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Detection of bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) in formalin-fixed, paraffin-embedded bovine brain by nested PCR in Colombian cattle

Pedraza, Francisco J.; Alessi, Antonio C.; Barbosa-Stancioli, Edel F.
Fonte: Univ Antioquia, Fac Ciencias Agrarias Publicador: Univ Antioquia, Fac Ciencias Agrarias
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 292-298
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Fifteen cases of viral meningoencephalitis in Colombian cattle were tested by nested PCR analysis for the detection of bovine herpesvirus 5 (BoHV-5). All fatal cases had shown severe neurological signs and had occurred following natural outbreaks of the disease. The neurological infection was histologically characterized by mild to moderate inflammatory changes in the brain and cerebellum, including meningitis, mononuclear perivascular cuffing, gliosis, haemorrhage, and the presence of Gitter cells (macrophages) accompanying large areas of malacia. No intranuclear inclusion bodies were seen in any of the cases. Results from BoHV-5 molecular extraction analyses showed there were five positive cases thus confirming the presence of the virus in Colombia.; Quinze casos de meningoencefalite viral em gado bovino Colombiano foi analisado pela reação em cadeia da polimerasa (PCR) para a detecção do herpesvírus bovino 5 (BoHV-5). Todos os casos mostraram graves sinais neurológicos antes de morrer y aconteceram como surtos naturais da doença. A infecção neurológica foi caracterizada histologicamente por leves a moderados câmbios inflamatórios no cérebro e cerebelo, incluindo meningite, manguitos perivasculares, gliose, hemorragia e a presencia de células gitter (macrófagos) acompanhando grandes áreas de malacia. Não se encontraram corpos de inclusão intranucleares em nenhum dos casos. Os resultados da análise da extração molecular do BoHV-5 por PCR revelaram a existência de cinco casos positivos...

Aspectos clínicos e laboratoriais em ovinos submetidos a dietas com níveis elevados de enxofre com objetivo de indução de polioencefalomalácia

Delfiol, Diego J.Z.; Cagnini, Didier Q.; Cunha, Paulo H.J.; Crosignani, Nadia; Wouters, Angélica T.B.; Wouters, Flademir; Driemeier, David; Borges, Alexandre Secorun
Fonte: Colégio Brasileiro de Patologia Animal - CBPA Publicador: Colégio Brasileiro de Patologia Animal - CBPA
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 435-442
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A polioencefalomalacia (PEM) é uma doença neurológica que acomete ruminantes e pode ser desencadeada por diversos fatores, dentre eles o consumo excessivo de enxofre. Este trabalho teve como objetivo verificar a relação entre dietas ricas em enxofre, altos níveis de gás sulfídrico ruminal e a ocorrência de polioencefalomalácia em ovinos. Foram utilizados 18 ovinos, divididos em três grupos (G1, G2 e G3) que receberam diferentes níveis de enxofre na dieta; 0,2%, 0,9% e 1,2%, respectivamente. Exames físicos (frequência cardíaca, frequência respiratória, temperatura retal e motricidade ruminal) e complementares (concentração de sulfeto de hidrogênio ruminal, hemogasometria venosa, pH do fluído ruminal, concentração de cobre sérico e hepático, tomografia computadorizada, necropsia e histopatologia) foram realizados. A temperatura retal, a hemogasometria venosa e o pH do fluido ruminal permaneceram dentro dos valores de referência para a espécie. A motricidade ruminal estava diminuída nos grupos G2 e G3 em comparação com o G1 (controle). Quanto maior a ingestão de enxofre, menores foram os níveis de cobre sérico e hepático. Valores elevados de sulfeto de hidrogênio ruminal foram detectados nos grupos G2 e G3. Nenhum animal apresentou sinais clínicos de PEM. Nos exames de tomografia computadorizada...

