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4β-[4′-(1-(Aryl)ureido)benzamide]podophyllotoxins as DNA topoisomerase I and IIα inhibitors and apoptosis inducing agents

Kamal, Ahmed; Suresh, Paidakula; Ramaiah, M. Janaki; Reddy, T. Srinivasa; Kapavarapu, Ravi Kumar; Rao, Bolla Narasimha; Imthiajali, Syed; Reddy, T. Lakshminarayan; Pushpavalli, S. N. C. V. L.; Shankaraiah, Nagula; Pal-Bhadra, Manika
Fonte: Elsevier Publicador: Elsevier
Tipo: Artigo de Revista Científica
ENG
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36.9%
A series of 4β-[4′-(1-(aryl)ureido)benzamide]podophyllotoxin congeners (11a–l) were synthesized and evaluated for their cytotoxic activity against six human cancer cell lines. Some of the compounds like 11a, 11h, 11k and 11l showed significant anti-proliferative activity in Colo-205 cells and were superior to etoposide. The flow-cytometric analysis studies indicated that these compounds show strong G1 cell cycle arrest, as well exhibited improved inhibitory activities on DNA topoisomerase I and IIα enzymes. These compounds induce apoptosis by up regulating caspase-3 protein as observed by ELISA and Western blotting analysis. In addition, a brief structure–activity relationship studies within the series along with docking results of representative compounds 11a, 11h, 11k, 11l were presented.

Significance of topoisomerase III beta expression in breast ductal carcinomas: strong associations with disease-specific survival and metastasis

OLIVEIRA-COSTA, Joao Paulo; ZANETTI, Juliana; OLIVEIRA, Lucinei Roberto; SOARES, Fernando Augusto; RAMALHO, Leandra Zambelli; RAMALHO, Fernando Silva; GARCIA, Sergio Britto; RIBEIRO-SILVA, Alfredo
Fonte: W B SAUNDERS CO-ELSEVIER INC Publicador: W B SAUNDERS CO-ELSEVIER INC
Tipo: Artigo de Revista Científica
ENG
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37.21%
Topoisomerases are ubiquitous nuclear enzymes that regulate DNA structure in eukaryotic cells. The role of topoisomerase III beta, the newest member of the topoisomerase family, in the clinical outcome of breast cancer is still poorly understood. This study aims to investigate the immunoexpression of topoisomerase III beta in breast cancer and its relationships with clinicopathologic features and immunohistochemical markers of prognostic significance in breast pathology. Using tissue microarrays containing 171 cases of primary invasive breast cancer, we analyzed the immunoexpression of topoisomerase III beta, estrogen receptor, progesterone receptor, HER-2, BRCA-1, p53, and Ki67. Immunostaining for topoisomerase III beta was found in 33.9% of breast carcinomas, and immunopositivity was correlated with distant metastasis (P = .036) and death (P = .006). Decreased expression of topoisomerase III beta correlated with low expression of Ki67 (P < .001) and negativity for HER-2 (P < .001), BRCA-1 (P = .001), and p53 (P < .001). In the multivariate analysis, topoisomerase Hip expression was a significant predictor of survival (hazard ratio, 3.006 [95% confidence interval, 1.582-5.715]; P = .001). In conclusion, topoisomerase III beta expression can be a useful marker in assessing the prognosis of patients with breast cancer and is an independent predictor of survival. (C) 2010 Elsevier Inc. All rights reserved.; National Council for Scientific and Technological Development (CNPq)[470412/07-0]

Expressão da topoisomerase II alpha e do HER-2/neu como fatores preditivos de resposta clínica e patológica em pacientes com câncer de mama submetidas à quimioterapia neoadjuvante; Expression of topoisomerase II alpha and HER-2/neu as predictive factors to clinical and pathologic response of breast cancer patients submitted to neoadjvant treatment

