentally BLV infected cows were used. An agar gel immunodiffusion test (AGID) was used for comparing with the results obtained by WB. The AGID positive sera showed a different degree of reactivity by WB test against the two most important viral antigens (gp51 and p24), or against one of them. Other proteins (gp30, p15, p12 and p10) were not detected with any AGID positive sera, being observed occasionally three bands corresponding to the p24 protein. Using sera obtained by BLV experimental inoculation, the antibodies directed to p24 appeared early (between the 2nd and 4th week post inoculation) and thereafter antibodies to gp51were detected in some animals. The analysis of field serum samples by AGID as compared to WB showed an agreement of 90.9%. Only 1.7% of sera were negative by AGID and positive by WB and 7.2% that were not conclusive by AGID and were defined by WB (4.2% as positive and 3.0% as negative).

Detection of IgA and IgM antibodies to HIV-1 in neonates by radioimmune western blotting.

Portincasa, P.; Conti, G.; Re, M. C.; Chezzi, C.
Fonte: PubMed Publicador: PubMed
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em 13/06/1992 EN
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46.59%
OBJECTIVE--To detect infection with HIV-1 by IgA and IgM response at birth in children born to HIV-1 seropositive mothers. DESIGN--Western blotting and radioimmune western blotting on stored sera from infected and uninfected babies born to HIV-1 seropositive mothers. Sera were pretreated to remove IgG. SETTING--Parma and Bologna, Italy. SUBJECTS--12 infected and five uninfected babies born to HIV-1 seropositive mothers and three babies born to seronegative mothers. MAIN OUTCOME MEASURES--Effectiveness of western blotting and radioimmune western blotting in detecting antibodies to HIV-1 gene products. RESULTS--With conventional western blotting we found IgA class antibodies to HIV-1 proteins in serum from three out of 12 infected children; in two of these three the serum was collected at age 3 months (positive controls). Radioimmune western blotting detected both IgA and IgM antibodies in serum from all infected children tested, whereas all serum from uninfected children born to seropositive and seronegative mothers showed no such antibodies. CONCLUSION--Although the technique should be tested on more patients, radioimmune western blotting seems to be a valuable tool for serological diagnosis of congenital HIV-1 infection at birth in neonates born to seropositive mothers.

P79-S Multiplex Detection of Non-Phosphorylated and Ser 9–Phosphorylated GSK3β Isoforms Using 2D Gel Electrophoresis and a Fluorescent-Based Western Blotting System

Nordvarg, H.; Edlund, S.
Fonte: The Association of Biomolecular Resource Facilities Publicador: The Association of Biomolecular Resource Facilities
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em /02/2007 EN
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46.61%
Western blotting systems are most commonly used after separation of proteins on one-dimensional (1D) SDS-PAGE gels. The fluorescent-based ECL Plex Western Blotting Detection System (GE Healthcare, Piscataway, NJ) provides sensitivity, linearity, and a dynamic range of nearly four orders of magnitude, as well as the possibility of multiplex analysis-detection of two protein epitopes on the same membrane simultaneously. Multiplexing is commonly used for quantitation of one protein relative to a protein of known abundance (housekeeping protein). It can also be used for the detection and quantitation of post-translational modifications such as phosphorylation, provided that there are antibodies available. In this study, a two-dimensional Western blotting approach was evaluated in addition to the traditional 1D workflow, using fluorescent secondary antibodies, namely the ECL Plex Western Blotting Detection System. Human PC-3U cell lysate was separated by 1D and 2D SDS-PAGE, followed by blotting and incubation with primary antibodies against non-phosphorylated and Ser 9-phosphorylated forms of glycogen synthase kinase-3 beta (GSK3β). ECL Plex CyDye Cy3- and Cy5-conjugated secondary antibodies were used for simultaneous detection of the non-phosphorylated and phosphorylated forms of GSK3β. The 1D Western blotting experiment showed that both the non-phosphorylated and phosphorylated forms of GSK3β could be detected in PC-3U cells without transforming growth factor beta (TGF-β) activation. The 2D Western blotting experiment gave information on phosphorylation states that could not be obtained by 1D Western blotting. A 48-kDa band corresponding to phosphorylated GSK3β in the 1D experiments was resolved into at least five distinct protein isoforms...

Western Blotting using Capillary Electrophoresis

Anderson, Gwendolyn J.; Cipolla, Cynthia; Kennedy, Robert T.
Fonte: PubMed Publicador: PubMed
Tipo: Artigo de Revista Científica
EN
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46.53%
A microscale Western blotting system based on separating sodium-dodecyl sulfate protein complexes by capillary gel electrophoresis followed by deposition onto a blotting membrane for immunoassay is described. In the system, the separation capillary is grounded through a sheath capillary to a mobile X-Y translation stage which moves a blotting membrane past the capillary outlet for protein deposition. The blotting membrane is moistened with a methanol and buffer mixture to facilitate protein adsorption. Although discrete protein zones could be detected, bands were broadened by ~1.7-fold by transfer to membrane. A complete Western blot for lysozyme was completed in about one hour with 50 pg mass detection limit from low microgram per milliliter samples. These results demonstrate substantial reduction in time requirements and improvement in mass sensitivity compared to conventional Western blots. Western blotting using capillary electrophoresis shows promise to analyze low volume samples with reduced reagents and time, while retaining the information content of a typical Western blot.

