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Detecção do vírus da cinomose pela técnica de RT-PCR em cães com sintomatologia neurológica; Detection of canine distemper virus by RT- PCR from dogs with neurological signs

Amaral, Helena Arantes do
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 29/08/2007 PT
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46.38%
Diferentes amostras biológicas foram avaliadas (zaragatoa ocular, genital, urina e células mononucleares do sangue periférico) pela RT-PCR em 50 cães com sintomas neurológicos compatíveis como cinomose, na presença ou não de outros sintomas sistêmicos. O gene da nucleoproteína do vírus da cinomose foi detectado em 43 das 50 amostras avaliadas. Considerando apenas os animais com resultado positivos pela hemi-nested - PCR, os sintomas neurológicos observados com freqüência maior que 50%, foram mioclonia e alteração locomotora (maioria dos cães evoluiu a tetraparesia); convulsão e vocalização foram observados em 32% dos casos Outros sintomas sistêmicos, sintomas oculares, respiratórios ou digestivos, prévios ou associados aos sintomas neurológicos, foram observados em 82% dos cães. Também observou-se hiperqueratose nasal ou de coxins em 44% dos casos. Somente 20% dos animais positivos haviam sido vacinados contra o vírus da cinomose. Zaragatoas genitais forneceram maior número de resultados positivos (40), seguidos por zaragatoas oculares e urina (37) e células mononucleares do sangue periférico (34). A coleta associada de duas amostras biológicas (zaragatoa genital e urina) por animal aumentou a possibilidade de detecção de animais positivos...

Real time-pcr e nested-pcr no diagnóstico da tuberculose pulmonar; Real Time -PCR and NESTED-PCR to detect Mycobacterium tuberculosis in pulmonary samples

Rozales, Franciéli Pedrotti
Fonte: Universidade Federal do Rio Grande do Sul Publicador: Universidade Federal do Rio Grande do Sul
Tipo: Dissertação Formato: application/pdf
POR
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66.61%
A tuberculose (TB) é um importante problema de saúde pública, portanto, é necessário o desenvolvimento de novas ferramentas para a detecção rápida e confiável do Mycobacterium tuberculosis, prevenindo a transmissão da TB. O objetivo deste estudo foi avaliar dois testes moleculares para detecção de bactérias do Complexo Mycobacterium tuberculosis (MTBC) diretamente de amostras clínicas. Foi realizado um estudo transversal, no qual foram selecionadas 124 amostras respiratórias. As amostras foram avaliadas por dois testes moleculares “in house” para detecção do MTBC: NESTED-PCR (NPCR) e Real Time PCR (RT-PCR) ambos com primers para o IS6110. As amostras também foram avaliadas por um teste direto (pesquisa de BAAR). Os resultados foram comparados com a cultura para M.tuberculosis e também com os resultados da cultura juntamente com dados clínicos. Uma amostra comercial com quantificação de DNA conhecida foi utilizada para determinação do Limite de Detecção (LOD) dos testes moleculares. O LOD foi de 1 cópia/μL para o RT-PCR e de 25 cópias/μL para o NPCR. O BAAR apresentou baixa sensibilidade - SE - (40%) e alta especificidade - SP - (94%). Ambos os ensaios moleculares, apresentaram elevada SE e SP (RT-PCR 98% e 91%...

Adaptação e comparação das tecnicas de RT-nested-PCR e imuno-histoquimica no diagnostico do virus respiratorio sincicial bovino (BRSV)