Zola, Fábio Eduardo
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 22/05/2009 PT
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36.99%
O objetivo do estudo foi avaliar a importância da expressão das proteínas topoisomerase II alfa (topo II) e HER-2 como fatores preditvos da resposta à quimioterapia neoadjuvante e prognóstico em pacientes com câncer de mama nos estádio clínico II e III. Pacientes e métodos: 99 pacientes receberam quimioterapia neoadjuvante com docetaxel (75mg /m²) e epirrubicina (50 mg/m²) em infusão endovenosa no dia 1 a cada 3 semanas após terem sido submetidas a biópsia incisional. Foi complementado tratamento sistêmico com quimioterapia adjuvante com CMF ou FEC de acordo com o estado axilar avaliada após a cirurgia definitiva e/ou hormonioterapia de acordo com a avaliacãodos receptores hormonais. Avaliamos a taxa de resposta ao tratamento neoadjuvante e a influência da topo II alfa e do HER-2 na taxa de resposta à quimioterapia neoadjuvante bem comona sobrevida livre de doença e sobrevida global. Também foram avaliadas a expressão dos receptores hormonais. Resultados: a taxa de resposta clínica objetiva foi de 80,8 % com 9,1 % de resposta patológica completa. A expressão da topo II alfa nao apresentou significância nas taxas de resposta ou na sobrevida das pacietnes e nao houve correlação entre a expressão desta proteína e de HER-2. A superexpressão da proteína HER-2 foi associada com uma redução significante nas taxas de sobrevida livre de doença e sobrevida global (p= 0...

Estudo estrutural das enzimas Topoisomerase II Mitocondrial e Old Yellow Enzyme de Trypanosoma cruzi; Structural study of Mitochondrial Topoisomerase II and Old Yellow Enzyme from Trypanosoma cruzi

Rodrigues, Nathalia de Campos
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 17/01/2014 PT
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37.06%
Doenças tropicais negligenciadas compartilham características que permitem que elas persistam nas condições de pobreza, onde se aglomeram e se sobrepõe frequentemente. Mais de um bilhão de pessoas sofrem de uma ou mais doenças tropicais negligenciadas. Entre estas está a doença de Chagas, resultante da infecção pelo protozoário parasito hemoflagelado Trypanosoma cruzi, tendo insetos triatomíneos como vetores. Topoisomerases são enzimas envolvidas na regulação do superespiralamento do DNA resolvendo problemas topológicos associados com replicação, transcrição, recombinação e reparo. As topoisomerases do tipo II são essenciais para tripanossomatídeos por atuarem na replicação e organização do DNA contido em uma região especializada da mitocôndria denominada cinetoplasto. O estudo da Topoisomerase II Mitocondrial (TcTopoIImit) foi realizado através de análises sequenciais e estruturais de outras topoisomerases para a determinação de construções para a clonagem. As construções para o domínio N-terminal foram clonadas no vetor pTZ57R/T e subclonadas em vetores do sistema pET para expressão proteica em E. coli. Experimentos de expressão foram realizados em diferentes cepas, vetores, soluções tampão e outros parâmetros variáveis visando a obtenção dos produtos recombinantes na forma solúvel...

Expressão imuno-histoquímica da topoisomerase III? nos carcinomas mamários; Prognostic significance of topoisomerase III immunohistochemical expression in breast carcinomas