Surto de polioencefalomalacia por ingestão excessiva de enxofre na dieta em bezerros no Rio Grande do Sul

Cunha, Paulo H.J. da; Bandarra, Paulo M.; Dias, Marcelo M.; Borges, Alexandre Secorun; Driemeier, David
Fonte: Colégio Brasileiro de Patologia Animal - CBPA Publicador: Colégio Brasileiro de Patologia Animal - CBPA
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 613-617
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Neste trabalho descreve-se surto de polioencefalomalacia em bovinos decorrente da ingestão de dieta com excessiva concentração de enxofre em uma propriedade no Rio Grande do Sul. O lote era composto por 30 bezerros, mantidos em um piquete com azevém (Lolium multiflorum) e suplementados com ração e sal mineral. Seis bezerros morreram e dois deles foram necropsiados; amostras de tecido hepático para dosagem de chumbo e fragmentos do sistema nervoso central para histopatológico foram colhidos. Um dos bezerros foi examinado antes da morte e sinais neurológicos encefálicos foram constatados. Foi estabelecido o teor de enxofre nos componentes da dieta e água, a produção de sulfeto de hidrogênio ruminal em cinco bovinos do mesmo lote e realizada PCR de um bloco de parafina para detecção de DNA do herpevirus bovino tipo 5. O consumo total de enxofre foi de 0,38% da matéria seca fornecida aos animais e as dosagens de sulfeto de hidrogênio ruminal em animais do mesmo lote variaram de 1.000 a 2.500ppm. Os achados histopatológicos indicaram necrose laminar do córtex cerebral. Não foi detectado chumbo na amostra de tecido hepático e não foi identificado DNA do herpesvirus bovino tipo 5 no encéfalo. O quadro clínico de síndrome cerebrocortical associado aos elevados valores do sulfeto de hidrogênio ruminal...

Estudo retrospectivo de 19 casos de polioencefalomalácia, em bovinos, responsivos ao tratamento com tiamina

Mendes, L. C. N.; Borges, Alexandre Secorun; Peiró, J. R.; Feitosa, Francisco Leydson Formiga; Anhesini, C. R.
Fonte: Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG), Escola de Veterinária Publicador: Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG), Escola de Veterinária
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 239-241
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Nineteen bovines of both sexes aging from 5 month-old to 5 year-old, were referred to a veterinary hospital. Clinical signs were observed from 6 hours to 10 days before. Thirteen animals were found in permanent lateral recumbency, five showed motor incoordination, 15 were exclusively fed on grass pasture, three showed partial loss of visual acuity, 14 were blindness, 16 showed presence of normal pupillary reflex, 16 decreased ruminal motility, 14 decreased sensorium (depression, semicoma or coma) and eight showed opisthotonos. Dehydration and dried feces were directly related to the time of evolution of the process. All the animals were administrated vitamin B1 and showed a marked improvement of the clinical status within 4 to 48 hours after treatment. The longer the time between the onset of the clinical signs and treatment, the greater the delay for the restoration of the vision. The treatment was very effective for a rapid response of the animal.

Descripción inmunohistoquímica de la encefalitis en bovinos brasileños naturalmente infectados con el herpesvirus bovino tipo 5 (HVB-5)

Pedraza, F. J.; Schild, A. L.; Alessi, A. C.
Fonte: Universidade Estadual Paulista Publicador: Universidade Estadual Paulista
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 69-75
SPA
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Twelve cases of viral meningoencephalitis in Brazilian cattle were submitted to immunohistochemical analysis for inflammatory response description. All the cases showed severe neurological signs followed by death. Mild to moderate histological inflammatory changes in the brain and cerebellum characterized the neurological infection showing meningitis, mononuclear perivascular cuffing, gliosis, haemorrhage, and macrophages (gitter cells) accompanying great areas of malacia. None of the cases showed intranuclear inclusion bodies. However, in five of them it was possible to isolate the BoHV-5. In order to collect data to allow the description of the inflammatory response in these cases, brain samples from all of the cases were analyzed by immunohistochemistry using polyclonal antibodies against CD3 to detect T cells, and against GFAP to detect astrocytes. On the other hand, monoclonal antibodies were used against BLA to detect B cells and, against MAC 387 to detect macrophages. The results indicate different degrees of prominent astrocytic response, and at the same time, T lymphocytes constituted a high percentage of the mononuclear cells which characterized the inflammatory response.