Renata Servan de Almeida
Fonte: Biblioteca Digital da Unicamp Publicador: Biblioteca Digital da Unicamp
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 27/04/2004 PT
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66.58%
O Vírus Respiratório Sincicial Bovino (BRSV) é o agente etiológico de infecções respiratórias amplamente distribuídas e que produzem perdas importantes na criação comercial de bovinos. A infecção pelo BRSV produz alterações patológicas como bronquiolite e pneumonia intersticial e acomete, sobretudo, animais jovens. A limitada multiplicação do vírus em cultivos celulares e a sua instabilidade, representam dificuldades durante os procedimentos de isolamento do BRSV a partir de amostras clínicas. O presente trabalho teve como objetivo padronizar técnicas rápidas, sensíveis e específicas para a detecção do BRSV, utilizando um isolado brasileiro. Para tanto, foram utilizados camundongos Balb/c como modelo de infecção experimental pelo BRSV, a partir dos quais o vírus foi detectado pelas técnicas de RT-nested-PCR e imuno-histoquímica (IHQ) e os resultados foram comparados com aqueles obtidos em bovinos infectados experimentalmente. A técnica de RT-nested-PCR mostrou-se mais sensível para detecção do BRSV do que a técnica de IHQ, tanto para tecidos murinos quanto bovinos. As técnicas foram utilizadas em tecidos de bovinos suspeitos de infecção por BRSV. Uma destas amostras apresentou resultado positivo no RT-nested-PCR e na IHQ. O seqüenciamento dos produtos de PCR deste vírus detectado foi realizado. Esta nova estirpe...

Detecção da carga viral dos herpesvirus HHV-5 (citomegalovirus) e HHV-6 pela reação em cadeia da polimerase em tempo real e transcrição reversa acoplada a nested-PCR em pacientes receptores de transplante de celulas tronco hematopoieticas; Detection of herpesvirus HHV-5 (cytomegalovirus) and HHV-6 viral load by real time polymerase chain reaction and reverse transcription nested polymerase chain reaction in hematopoietic stem cell transplantation recipients

Claudia Raquel Cantarelli Costa
Fonte: Biblioteca Digital da Unicamp Publicador: Biblioteca Digital da Unicamp
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 31/08/2009 PT
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56.61%
O cytomegalovirus humano (HCMV) e o herpesvirus humano 6 (HHV-6) são β-herpesvirus com homologia superior a 67% e alta soroprevalência na população adulta. A infecção primaria por estes herpesvirus ocorre comumente na infância e é normalmente subclinica, ou pode causar mononucleose (HCMV) ou exantema súbito (HHV-6) sendo resolvidos na maioria dos casos sem complicações. Após a infecção primária os vírus permanecem no hospedeiro por toda vida podendo ser reativado de seu estado de latência em indivíduos adultos imunocomprometidos como os receptores de células tronco hematopoiéticas (TCTH). A reativação ou reinfecção por estes vírus causam serias complicações em pacientes submetidos ao transplante de células tronco hematopoiéticas como pneumonia intersticial, febre, gastroenterite, mielossupressão, encefalite e doença do enxerto contra o hospedeiro (GVHD). A reativação do HHV-6 após o transplante é associada com o desenvolvimento de infecções oportunistas, doença causada pelo citomegalovírus humano e possíveis episódios de rejeição aguda. Com efetivos tratamentos antivirais disponíveis, um monitoramento adequado destes vírus distinguindo entre latência e reativação é critico para estes pacientes. Monitoramos 30 pacientes submetidos à TCTH quanto a infecção ativa por HCMV e HHV-6 pelas técnicas de nested-PCR em soro e células...

Diagnosis of hepatitis C virus in Brazilian blood donors using a reverse transcriptase nested polymerase chain reaction: comparison with enzyme immunoassay and recombinant protein immunoblot assay

GONÇALES,Neiva S. L.; COSTA,Fernando F.; VASSALLO,José; GONÇALES JR.,Fernando L.
Fonte: Instituto de Medicina Tropical Publicador: Instituto de Medicina Tropical
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/10/2000 EN
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56.62%
Screening blood donations for anti-HCV antibodies and alanine aminotransferase (ALT) serum levels generally prevents the transmission of hepatitis C virus (HCV) by transfusion. The aim of the present study was to evaluate the efficiency of the enzyme immunoassay (EIA) screening policy in identifying potentially infectious blood donors capable to transmit hepatitis C through blood transfusion. We have used a reverse transcriptase (RT)-nested polymerase chain reaction (PCR) to investigate the presence of HCV-RNA in blood donors. The prevalence of HCV-RNA positive individuals was compared with the recombinant immunoblot assay (RIBA-2) results in order to assess the usefulness of both tests as confirmatory assays. Both tests results were also compared with the EIA-2 OD/C ratio (optical densities of the samples divided by the cut off value). ALT results were expressed as the ALT quotient (qALT), calculated dividing the ALT value of the samples by the maximum normal value (53UI/l) for the method. Donors (n=178) were divided into five groups according to their EIA anti-HCV status and qALT: group A (EIA > or = 3, ALT<1), group B (EIA > or = 3, ALT>1), group C (1<=EIA<3, ALT<1), group D (1<=EIA<3, ALT>1) and group E (EIA<=0.7). HCV sequences were detected by RT-nested PCR...