Costa, João Paulo Oliveira da
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 17/08/2010 PT
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37.32%
Topoisomerases são enzimas nucleares que participam na regulação da estrutura do DNA nas células eucarióticas. A topoisomerase III é o mais novo membro da família das topoisomerases. Seu papel no desenvolvimento dos tumores mamários ainda necessita ser investigado. O objetivo do presente estudo foi avaliar a imunoexpressão da topoisomerase III nos carcinomas mamários, e comparar sua expressão com dados clinicopatológicos e marcadores imunohistoquímicos clássicos de importância prognóstica nos carcinomas mamários. Utilizando-se tissue microarrays contendo 171 casos de carcinomas ductais mamários primários, foi analisada a expressão imunohistoquímica de topoisomerase III, receptor de estrógeno, receptor de progesterona, HER-2, Ki67, p53 e BRCA-1. Positividade para topoisomerase III foi encontrada em 33,9% dos casos, e sua expressão relacionou-se com metástases à distância (p=0.036) e óbito (p=0.006). Negatividade para topoisomerase III relacionou-se com negatividade para HER=2 (p<0.001), p53 (p<0.001) e BRCA-1 (p=0.001), e com baixa expressão de Ki-67 (p<0.001). Na Análise de Riscos Múltiplos de Cox, a expressão de topoisomerase III foi um significante preditor de sobrevida [razão de risco 3.006 (intervalo de confiança a 95%: 1.582-5.715); p=0.001]. Concluindo...

Topoisomerase ll-a e Her-2 em tumores malignos de mama e de ovário

Mano, Max Senna
Fonte: Universidade Federal do Rio Grande do Sul Publicador: Universidade Federal do Rio Grande do Sul
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
POR
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36.9%
Introdução. O receptor epidérmico humano 2 (Her-2) e a topoisomerase-IIα (T2A) são dois marcadores biológicos importantes, ambos tendo um valor prognóstico e preditivo potencial em pacientes com tumores sólidos. A amplificação dos genes Her- 2 e T2A são eventos independentes, embora o último seja mais frequente em tumores com amplificação do Her-2 (34-90%), do que em tumores sem amplificação do Her-2 (5-10%). Existe uma melhor correlação entre amplificação e superexpressão do Her-2 no câncer de mama (CM) do que em outros tumores. No entanto, no CM, a correlação entre amplificação e superexpressão da T2A tem sido inconsistente, e existe uma carência de tais dados em outros tipos de tumores. A expressão da proteína T2A tem mostrado uma boa correlação com o índice de proliferação tumoral, particularmente no CM. Objetivos. Artigo 1: Sintetizar o conhecimento atual sobre a importância dos marcadores Her-2 e T2A nos tumores sólidos. Artigo 2: Investigar a prevalência de amplificação e superexpressão do Her-2 e da T2A, a correlação entre estas variáveis e a correlação entre as variáveis e estágio clínico, em amostras de câncer de ovário (CO) fixadas em parafina. Artigo 3: Investigar a prevalência de amplificação da T2A...

Conjugation of human topoisomerase 2A with small ubiquitin-like modifiers 2/3 in response to topoisomerase inhibitors: cell cycle stage and chromosome domain specificity

Agostinho, Marta; Santos, Vera; Ferreira, Fernando; Cardoso, Joana; Costa, Rafael; Pinheiro, Inês; Rino, José; Jaffray, Ellis; Hay, Ronald; Ferreira, João
Fonte: American Association for Cancer Research Publicador: American Association for Cancer Research
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em 01/04/2008 ENG
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37.21%
Type 2 topoisomerases, in particular the A isoform in human cells, play a key role in cohesion and sister chromatid separation during mitosis. These enzymes are thus vital for cycling cells and are obvious targets in cancer chemotherapy. Evidence obtained in yeast and Xenopus model systems indicates that conjugation of topoisomerase 2 with small ubiquitin-like modifier (SUMO) proteins is required for its mitotic functions. Here, we provide biochemical and cytologic evidence that topoisomerase 2A is conjugated to SUMO-2/3 during interphase and mitosis in response to topoisomerase 2 inhibitors and ‘‘poisons’’ (ICRF-187, etoposide, doxorubicin) that stabilize catalytic intermediates (cleavage complexes, closed clamp forms) of the enzyme onto target DNA. During mitosis, SUMO- 2/3–modified forms of topoisomerase 2A localize to centromeres and chromosome cores/axes. However, centromeres are unresponsive to inhibitors during interphase. Furthermore, formation of topoisomerase 2A–SUMO-2/3 conjugates within mitotic chromosomes strongly correlates with incomplete chromatid decatenation and decreases progressively as cells approach the metaphase-anaphase transition. We also found that the PIASy protein, an E3 ligase for SUMO proteins...