Indução experimental de polioencefalomalacia em ovinos confinados ingerindo dieta com alto teor de enxofre

Delfiol, Diego José Zanzarini
Fonte: Universidade Estadual Paulista (UNESP) Publicador: Universidade Estadual Paulista (UNESP)
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: 83 f.
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Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP); Pós-graduação em Medicina Veterinária - FMVZ; Em ovinos o excesso de enxofre na dieta é apontado como uma das principais causas de polioencefalomalacia (PEM). Na literatura nacional relatos de PEM induzida por enxofre em ovinos são escassos. O objetivo desta dissertação foi induzir PEM em ovinos fornecendo uma dieta rica em carboidratos e com diferentes níveis de enxofre e realizar avaliações clínicas e laboratoriais. Foram utilizados 18 ovinos divididos em três grupos (G1, G2 e G3) que receberam diferentes níveis de enxofre na dieta 0,2%, 0,9% e 1,2% respectivamente. Exames clínicos (frequência cardíaca, frequência respiratória, temperatura retal e motricidade ruminal) e laboratoriais (concentração de sulfeto de hidrogênio ruminal, hemogasometria venosa, pH do fluído ruminal, concentração de cobre sérico e hepático, tomografia computadorizada, necropsia e histopatológico) foram realizados em diferentes momentos. A temperatura retal, hemogasometria venosa e pH do fluido ruminal estavam dentro dos valores de referência para a espécie. Taquicardia e taquipnéia foram observadas nos três grupos. A motricidade ruminal estava diminuída nos grupos G2 e G3 em relação ao G1. Quanto maior a ingestão de enxofre...

Polioencefaloma experimentalmente induzida pela ingestão de dieta com alto teor de enxofre ou pelo herpesvírus bovino 5 em bovinos

Cunha, Paulo Henrique Jorge da
Fonte: Universidade Estadual Paulista (UNESP) Publicador: Universidade Estadual Paulista (UNESP)
Tipo: Tese de Doutorado Formato: 129 f.
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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES); Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP); Pós-graduação em Medicina Veterinária - FMVZ; O objetivo da tese foi de verificar os achados clínicos e laboratoriais da polioencefalomalacia (PEM) em bovinos ocasionada pela ingestão de dieta com alto teor de enxofre ou pelo herpesvírus bovino 5 (BoHV-5). No primeiro estudo realizouse indução de PEM pelo consumo excessivo de enxofre. Foram utilizados 10 bezerros, sendo que quatro bovinos ingeriram ração sem sulfato de sódio (G1), enquanto seis consumiram ração com sulfato de sódio (G2). Exames físicos e laboratoriais (hemograma, fibrinogênio plasmático e proteína plasmática, pH fluido ruminal, concentração do sulfeto de hidrogênio ruminal, líquido cerebrospinal e histopatológico) foram realizados. Um bezerro do grupo G2 apresentou sinais neurológicos e em todos do mesmo grupo detectou-se elevados valores de sulfeto de hidrogênio ruminal. Histologicamente as principais alterações observadas foram necrose neuronal cortical e lesões hemorrágicas nos núcleos basais, tálamo, mesencéfalo, ponte e bulbo. A ingestão de dieta com alto teor de enxofre (0,52%) induziu PEM nos bezerros. No segundo estudo foi realizada inoculação experimental em seis bezerros com o BoHV-5 pela via intranasal com instilação de 0...

Enfermidades do sistema nervoso de bovinos de corte das regiões centro-oeste e sudeste do Brasil