Diagnosis of Brazilian vesiculoviruses by reverse transcription-polymerase chain reaction

Bonutti,Daniela Wey; Figueiredo,Luiz Tadeu Moraes
Fonte: Instituto Oswaldo Cruz, Ministério da Saúde Publicador: Instituto Oswaldo Cruz, Ministério da Saúde
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/04/2005 EN
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56.47%
We describe a reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and a nested-PCR for diagnosis of Piry, Carajás, Cocal, and Alagoas vesiculoviruses from Brazil. The RNA extracts of viral and clinical samples were submitted to a RT-PCR using Vesiculovirus G primers that amplify part of the glycoprotein gene. The RT-PCR produced amplicons of expected size, 290 base pair, for the four studied viruses. The RT-PCR showed a high sensitivity being 151.3 times (2.18 log) more sensitive for the detection of Piry virus than the classical procedure for virus detection in tissue culture based on the viral cytophatic effect. Amplicons had nucleotides sequenced and were aligned in order to select internal primers for a nested-PCR to confirm the origin of Piry, Carajás, Cocal, and Alagoas Vesiculovirus. Ten blood and tarsal pad epithelial samples of infected Guinea-pigs had Vesiculovirus genome amplified by RT-nested-PCR.

Uso da técnica de swim-up para a remoção do Vírus da Artrite Encefalite Caprina do sêmen de reprodutores infectados

Ávila,A.A.; Síder,L.H.; Veras,A.K.A.; Pinheiro,R.R.; Oliveira,M.L.M.; Silva,P.A.F.; Sousa,S.D.; Andrioli,A.
Fonte: Universidade Federal de Minas Gerais, Escola de Veterinária Publicador: Universidade Federal de Minas Gerais, Escola de Veterinária
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/02/2015 PT
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66.4%
Neste estudo, 67 ejaculados foram avaliados, antes e depois da técnica de swim-up, em relação à qualidade seminal e à presença do CAEV. Das 67 amostras testadas por PCRn, antes do swim-up, 47 (70,15%) foram positivas para o DNA pró-viral. No entanto, quatro amostras adicionais foram positivas ao RT-nested PCR após o swim-up, o que permite dizer que, pelo menos, 76,12% (51/67) delas estavam infectadas antes da lavagem. Todavia, em 23,88% (16/67) das amostras não foi detectada a presença do CAEV. Após a aplicação da técnica de swim-up, constatou-se, pela PCRn e RT-nested PCR, que houve uma redução significativa (χ²= 9,078; p<0,001) da presença do CAEV nas amostras seminais, pois 28 de 51 amostras positivas resultaram livres do vírus (54,90%), tanto para DNA pró-viral quanto para o vírus livre. Em relação à motilidade individual progressiva (MIP) e vigor espermático obtidos antes e depois da técnica de swim-up, observou-se uma diminuição significativa em suas médias, sendo o MIP de 86,42% para 71,49%, já o vigor espermático de 4,16 para 3,93. Conclui-se que a eliminação do CAEV no sêmen é de caráter intermitente...