Differential in vitro activity of the DNA topoisomerase inhibitor idarubicin against Trypanosoma rangeli and Trypanosoma cruzi

Jobe,Momodou; Anwuzia-Iwegbu,Charles; Banful,Ama; Bosier,Emma; Iqbal,Mubeen; Jones,Kelly; Lecutier,Suzanne J; Lepper,Kasimir; Redmond,Matt; Ross-Parker,Andrew; Ward,Emily; Wernham,Paul; Whidden,Eleanor M; Tyler,Kevin M; Steverding,Dietmar
Fonte: Instituto Oswaldo Cruz, Ministério da Saúde Publicador: Instituto Oswaldo Cruz, Ministério da Saúde
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/11/2012 EN
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36.9%
In this study the effect of eight DNA topoisomerase inhibitors on the growth Trypanosoma rangeli epimastigotes in cell culture was investigated. Among the eight compounds tested, idarubicin was the only compound that displayed promising trypanocidal activity with a half-maximal growth inhibition (GI50) value in the sub-micromolar range. Fluorescence-activated cell sorting analysis showed a reduction in DNA content in T. rangeli epimastigotes when treated with idarubicin. In contrast to T. rangeli, against Trypanosoma cruzi epimastigotes idarubicin was much less effective exhibiting a GI50 value in the mid-micromolar range. This result indicates that idarubicin displays differential toxic effects in T. rangeli and T. cruzi. Compared with African trypanosomes, it seems that American trypanosomes are generally less susceptible to DNA topoisomerase inhibitors.

Phaeophytins from Thyrsacanthus ramosissimus Moric. with inhibitory activity on human dna topoisomerase II-α

Cabral,Analúcia Guedes Silveira; Tenório-Souza,Fábio Henrique; Moura,Marcelo Dantas; Mota,Sabrina Gondim Ribeiro; Silva Lins,Antônio Cláudio da; Dias,Celidarque da Silva; Barbosa-Filho,José Maria; Giulietti,Ana Maria; Silva,Tania Maria Sarmento da;
Fonte: Sociedade Brasileira de Química Publicador: Sociedade Brasileira de Química
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/01/2012 EN
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36.76%
Our study reports the extraction and isolation of a new phaeophytin derivative 15¹-hydroxy-(15¹-S)-porphyrinolactone, designated anamariaine (1) herein, isolated from the chloroform fraction of aerial parts of Thyrsacanthus ramosissimus Moric. along with the known 15¹-ethoxy-(15¹-S)-porphyrinolactone (2). These compounds were identified by usual spectroscopic methods. Both compounds were subjected to in vitro (inhibitory activity) tests by means of supercoiled DNA relaxation techniques and were shown to display inhibitory activity against human DNA topoisomerase II-α at 50 µM. Interconversion of these two pigments under the mild conditions of the isolation techniques should be highly unlikely but cannot be entirely ruled out.

Neolignans from Licaria chrysophylla and Licaria aurea with DNA topoisomerase II-α inhibitory activity

Bezerra,Amanda de Melo; Lins,Antônio Cláudio da Silva; Athayde-Filho,Petrônio Filgueiras de; Silva,Marcelo Sobral da; Barbosa-Filho,José Maria; Camara,Celso Amorim; Silva,Tania Maria Sarmento; Luna,Vanessa da Silva; Santos,Creusioni Figueredo dos
Fonte: Sociedade Brasileira de Química Publicador: Sociedade Brasileira de Química
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/01/2012 EN
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37.06%
Seven natural neolignans isolated from Licaria chrysophylla and Licaria aurea along with five semisynthetic derivatives were tested for their inhibitory action on DNA-topoisomerase by relaxation assays on pBR322 plasmid DNA. All compounds tested showed strong inhibition at a concentration of 100 µM, while none showed activity between 5 and 70 µM. These results indicate that no obvious correlation can be derived between the structure of these compounds and their inhibitory effect on the DNA relaxation activity of topoisomerase II. This is the first report on DNA topoisomerase II inhibitors from Licaria chrysophylla and Licaria aurea leading to the identification of lignoids as topoisomerase II-α inhibitors.