Western Blotting Inaccuracies with Unverified Antibodies: Need for a Western Blotting Minimal Reporting Standard (WBMRS)

Gilda, Jennifer E.; Ghosh, Rajeshwary; Cheah, Jenice X.; West, Toni M.; Bodine, Sue C.; Gomes, Aldrin V.
Fonte: Public Library of Science Publicador: Public Library of Science
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em 19/08/2015 EN
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46.57%
Western blotting is a commonly used technique in biological research. A major problem with Western blotting is not the method itself, but the use of poor quality antibodies as well as the use of different experimental conditions that affect the linearity and sensitivity of the Western blot. Investigation of some conditions that are commonly used and often modified in Western blotting, as well as some commercial antibodies, showed that published articles often fail to report critical parameters needed to reproduce the results. These parameters include the amount of protein loaded, the blocking solution and conditions used, the amount of primary and secondary antibodies used, the antibody incubation solutions, the detection method and the quantification method utilized. In the present study, comparison of ubiquitinated proteins in rat heart and liver samples showed different results depending on the antibody utilized. Validation of five commercial ubiquitin antibodies using purified ubiquitinated proteins, ubiquitin chains and free ubiquitin showed that these antibodies differ in their ability to detect free ubiquitin or ubiquitinated proteins. Investigating proteins modified with interferon-stimulated gene 15 (ISG15) in young and old rat hearts using six commercially available antibodies showed that most antibodies gave different semi-quantitative results...

Detecção de anticorpos IgG aos antígenos extratos solúveis (Ex) de larvas de Toxocara vitulorum pelo Western Blotting no colostro e no soro de vacas e bezerros búfalos; Detection of IgG antibodies to Toxocara vitulorum soluble larval extract (Ex) by Western Blotting in the colostrum and serum of buffalo cows and calves

Starke-Buzetti, Wilma Aparecida; Ferreira, Fabiano Pan
Fonte: Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Publicador: Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia
Tipo: info:eu-repo/semantics/article; info:eu-repo/semantics/publishedVersion; ; ; ; ; ; Formato: application/pdf
Publicado em 01/01/2005 ENG
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Toxocara vitulorum is a nematode parasite of the small intestine of cattle and water buffaloes, particularly buffalo calves between one and three months old, causing high morbidity and mortality. The purpose of this research was the characterization of soluble larval extract (Ex) antigen of T. vitulorum by Sds-page and Western blotting (WB) using immune sera and colostrum of buffaloes naturally infected by T. vitulorum. The parasitological status of the buffalo calves was also evaluated using sequential fecal examinations. The results showed that this antigen revealed eleven (11, 13, 16, 22, 25, 32, 43, 53, 68, 82 and 96 kDa) polypeptide bands by SDS-PAGE. Five polypeptide bands of higher molecular weight (43, 53, 68, 82 and 96 kDa) were recognized by sera and colostrum of all groups of infected animals when analyzed by WB. But only the fractions of 53, 68, 82, and 96 kDa that were more prominent persisted in the groups of buffalo calves during the beginning of the infection, at the peak of egg output, as well as during the period of rejection and post-rejection of T. vitulorum by the feces of the calves. On the other hand, sera of buffalo calves at one day old, after suckling the colostrum and at the beginning of infection, reacted with the same bands detected by serum and by colostrum of the buffalo cows.; Toxacara vitulorum é um nematódeo que acomete principalmente bezerros búfalos na faixa etária de um a três meses de vida...

Determinação urinária das proteínas albumina, ligadas à vitamina D e ao retinol, e de Tamm-Horsfall, em cães com doença renal crônica; Evaluation of urinary albumin, urinary vitamin D-binding protein, urinary retinol-binding protein, and Tamm-Horsfall in dogs with chronic kidney disease

Chacar, Fernanda Chicharo
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 23/09/2015 PT
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A proteína ligada à vitamina D (VDBP) é a principal responsável pelo transporte dos metabólitos da vitamina D e a sua presença na urina pode indicar lesão tubulointersticial, conforme observado em ratos e humanos. A determinação urinária da proteína ligada ao retinol (RBP), responsável por carrear o retinol do fígado para os tecidos periféricos, por sua vez, está associada à fibrose intersticial dos rins. A albuminúria pode estar relacionada a lesões glomerulares e/ou tubulares (não reabsorção). A proteína de Tamm-Horsfall (THP) normalmente é observada na urina, sendo sintetizada exclusivamente pelas células epiteliais da alça de Henle e do túbulo contornado distal, entretanto quando não detectada, pode indicar lesão nestes segmentos do néfron e/ou diminuição do número de néfrons. Em cães, há poucos estudos sobre as referidas proteínas na urina, especialmente nos casos de doença renal crônica (DRC). A hipótese deste estudo seria de que a avaliação da razão proteína:creatinina urinária (RPC) em cães com DRC per si não forneceria informações suficientes, pois não identificaria os segmentos dos néfrons comprometidos, mas que a determinação de proteínas específicas, pela análise conjunta da eletroforese e do Western blotting...