Isolation of an Intron-Containing Partial Sequence of the Gene Encoding Dermatophyte Actin (ACT) and Detection of a Fragment of the Transcript by Reverse Transcription-Nested PCR as a Means of Assessing the Viability of Dermatophytes in Skin Scales

Okeke, Charles N.; Tsuboi, Ryoji; Kawai, Masaaki; Hiruma, Masataro; Ogawa, Hideoki
Fonte: American Society for Microbiology Publicador: American Society for Microbiology
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em /01/2001 EN
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56.41%
An internal partial sequence of the gene encoding actin (ACT), 725 to 762 bp in length, was amplified by PCR from the genomic DNA extract of 12 species of dermatophytes and sequenced. An intron that is 56 to 93 bp in length was located along the ACT fragment of all of the dermatophytes at codon position 301 (−3) (a codon number followed by “−3” indicates that the intron directly follows the codon) with reference to the amino acid sequence of human α-smooth muscle actin. A primer pair that annealed to exon sequences flanking the ACT-associated intron produced a dermatophyte-specific 171-bp amplicon by reverse transcription-nested PCR (RT-PCR) of dermatophyte ACT mRNA. PCR primer pairs with antisense sequence based on the ACT intron sequence were species specific for dermatophytes, suggesting a potential for use in the identification of dermatophytes. The viability of dermatophytes in skin scales was subsequently assessed by the presence of ACT mRNA in total RNA extracted from a 48-h culture of scale samples in 250 μl of yeast carbon base broth. RT-nested PCR of dermatophyte-infected samples amplified an ACT fragment of the predicted size of 171 bp. The results of viability testing based on ACT mRNA detection by RT-nested PCR correlated with cultural isolation from skin scales. This method is a potential tool for rapidly assessing fungal viability in the therapeutic efficacy testing of antimycotics.

Detection of Astroviruses, Enteroviruses, and Adenovirus Types 40 and 41 in Surface Waters Collected and Evaluated by the Information Collection Rule and an Integrated Cell Culture-Nested PCR Procedure

Chapron, Christopher D.; Ballester, Nicola A.; Fontaine, Justin H.; Frades, Christine N.; Margolin, Aaron B.
Fonte: American Society for Microbiology Publicador: American Society for Microbiology
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em /06/2000 EN
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46.54%
We evaluated the use of an integrated cell culture-reverse transcription-PCR (ICC-RT-PCR) procedure coupled with nested PCR to detect human astroviruses, enteroviruses, and adenovirus types 40 and 41 in surface water samples that were collected and evaluated by using the Information Collection Rule (ICR) method. The results obtained with the ICC-RT-PCR–nested PCR method were compared to the results obtained with the total culturable virus assay–most-probable-number (TCVA-MPN) method, the method recommended by the U.S. Environmental Protection Agency for monitoring viruses in surface and finished waters. Twenty-nine ICR surface water samples were analyzed. Viruses were concentrated by using filter adsorption-beef extract elution and organic flocculation techniques, and then the preparations were evaluated for viruses by visualizing cytopathic effects in the Buffalo green monkey kidney (BGMK) cell line. In the ICC-RT-PCR–nested PCR technique we used Caco-2 cells to propagate astroviruses and enteroviruses (ICC step), and we used BGMK cells to propagate adenovirus types 40 and 41, as well as enteroviruses. Fifteen of the 29 samples (51.7%) were positive for astrovirus as determined by the ICC-RT-PCR–nested PCR method, and eight of these samples (27.5%) contained infectious astrovirus. Seventeen of the 29 samples (58.6%) were positive for enteroviruses when the BGMK cell line was used...

Duplex Reverse Transcription-PCR Followed by Nested PCR Assays for Detection and Identification of Brazilian Alphaviruses and Flaviviruses