Flavonoids from Annona dioica leaves and their effects in Ehrlich carcinoma cells, DNA-topoisomerase I and II

Vega,Maria R. G.; Esteves-Souza,Andressa; Vieira,Ivo J. C.; Mathias,Leda; Braz-Filho,Raimundo; Echevarria,Aurea
Fonte: Sociedade Brasileira de Química Publicador: Sociedade Brasileira de Química
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/01/2007 EN
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36.9%
Chemical investigation of methanol extract leaves from Annona dioica (Annonaceae) resulted in the identification of flavonoids kaempferol (1), 3-O-[3",6"-di-O-p-hydroxycinnamoyl]-beta-galactopyranosyl-kaempferol (2), 6"-O-p-hydroxycinnamoyl-beta-galactopyranosyl-kaempferol (3) and 3-O-beta-galactopyranosyl-kaempferol (4). The structures were unequivocally characterized by ¹H and 13C NMR spectroscopic analyses using 1D and 2D experiments. The cytotoxic effects of the flavonoids and flavonoid fraction (FF) were evaluated by MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay against Ehrlich carcinoma cells. The results indicated that 1, 2, 3 and FF exhibit significant antiproliferative action when compared to quercetin. The inhibitory action on DNA-topoisomerase I and II of all the flavonoids was evaluated by relaxation assays on pBR322 plasmid DNA. The results indicated the inhibitory and non-selective effects of the flavonoids on DNA-topoisomerase I and II.

Restoration of Topoisomerase 2 Function by Complementation of Defective Monomers in Drosophila

Hohl, Amber M.; Thompson, Morgan; Soshnev, Alexey A.; Wu, Jianhong; Morris, James; Hsieh, Tao-Shih; Wu, C.-ting; Geyer, Pamela K.
Fonte: Genetics Society of America Publicador: Genetics Society of America
Tipo: Artigo de Revista Científica
EN_US
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36.9%
Type II topoisomerases are essential ATP-dependent homodimeric enzymes required for transcription, replication, and chromosome segregation. These proteins alter DNA topology by generating transient enzyme-linked double-strand breaks for passage of one DNA strand through another. The central role of type II topoisomerases in DNA metabolism has made these enzymes targets for anticancer drugs. Here, we describe a genetic screen that generated novel alleles of Drosophila Topoisomerase 2 (Top2). Fifteen alleles were obtained, resulting from nonsense and missense mutations. Among these, 14 demonstrated recessive lethality, with one displaying temperature-sensitive lethality. Several newly generated missense alleles carry amino acid substitutions in conserved residues within the ATPase, Topoisomerase/Primase, and Winged helix domains, including four that encode proteins with alterations in residues associated with resistance to cancer chemotherapeutics. Animals lacking zygotic Top2 function can survive to pupation and display reduced cell division and altered polytene chromosome structure. Inter se crosses between six strains carrying Top2 missense alleles generated morphologically normal trans-heterozygous adults, which showed delayed development and were female sterile. Complementation occurred between alleles encoding Top2 proteins with amino acid substitutions in the same functional domain and between alleles encoding proteins with substitutions in different functional domains. Two complementing alleles encode proteins with amino acid substitutions associated with drug resistance. These observations suggest that dimerization of mutant Top2 monomers can restore enzymatic function. Our studies establish the first series of Top2 alleles in a multicellular organism. Future analyses of these alleles will enhance our knowledge about the contributions made by type II topoisomerases to development.