Lemos, Ricardo Antônio Amaral de
Fonte: Universidade Estadual Paulista (UNESP) Publicador: Universidade Estadual Paulista (UNESP)
Tipo: Tese de Doutorado Formato: 150 f. : il.
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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES); Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV; Foi realizado um estudo em 1437 materiais de bovinos encaminhados para o setor de Anatomia Patológica do Núcleo de Ciências Veterinárias da Universidade Federal do Mato Grosso do Sul (SAP/NCV/UFMS), no período de janeiro de 2000 a dezembro de 2004. Os casos estudados consistiam tanto de casos acompanhados por técnicos do SAP/NCV/UFMS, como por casos encaminhados ao setor por médicos veterinários que atuam no campo. Dos protocolos dos casos foram extraídas informações sobre a epidemiologia, sinais clínicos, achados de necropsia, histopatológicos e exames laboratoriais complementares desses casos. A raiva (13% dos casos), o botulismo (10% dos casos), a meningoencefalite causada pro herpesvírus bovino tipo 5 (2% dos casos) e a polioencefalomalacia (5% dos casos), foram as enfermidades de maior prevalência. Cento e quarenta e nove exames eram provenientes de bovinos importados que não estavam mais aptos para a reprodução e foram sacrificados e seus cérebros encaminhados para o diagnóstico da encefalopatia espongiforme dos bovinos (sigla em inglês BSE). Todos os materiais estudados foram testados para raiva nas provas de imunofluorescência direta e inoculação intracerebral em camundongos. Outras enfermidades como as intoxicações por chumbo...

Reactivation of latent bovine herpesvirus type 5 in cattle with polioencephalomalacia induced by ammonium sulphate

David,Nadia; Hübner,Sílvia O.; Riet-Correa,Franklin; Halfen,Danisa; Lemos,Ricardo A.
Fonte: Colégio Brasileiro de Patologia Animal - CBPA; Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA) Publicador: Colégio Brasileiro de Patologia Animal - CBPA; Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA)
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/10/2007 EN
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37.79%
In the state Mato Grosso do Sul, Brazil, outbreaks of meningoencephalitis by BoHV-5 and polioencephalomalacia (PEM) display similar epidemiological features, suggesting that meningoencephalitis may be associated with reactivation of a latent BoHV-5 infection, during the development of PEM. To test this hypothesis, four 7-8 months old steers negative for BoHV-5 antibodies were inoculated intranasally with BoHV-5 and received amprolium from day 35 to day 105 after inoculation. Because PEM was not produced during this period, ammonium sulphate was given from day 114 to day 180 after inoculation. Two uninfected control steers received amprolium and ammonium sulphate for the same periods. All inoculated cattle developed antibodies against BoHV-5 after inoculation and the virus was isolated from nasal swabs, indicating that they were infected. Two inoculated steers had clinical signs of PEM after 118 and 146 days after virus inoculation. One was euthanized after a clinical manifestation period of seven days and had severe lesions of PEM and meningoencephalitis. BoHV-5 was isolated from the central nervous system of this animal. The other animal recovered but continued to manifest chronic signs of PEM and was euthanatized. On histological examination...

Sulfur-induced polioencephalomalacia in a herd of rotationally grazed beef cattle

Haydock, Debra
Fonte: PubMed Publicador: PubMed
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em /10/2003 EN
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27.44%
Central nervous system disease occurred in a herd of rotationally grazed beef cattle consuming water containing 3400 ppm sulfate. Clinical signs, pathologic findings, and high water sulfate levels confirmed the diagnosis of sulfur-induced polioencephalomalacia. The incidence of disease reduced when the herd was switched to a low sulfate water source.

Polioencephalomalacia in adult sheep grazing pastures with prostrate pigweed

Ramos, Juan José; Ferrer, Luis Miguel; García, Laura; Fernández, Antonio; Loste, Araceli
Fonte: Canadian Veterinary Medical Association Publicador: Canadian Veterinary Medical Association
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em /01/2005 EN
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Polioencephalomalacia was diagnosed in 2 animals from different farms. In apparently healthy animals from same farms, fecal thiaminase and a significant reduction in erythrocyte transketolase activity was observed. The presence of thiaminase in Amaranthus blitoides could have contributed to the development of polioencephalomalacia in sheep grazing on natural pastures.

Sulfur-induced polioencephalomalacia in sheep: some biochemical changes.