Bronzoni, Roberta Vieira de Morais; Baleotti, Flávia Graciela; Ribeiro Nogueira, Rita Maria; Nunes, Márcio; Moraes Figueiredo, Luiz Tadeu
Fonte: American Society for Microbiology Publicador: American Society for Microbiology
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em /02/2005 EN
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46.34%
A new approach was developed for the rapid detection and identification of Brazilian alphaviruses and flaviviruses. The methodology involves the genus-specific detection of Alphavirus and Flavivirus by a duplex reverse transcription-PCR (D-RT-PCR), followed by multiplex nested PCR (M-N-PCR) or nested PCR (N-PCR) assays for species-specific identification. By this protocol, 25 arboviruses were specifically detected and identified. Detection levels between 101.3 and 103.5 50% tissue culture infective doses (TCID50)/ml of Flavivirus and Alphavirus strains were achieved by D-RT-PCR, and levels of <1 TCID50/ml were achieved by M-N-PCR assays. To assess the suitability and clinical application of this methodology, a total of 101 human or animal stored samples were analyzed. Results obtained suggest that this technique could be applied as a rapid diagnostic tool in clinical samples in which arbovirus infection is suspected and differential diagnosis is required, avoiding the need to test specimens by separate PCR methods.

Single-tube nested PCR using immobilized internal primers for the identification of dengue virus serotypes

Gomes, A. L. V.; Silva, A. M.; Cordeiro, M. T.; Guimarães, G. F.; Marques, E. T. A.; Abath, F. G. C.
Fonte: PubMed Publicador: PubMed
Tipo: Artigo de Revista Científica
EN
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56.5%
Molecular techniques based on the detection of genomic sequences by reverse transcription (RT)-PCR, nested PCR, or real-time PCR have made possible the rapid diagnosis of dengue virus (DENV) infections, and these approaches have been accepted by clinical laboratories as the new standard method for the detection of dengue virus in acute-phase serum samples. One of these PCR-based assays, the two-step RT nested PCR (RT-NPCR) technique is used routinely in laboratories worldwide. In the present study, the two-step RT-NPCR as described by Lanciotti and collaborators (1992) was adapted to a novel single-tube nested PCR (STNPCR) format, which is less prone to cross-contamination and reduces reaction cost and time. When standards for each dengue serotype were tested, the detection limit of the STNPCR was at least 10 copies for DENV-1 and 100 copies for DENV-2 and DENV-3, whereas the detection limit for the two-step RT-NPCR was 100 copies for each serotype. Sera from 22 patients with confirmed DENV-3 infections and from 14 healthy individuals were then tested in the STNPCR format using the system described by Lanciotti as the reference standard. The results indicated a sensitivity of 75.9% (CI 95%, 60.3–91.4) and a specificity of 100% for the RT-STNPCR. Athough RT-STNPCR was less sensitive than the conventional two-step RT-NPCR for the detection of virus in serum samples...

Detection of lymph node metastasis of oesophageal cancer by RT-nested PCR for SCC antigen gene mRNA

Kano, M; Shimada, Y; Kaganoi, J; Sakurai, T; Li, Z; Sato, F; Watanabe, G; Imamura, M
Fonte: Nature Publishing Group Publicador: Nature Publishing Group
Tipo: Artigo de Revista Científica
EN
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66.57%
With recent development in molecular biology, reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) has been applied to detect occult lymph node metastasis, but there have been few reports concerning oesophageal cancer. The objective of this study is to investigate the usefulness of the squamous cell carcinoma (SCC) antigen gene as a marker with RT-nested PCR to detect occult lymph node metastases of oesophageal cancer. The SCC antigen has been widely used as a serum tumour marker and was reported as a target gene to detect tumour cells in peripheral blood in cervical cancer. In this study, 620 lymph nodes from 14 oesophageal cancer patients were analysed. The results of RT-nested PCR were compared with that of pathological and immunohistochemical examinations. In the test of sensitivity, the RT-nested PCR detected 101of SCC antigen producing cells in 107peripheral blood mononucleocytes and was not found in 43 control lymph nodes. The pathological examination, immunohistochemical examination and the RT-nested PCR detected 36, 45 and 65 nodes respectively. The RT-nested PCR detected statistically more lymph nodes than the pathological or immunohistochemical examination. The sensitivity and specificity seem higher in squamous cell carcinoma cases. The SCC antigen gene is one of the more useful markers for RT-nested PCR to detect occult lymph node metastases of oesophageal cancer. © 2000 Cancer Research Campaign

Avaliação do RT-nested PCR como método de diagnóstico da artrite-encefalite caprina em cabritos com sintomatologia nervosa.