Estudo da Interação com o DNA e Inibição da Atividade Topoisomerase I de Derivados Tiazacridínicos e Imidazacridínicos

Lafayette, Elizabeth Almeida; Silva, Teresinha Gonçalves da (Coorientadora); Lima, Maria do Carmo Alves de (Orientadora)
Fonte: Universidade Federal de Pernambuco Publicador: Universidade Federal de Pernambuco
Tipo: Dissertação
BR
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37.11%
Muitos agentes terapêuticos essenciais no tratamento de diversas doenças atuam através da sua capacidade de interagir com o DNA. Esta interação pode muitas vezes levar à uma alteração nas propriedades estruturais e funcionais do DNA, o que influencia sobre suas funções fisiológicas e causa apoptose celular. Compostos com uma estrutura aromática policíclica, tais como acridina e seus derivados são conhecidos por interagir com o DNA e apresentar aplicações clínicas importantes, especialmente como antitumoral. Além de, atuarem através da inibição da atividade da enzima topoisomerase, bloqueando processos de replicação e transcrição do DNA, o que causa destruição das células. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo a síntese e caracterização de derivados tiazacridínicos e imidazacridínicos para estudo da ligação ao DNA e da inibição da topoisomerase I. Todos os compostos tiveram suas estruturas elucidadas e comprovadas por RMN1H, RMN13C, IV e LC-MS. A análise da ligação ao DNA foi realiza através da espectroscopia de absorção, fluorescência e dicroísmo circular e o estudo da topoisomerase por eletroforese em gel de agarose. Os espectros de Uv-vis, fluorescência e de dicroísmo circular mostraram que os derivados interagem com o DNA tanto por ligação externa quanto por intercalação...

Effect of topoisomerase inhibitors and DNA-binding drugs on the cell proliferation and ultrastructure of trypanosoma cruzi

Zuma, Aline Araujo; Cavalcanti, Danielle Pereira; Maia, Marina Correia Piqueira; Souza, Wanderley de; Motta, Maria Cristina Machado
Fonte: Inmetro - Instituto Nacional de Metrologia, Qualidade e Tecnologia Publicador: Inmetro - Instituto Nacional de Metrologia, Qualidade e Tecnologia
Tipo: Artigo de Revista Científica
ENG
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37.11%
8 p. : il.; Trypanosomatids present unusual organelles, such as the kinetoplast that contains the mitochondrial DNA arranged in catenated circles. The nucleus of these protozoa presents distinct domains during interphase as well as a closed mitosis.DNAtopoisomerases modulate the topological state ofDNAby regulating supercoiling of the double-stranded DNA during replication, transcription, recombination and repair. Because topoisomerases play essential roles in cellular processes, they constitute a potential target for antitumour and antimicrobial drugs. In this study, the effects of various topoisomerase inhibitors and DNA-binding drugs were tested on the cellular proliferation and ultrastructure of the Trypanosoma cruzi epimastigote form Blastocrithidia culicis was used as a comparative model, which has a more relaxed kinetoplast DNA (kDNA) organization. The results showed that the eukaryotic topoisomerase I inhibitors camptothecin and rebeccamycin were the most effective compounds in the arrest of T. cruzi proliferation. Of the eukaryotic topoisomerase II inhibitors, mitoxantrone, but not merbarone, was effective against cell proliferation. The prokaryotic topoisomerase II inhibitors norfloxacin and enoxacin targeted the kinetoplast specifically...

Dissection moléculaire de l’interaction de la DNA topoisomérase I avec la matrice extracellulaire et les fibroblastes