Gooneratne, S R; Olkowski, A A; Christensen, D A
Fonte: PubMed Publicador: PubMed
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em /10/1989 EN
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27.44%
The effect of high dietary sulfur (S) supplementation on blood thiamine (B1) concentration, biochemical indices of liver, muscle and kidney damage and selected plasma electrolytes was studied in six sheep. Three of these sheep received an additional 230 mg thiamine/kg diet (Group 2). After approximately 2.5-3 weeks on this diet, all three sheep in the non-B1-supplemented group (Group 1) showed loss of appetite and developed mild neurological signs: depression, intermittent signs of excitation and head pressing. Increases in blood B1 concentration and plasma creatine kinase (CK) and aspartate aminotransferase (AST) were observed during this time in all affected animals. Clinical signs lasted only for two to five days. Sheep in group 2 were clinically normal throughout the experiment, but all of these animals also had elevated blood B1 concentrations and plasma CK activity at the 3 wk sampling. Plasma magnesium concentrations of group 1 sheep were elevated at the 2.5-3 wk and 6 wk samplings but they declined significantly (p less than 0.05) to low normal levels thereafter. Magnesium concentrations of group 2 sheep were low at the beginning but progressively increased during the course of the experiment. At necropsy, brain lesions suggestive of polioencephalomalacia (PEM) were observed in all sheep but were most marked in group 1. It is speculated that PEM may be caused by a direct toxic effect of S...

Apparent thiamin status of cattle and its relationship to polioencephalomalacia.

Loew, F M; Bettany, J M; Halifax, C E
Fonte: PubMed Publicador: PubMed
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em /07/1975 EN
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27.79%
The thiamin status (thiamin concentration in whole blood, plasma, and erythrocytes; erythrocyte transketolase activity) of normal cattle consuming varying diets did not differ from that of cattle with polioencephalomalacia or lead poisoning. Dairy cattle had higher ruminal content of thiamin and lower thiamin destroying activity than did beef cattle. Renal oxalosis was no more frequent in cattle which had polioencephalomalacia than in postnatal calves. In normal beef cattle, approximately 75% of total blood thiamin is in erythrocytes and the remainder in plasma.

Epinephrine induced hyperglycemia in bulls and its relationship to polioencephalomalacia.

Mella, C M; Margolles, E; Loew, F M
Fonte: PubMed Publicador: PubMed
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em /07/1975 EN
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27.79%
Data on blood glucose concentration in bulls affected with molasses associated polioencephalomalacia are controversial. It has been suggested that the brain lesions are related to a "hypoglycemic state" during the development of polioencephalomalacia. This paper reports the mobilization of glucose by means of the epinephrine test in three bulls fed two diets, one forage based and the other molasses based. The results showed significantly greater hyperglycemic responses in the animals during the molasses diet than during the forage one. This probably means that glucose stores (as glycogen) are higher in cattle consuming molasses than those consuming forage. Such hepatic glucose output is in disagreement with the hypoglycemia theory as the cause of the early stages of brain lesions and focuses the probable cause as being related to glucose utilization.

Induction of bovine polioencephalomalacia with a feeding system based on molasses and urea.

Mella, C M; Perez-Oliva, O; Loew, F M
Fonte: PubMed Publicador: PubMed
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em /01/1976 EN
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27.44%
Polioencephalomalacia (PEM), a disease first described in the United States and related to intensive beef production, appeared in Cuba coincident with the use of a new, molasses-urea-based diet to fatten bulls. Because the only experimental means so far of reproducing PEM has been with amprolium, a structural analog of thiamin, the present study attempted to induce the disease using the molasses-urea-based diet. Six Holstein bulls (200-300 kg) were studied during consumption of three successive diets: 1) commercial molasses-urea-restricted forage diet of Cuban feedlots, 2) a period in which forage was gradually withdrawn and 3) a forage-free diet composed only of molasses, urea and fish meal. PEM was reproduced in this way. At ten-day intervals, blood concentrations of glucose, lactate, pyruvate and urea were measured, as well as when clinical signs of PEM appeared. The signs, clinical course and lesions of the experimentally induced disease were comparable to those of field cases. The biochemical results suggested a block in pyruvate oxidation as in PEM elsewhere in the world. No evidence existed of urea intoxication. In addition, brain and liver concentration of total thiamin from field cases and normal animals were found to be similar.