VERAS, A. K. A.; BRITO, R. L. L. de; RODRIGUES, A. de S.; SOUZA, K. C. de; OLIVEIRA, E. L.; ANDRIOLI, A.; SIDER, L. H.; PINHEIRO, R. R.
Fonte: In: ENCONTRO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA DA UNIVERSIDADE ESTADUAL VALE DO ACARAÚ, 7., 2010, Sobral. Iniciação para o semiárido: [Resumos]. Sobral: Universidade Estadual Vale do Acaraú, 2010. 1 CD ROM. Publicador: In: ENCONTRO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA DA UNIVERSIDADE ESTADUAL VALE DO ACARAÚ, 7., 2010, Sobral. Iniciação para o semiárido: [Resumos]. Sobral: Universidade Estadual Vale do Acaraú, 2010. 1 CD ROM.
Tipo: Resumo em anais de congresso (ALICE)
PT_BR
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66.14%
2010

Uso da técnica de swim-up para a remoção do vírus da artrite encefalite caprina e obtenção de espermatozoides viáveis.

ÁVILA, A. A.
Fonte: 2013. Publicador: 2013.
Tipo: Teses/dissertações (ALICE)
PT_BR
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66.72%
Os procedimentos de lavagem seminal associados a testes moleculares de alta sensibilidade para o diagnóstico do vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV), como a Nested PCR e a RT-nested PCR, podem ter um impacto significante na prevenção da transmissão de enfermidades e preservação do germoplasma de reprodutores portadores do CAEV, a fim de ser utilizado sem o risco de contaminação da fêmea por via reprodutiva. Nesse cenário, objetivou-se com o presente trabalho determinar a influência da técnica de swim-up sobre a viabilidade espermática e sua eficiência na remoção de partículas virais de amostras de sêmen de reprodutores caprinos portadores do CAEV. Nesse estudo, 67 ejaculados foram avaliados antes da técnica de swim-up, quanto ao volume, concentração, motilidade individual progressiva (MIP), vigor e a presença do DNA pró-viral do CAEV por Nested PCR. Após essa etapa, as amostras foram submetidas ao teste de swim-up seguido da retirada do sobrenadante, contendo os espermatozoides, para avaliação quanto à MIP e ao vigor, como também presença de formas pró-viral e RNA viral livre do CAEV pela Nested PCR e RT-nested PCR, respectivamente, para avaliar a influência do procedimento de lavagem seminal nos parâmetros seminais. Das 67 amostras testadas por Nested PCR...

Detection of an untyped strain of bovine respiratory syncytial virus in a dairy herd

Affonso, Ingrid Bortolin; Souza, Andressa de; Martini, Matheus Cavalheiro; Aparecida Bianchi dos Santos, Marcia Merces; Spilki, Fernando Rosado; Arns, Clarice Weis; Samara, Samir Issa
Fonte: Univ Estadual Londrina Publicador: Univ Estadual Londrina
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 2539-2549
ENG
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66.4%
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP); Processo FAPESP: 2010/15912-7; Processo FAPESP: 2010/06950-2; Bovine respiratory syncytial virus (BRSV) causes important lower respiratory tract illness in calves. According to F and G proteins genetic sequences, three BRSV subgroups have been reported and characterized in several countries, showing differences in its distribution. In Brazil, the virus is widely disseminated throughout the herds and the few characterized isolates revealed the solely occurrence of the subgroup B. This study describes the detection and characterization of an untyped BRSV strain from a twenty-days-old calf from a herd without clinical respiratory disease. Nasal swabs were analyzed by RT-nested PCR for the F and G proteins genes. One sample has amplified the F protein gene. Sequencing and subsequent phylogenetic reconstruction were accomplished, revealing that the strain could not be grouped with any other BRSV subgroups reported. This result may suggest that the BRSV is in constantly evolution, even in Brazil, where the vaccination is not a common practice. More detailed studies about BRSV characterization are necessary to know the virus subgroups distribution among the Brazilian herds to recommend appropriated immunoprophylaxis.; O vírus respiratório sincicial bovino (BRSV) é responsável por causar severa doença respiratória principalmente em bezerros. De acordo com sequências genéticas das proteínas F e G deste vírus...