Beauchemin, Karine
Fonte: Université de Montréal Publicador: Université de Montréal
Tipo: Thèse ou Mémoire numérique / Electronic Thesis or Dissertation
FR
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36.99%
La sclérose systémique est une maladie autoimmune dont l’une des complications majeures est la fibrose. La DNA topoisomérase I (topo) est l’un des principaux autoantigènes associés à cette maladie. Toutefois, aucun lien n’a encore pu être établi entre la présence des anti-topo et le développement de la fibrose. Les travaux antérieurs du laboratoire d’accueil ont montré une interaction directe de la topo avec la surface des fibroblastes et la matrice extracellulaire. Nous avons voulu caractériser ces interactions du point de vue moléculaire. La topo a donc été exprimée sous forme de 5 fragments, déterminés à partir de ses principaux domaines structuraux et de ses épitopes majeurs, chez E. coli. Les fragments purifiés ont été analysés pour leur interaction avec l’héparine, représentant les héparane sulfates de la surface des fibroblastes, et avec des protéines purifiées de la matrice extracellulaire. Nous avons montré que le fragment topo-N est le principal responsable de l’interaction avec l’héparine, ce qui suggère donc l’implication potentielle de ce domaine dans l’interaction de la topo avec la surface des fibroblastes. Le fragment topo-DIDII est responsable de l’interaction avec la plupart des protéines de la matrice extracellulaire étudiées...

Kinetics of E. coli Topoisomerase I and Energetic Studies of DNA Supercoiling by Isothermal Titration Calorimetry

Xu, Xiaozhou
Fonte: FIU Digital Commons Publicador: FIU Digital Commons
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: application/pdf
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36.99%
In this thesis, on the basis of the asymmetrical charge distribution of E. coli topoisomerase I, I developed a new rapid procedure to purify E. coli DNA topoismoerase I in the milligram range. The new procedure includes using both cation- and anion-exchange columns, i.e., SP-sepharose FF and Q-sepharose FF columns. E. coli topoisomerase I purified here is free of nuclease contamination. The kinetic constants of the DNA relaxation reaction of E. coli DNA topoisomerase I were determined as well. I also used isothermal titration calorimetry to investigate the energetics of DNA supercoiling by using the unwinding properties of DNA intercalators, ethidium and daunomycin. After comparing the enthalpy changes of these DNA intercalators binding to supercoiled and nicked or relaxed plasmid DNA pXXZ06, I determined the DNA supercoiling enthalpy is about 12 kcal/mol per turn of DNA supercoil, which is in good agreement with the previously published results.

Caractérisation de l'interaction de l'auto-antigène ADN topoisomérase I avec les fibroblastes dans la sclérose systémique

Arcand, Julie
Fonte: Université de Montréal Publicador: Université de Montréal
Tipo: Thèse ou Mémoire numérique / Electronic Thesis or Dissertation
FR
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37.11%
La sclérose systémique (ScS) est une maladie auto-immune d’origine inconnue qui est caractérisée par des atteintes vasculaires, des dérèglements cellulaire et immunitaire. La majorité des patients atteints de ScS possède des auto-anticorps dirigés contre des protéines nucléaires. Ces auto-anticorps sont associés à des manifestations cliniques spécifiques favorisant la classification et le diagnostic de la ScS. Les anti-ADN topoisomérase I (antitopo) sont l’un des principaux auto-anticorps retrouvés dans la ScS. Ils sont associés à la forme la plus grave de la maladie, soit la forme diffuse. Celle-ci se caractérise par une importante fibrose progressant vers une atteinte viscérale. La fibrose résulte d’une production excessive et dérégulée de matrice extracellulaire par les fibroblastes. Bien que les anti-topo soient associés à un très mauvais pronostic et qu’ils corrèlent avec l’activité et la sévérité de la maladie, leur rôle dans la pathogenèse de la ScS n’est pas élucidé. Toutefois, depuis que certains auto-antigènes ont démontré des fonctions additionnelles lorsque retrouvés dans le milieu extracellulaire, leur contribution suscite un intérêt marqué. En effet, ces auto-antigènes...