Blood Thiamin Concentrations in Bovine Polioencephalomalacia

Loew, F. M.; Dunlop, R. H.
Fonte: PubMed Publicador: PubMed
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em /10/1972 EN
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27.44%
Thiamin concentrations were determined by the thiochrome method in blood from 16 cattle with polioencephalomalacia (PEM) or other apparent central nervous disorders. The mean blood total thiamin concentration of the five cattle with PEM (20.5 ± 5.1 µg/100 ml blood) was not significantly different from concentrations in the cattle with the other disorders, despite evidence of a thiamin diphosphate deficiency reported in cattle with PEM.

Polioencephalomalacia in cattle consuming water with elevated sodium sulfate levels: A herd investigation

Hamlen, Heidi; Clark, Edward; Janzen, Eugene
Fonte: PubMed Publicador: PubMed
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em /03/1993 EN
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27.44%
Polioencephalomalacia (PEM), hereafter used to refer to the specific lesion of cerebrocortical necrosis, developed in 11 of 110 mature cattle on pasture in central Saskatchewan. The primary water source contained a markedly elevated level of sodium sulfate (7200 ppm). The significant clinical findings of the herd investigation included depression, ataxia, cortical blindness, dysphagia, and death. Diagnosis of PEM was confirmed by histopathological evidence of cerebrocortical and subcortical necrosis with microvascular fibrinoid necrosis predominantly in the thalamic region of three affected cattle. The histopathology of sulfate-associated PEM observed in this herd appears to be unique and its features are presented and discussed. Mean levels for serum transketolase, copper, red blood cell transketolase activity, and thiamine (vitamin B1) in all exposed young (n = 100) and mature (n = 99) animals did not reveal evidence of deficiencies. Although the blood thiamine status of the seven surviving, affected animals was not evaluated before treatment with exogenous thiamine, 199 members of the herd had blood thiamine levels within the reference range at the time of the outbreak. The outbreak resolved after cattle were moved to a water source containing acceptable levels of sodium sulfate.

Polioencephalomalacia in White-tailed Deer (Odocoileus virginianus) in Saskatchewan

Wobeser, G.; Runge, W.
Fonte: PubMed Publicador: PubMed
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em /11/1979 EN
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27.44%
Polioencephalomalacia similar to that in domestic ruminants was diagnosed in two wild white-tailed deer (Odocoileus virginianus) with abnormal behaviour in Saskatchewan.

Polioencephalomalacia in a llama

Himsworth, Chelsea G.
Fonte: Canadian Veterinary Medical Association Publicador: Canadian Veterinary Medical Association
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em /06/2008 EN
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27.44%
A 5-year-old, female llama (Lama glama) developed acute, progressive neurological disease, characterized by recumbency, muscle fasciculations, intermittent convulsions/opisthotonos, and absent menace responses. Postmortem histopathologic lesions, limited to the cerebral cortex, consisted of necrosis of the superficial and deep laminae. The clinical disease and microscopic lesions were consistent with polioencephalomalacia.

Polioencephalomalacia associated with closantel overdosage in a goat

Sakhaee,E; Derakhshanfar,A
Fonte: Journal of the South African Veterinary Association Publicador: Journal of the South African Veterinary Association
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/01/2010 EN
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This report describes clinical and pathological findings associated with closantel (a halogenated salicylanilide anthelmintic) overdosage in a 3-year-old goat. The clinical signs included blindness, incoordination, ataxia, depression of the palpebral and pupillary reflexes, and recumbency. No gross lesions were noted in tissue or organs at necropsy, but microscopic lesions were seen in nervous tissue and hepatic cells. Polioencephalomalacia was clearly evident. Bilaterally symmetrical status spongiosus of the white matter of the brain, bilateral laminar necrosis, microcavitations, ischaemic cell change and severe degeneration of the cerebellum were seen in nervous tissue. Fatty change and hydropic degeneration in the liver and hepato-cellular degeneration were observed histologically.