Hepatite C em doadores de sangue : diagnostico pela reação de transição reversa e reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) e sua correlação com os testes imunoenzimatico (EIA) e imunoblot recombinante (RIBA)

Neiva Sellan Lopes Gonçales
Fonte: Biblioteca Digital da Unicamp Publicador: Biblioteca Digital da Unicamp
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 17/10/1997 PT
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46.46%
No Brasil, previne-se a transmissão por transfusão sangüínea do vírus da hepatite C com a triagem dos doadores de sangue realizada por meio da pesquisa do anti VHC pelo método de EIA e dosagem dos níveis séricos da ALT. A especificidade da triagem do anti-VHC por EIA, em populações de baixa soroprevalência, tem sido questionada. Assim, para avaliar-se a eficácia desta triagem, pesquisou-se a presença, com o uso da RT-PCR, do RNA viral em amostras de doadores de sangue, procurando-se, também, estabelecer as associações entre os resultados desta reação e os testes de EIA e RIBA. Procurou-se, ainda, detectar marcadores teciduais para o VHC, com a utilização de Um anticorpo monoclonal específico, pela técnica de imuno-histoquímica eimunofluorescência em cortes de tecido hepático parafinado. Foram estudadas 196 amostras de soro, coletadas no período de janeiro de 1994 a dezembro de 1995. Entre estas, 178 foram selecionadas de uma população de doadores de sangue voluntários do Centro de Hematologia e Hemoterapia da UNICAMP e, 18 de pacientes atendidos no Ambulatório do Grupo de Estudos das Hepatites da Disciplina de Doenças Infecciosas e Parasitárias da Faculdade de Ciências Médicas desta Universidade. Dos 178...

Evaluation of commercially available and in-house reverse transcription-PCR assays for detection of hepatitis G virus or GB virus C.

Forns, X; Tan, D; Alter, H J; Purcell, R H; Bukh, J
Fonte: PubMed Publicador: PubMed
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em /10/1997 EN
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46.57%
Serum samples from 96 Spanish hemodialysis patients, as well as serial dilutions of RNA extracted from a reference strain of hepatitis G virus (HGV), were tested for HGV or GB virus C (GBV-C) RNA. Two different reverse transcription (RT)-PCR-based methods of detection were compared for the ability to detect RNA extracted from the samples: an RT-nested PCR assay with primers derived from the 5' noncoding region (5'NC) or nonstructural region 3 (NS3) sequences and a commercially available RT-PCR assay with primers derived from the 5'NC or NS5A sequences. When RT-nested PCR was performed on 10-fold serial dilutions of RNA from the HGV reference strain, the last positive dilution was 10(-7) to 10(-8). With the commercial RT-PCR assay, the last positive dilution was 10(-6) to 10(-7). When equal amounts of RNA extracted from serum samples from 96 hemodialysis patients were tested for HGV or GBV-C RNA, 25 patients (26%) were positive by the RT-nested PCR. However, only 21 (84%) of these 25 positive patients were positive for HGV or GBV-C by the commercial RT-PCR assay. Analysis of the 5'NC and NS3 sequences amplified by RT-nested PCR demonstrated that all but two positive patients had unique HGV or GBV-C sequences. In summary, RT-nested PCR and a commercially available RT-PCR assay for HGV or GBV-C gave concordant results for 96% of the patients tested.