Associação entre a expressão imunoistoquimica da topoisomerase II'alfa', HER2 e receptores hormonais e a resposta a quimioterapia primaria em pacientes com cancer de mama

Eliza Del Fiol Manna
Fonte: Biblioteca Digital da Unicamp Publicador: Biblioteca Digital da Unicamp
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 04/11/2005 PT
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37.21%
Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar a associação entre a expressão imunoistoquímica da topoisomerase IIa, HER2 e receptores hormonais e a resposta à quimioterapia primária baseada em antraciclina em carcinoma invasivo de mama. Materiais e Métodos: Analisamos 109 prontuários de pacientes tratadas com quimioterapia primária baseada em antraciclina no Centro Atenção Integral à Saúde da Mulher da Universidade Estadual de Campinas, no período de 1996 a 2004. As respostas clínica e patológica à quimioterapia primária foram associadas com a superexpressão da topoisomerase IIa e do HER2 e com a negatividade dos receptores hormonais. A análise estatística foi realizada através do teste qui-quadrado ou teste exato de Fisher. Resultados: A freqüência da superexpressão da topoisomerase II? foi de 41%. Não houve associação estatística entre a resposta clínica e a superexpressão da topoisomerase II?, do HER2 e negatividade dos receptores hormonais. Entretanto, houve associação entre a resposta completa patológica e a negatividade dos receptores hormonais (p=0,0289). Conclusões: O presente estudo sugere que esses marcadores não deveriam ser considerados fatores preditivos de resposta à quimioterapia primária com antraciclina...

Topoisomerase III-alpha in Double Holliday Junction Dissolution

Chen, Stefanie Lynn Hartman
Fonte: Universidade Duke Publicador: Universidade Duke
Tipo: Dissertação
Publicado em //2012
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36.9%

Topoisomerase IIIα (Top3α) is an essential component of the double Holliday junction (dHJ) dissolvasome complex in metazoans. Previous work has shown that Top3α and Bloom's helicase (Blm) are able to convergently migrate the dHJ to create solely non-crossover products, thus preserving genomic integrity. However, many questions remain about the details of this process. Using a combination of biochemical and genetic tools, including dHJ substrate assays, gel electrophoresis, EMSA, pulldowns, fly crosses, and electron microscopy, this work expands our knowledge of the dissolution reaction. Tail mutants of Top3α were created and tested in a series of in vitro assays. Through these experiments, I discovered that the C-terminus of Top3α is important for binding Blm, interacting with DNA, conveying RPA stimulation, and in vivo functionality. I also observed that dissolution is an extremely processive reaction, with no accumulation of intermediates prior to product formation. When a non-specific topoisomerase was used (Top1, a type IB), accumulation of an intermediate was evident; however, contrary to predicted models, direct observation revealed that this intermediate is not a hemicatenane structure and still requires branch migration. Modifications were also made to the dHJ substrate creation method so that multiple types of HJ substrates could be produced efficiently.

; Dissertation

Structural Dynamics and Novel Biological Function of Topoisomerase 2

Chen, Yu-tsung Shane
Fonte: Universidade Duke Publicador: Universidade Duke
Tipo: Dissertação
Publicado em //2015
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37.06%

Eukaryotic Topoisomerase 2 is an essential enzyme that solves DNA topological problems such as DNA knotting, catenation, and supercoiling. It alters the DNA topology by introducing transient double strand break in one DNA duplex as a gate for the passage of another DNA duplex. Two different aspects of studies about eukaryotic Topoisomerase 2 will be covered in this thesis. In the first half of the thesis, we investigated conformational changes of human Topoisomerase 2 (hsTop2) in the presence of cofactors and inhibitors. In the second half, we focused on an unknown regulatory function in the C-terminal domain (CTD) of Drosophila Topoisomerase 2 (Top2).

In the project of studying enzyme conformational changes, we adapted a previously developed methodology, Pulse-Alkylation Mass Spectrometry, with monobromobimane to study the protein dynamics of hsTop2. Using this method, we captured the evidence of conformational changes in the presence of ATP and Mg2+ or the Top2 inhibitor, ICRF-193 which were not previously observed. Last, by using CTD truncated hsTop2, the increasing reactivity of Cys427 suggested the CTD domain might be tethered adjacent to the core enzyme.

Following the study of enzyme conformational changes...