Distribution of Hepatitis C virus (HCV) genotypes in seropositive patients in the state of Alagoas, Brazil

Gonzaga,Rosa Maria S.; Rodart,Itatiana F.; Reis,Mitermayer Galvão; Ramalho Neto,Cícero Eduardo; Silva,Denise Wanderlei
Fonte: Sociedade Brasileira de Microbiologia Publicador: Sociedade Brasileira de Microbiologia
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/12/2008 EN
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66.28%
We determined the frequency of hepatitis C virus (HCV) genotypes in anti-HCV seropositive patients in the state of Alagoas, Brazil, by means of nested-reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-nested-PCR) followed by restriction fragment length polymorphism (RFLP) of amplified fragments of the 5´NCR. The nested-PCR with genotype-specific primers from the core region was carried out when detection was not possible by the first approach. Detectable HCV-RNA was present in 115 (74.7%) of 154 serum samples. Genotype 1 was the most frequent (77.4%), against 20.9% of genotype 3 and 0.8% of genotype 2. Subtype 1b was predominant (65.2%), followed by subtypes 1a (8.7%), and 3a (6.1%). Coinfection (1a/3a) was detected in 0.8% of the samples. Indeed, there was no significant differences in the prevalence of genotype 1 compared to what has been obtained from anti-HCV seropositive patients from other locations in Brazil. Here we report for the first time the genotype 2 in the state of Alagoas.

Estimation of vector propensity for Lettuce mosaic virus based on viral detection in single aphids

Moreno, Aránzazu; Bertolini, E.; Olmos, A.; Cambra, Mariano; Fereres, Alberto
Fonte: Conselho Superior de Investigações Científicas Publicador: Conselho Superior de Investigações Científicas
Tipo: Artículo Formato: 87731 bytes; application/pdf
ENG
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66.18%
12 pages, and figures, and tables.; Lettuce mosaic virus (LMV) is transmitted by aphids nonpersistently causing severe disease outbreaks in commercial lettuce crops. New strategies to control plant viruses have arisen based on molecular techniques, which analyze plantvirus- vector interactions. In this work, two PCR-based methods with a previous immunocapture phase, have been developed to detect LMV in single aphids. Detection rates using a RT-nested-PCR method in single aphids and transmission efficiency of Myzus persicae (vector species) and Nasonovia ribisnigri (nonvector species) were compared. Although the percentage of viruliferous aphids for N. ribisnigri (45.8 ± 2.3) was higher than for M. persicae (39.2 ± 3.5) after the same acquisition access period, N. ribisnigri was unable to transmit the virus while M. persicae proved to be an efficient vector (with a transmission rate per single aphid of 10.4 ± 0.8). A method was proposed to estimate vector propensity for nonpersistent viruses based on the relationship between the percentage of viruliferous aphids and their transmission ability. This methodology could be applied to decision-making and implementing control strategies to prevent virus spreading.; Peer reviewed

Vírus da cinomose canina: detecção do RNA viral pelo Nested RT-PCR em cães com diagnóstico clínico; Canine distemper virus: detection of viral RNA by Nested RT-PCR in dogs with clinical diagnosis

Alcalde, Rosana; Kogika, Marcia Mery; Fortunato, Vera A. Batistini; Lopes, Luciano Rodrigo; Paiva, Paulo Bandeira; Durigon, Edison Luiz
Fonte: Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Publicador: Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia
Tipo: info:eu-repo/semantics/article; info:eu-repo/semantics/publishedVersion; ; ; ; ; ; Formato: application/pdf
Publicado em 22/02/2013 ENG
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O vírus da cinomose canina (CDV) é um patógeno que afeta cães, causando doença grave e que pode levar a morte. Os cães infectados pelo CDV podem ser diagnosticados pela detecção do RNA utilizando-se a técnica de Nested-PCR. O presente estudo teve como objetivo avaliar o RNA do CDV no sangue, urina e saliva em cães com diagnóstico clínico de cinomose. A técnica de Nested-PCR foi capaz de detectar o RNA em diferentes tipos de amostras biológicas. Obteve-se um maior número de resultados positivos em amostras de urina.; Canine distemper virus (CDV) is a pathogen which affects dogs and causes severe disease leading to death. Dogs infected with CDV can be diagnosed by RNA detection by Nested PCR technique. The following study proposed to valuate CDV RNA in blood, urine and saliva samples. The Nested-PCR technique was able to detect CDV RNA in different types of biologic samples. The higher number of positive results was obtained in urine samples.