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Determination of flagellar types by PCR-RFLP analysis of enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) and Shiga toxin-producing E. coli (STEC) strains isolated from animals in Sao Paulo, Brazil

Ayala, Claudia de Oliveira; Moreno, Ana Carolina Ramos; Martinez, Marina Baquerizo; Burgos, Ylanna Kelner; Castro, Antonio Fernando Pestana de; Bando, Silvia Yumi
Fonte: ELSEVIER SCI LTD; OXFORD Publicador: ELSEVIER SCI LTD; OXFORD
Tipo: Artigo de Revista Científica
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This study evaluated the polymerase chain reaction- restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis of fliC for typing flagella antigen (H) of Shiga toxin-producing Escherichia coil (STEC) and enteropathogenic E. coli (EPEC) strains isolated from different animals. The molecular typing of the H type was efficient in the determination of 93 (85%) strains. Two nonmotile (H-) E. coil strains showed a PCR-RFLP electrophoretic profile that did not match known H type patterns. The fliC nucleotide sequence of strains B2N and 4a revealed a nucleotide substitution at the restriction site and a nucleotide insertion that generated a stop codon, respectively. The results of this study showed that PCR-RFLP analysis of fliC is faster, less laborious and as efficient for the determination of H type E. coli isolated from animals, compared to serotyping and that it is useful in determining H type in nonmotile strains and strains expressing non-reactive H antigens. Moreover, the fliC sequence of strain B2N suggests that we could have found a new flagellin antigen type. (C) 2010 Elsevier Ltd. All rights reserved.

"Pesquisa de sítios de restrição enzimática em segmento da ORF K1 do genoma de herpesvírus humano tipo 8 (HHV-8) em isolados clínicos de São Paulo: relação com subtipos virais e implantação da técnica de RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism Analyses) para determinar subtipos virais"; "Research of the restriction enzymatic sites in segment from ORF K1 genome HHV-8, isolates from KS-AIDS patients of São Paulo. Standardized a PCR-RFLP (restriction fragment length polymorphism analysis for HHV-8 subtyping"

Moreira, Abdiel Aparecido
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 22/08/2003 PT
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66.73%
A epidemia da Síndrome de Imunodeficiência Adquirida (AIDS) fez aumentar a incidência de sarcoma de Kaposi (SK) em todos os países e o SK passou a ser considerado doença definidora de AIDS. Desde a descoberta de seu agente etiológico, o herpesvírus humano tipo 8 (HHV-8), vários estudos vêm sendo realizados com o objetivo de caracterizar subtipos virais presentes em todas as formas de SK: clássica, endêmica, iatrogênica e epidêmica. Os sistemas rotineiramente usados na subtipagem do HHV-8 têm usado o seqüenciamento de um gene que contém regiões hipervariáveis e que codifica uma glicoproteína de membrana viral (ORF K1). O presente trabalho apresenta um sistema de subtipagem alternativo que se baseia na presença de sítios de restrição enzimática em um pequeno segmento do gene ORF K1, região hipervariável 1 (VR1) e que permite discriminar subtipos virais. A análise de 68 seqüências; 50 que pertenciam a 36 pacientes com sarcoma de Kaposi infectados e não infectados pelo HIV-1 de São Paulo e 18 a protótipos dos subtipos A a E, mostraram mapas de restrição enzimática característicos dos principais subtipos virais descritos até o momento. Tomando como base apenas as enzimas disponíveis comercialmente, foram selecionadas cinco que se mostraram úteis para a subtipagem de HHV-8: Taq I...

Sorologia de antígenos flagelares de amostras de Escherichia coli Enteropatogênicas (EPEC) e E. coli produtoras da Toxina de Shiga (STEC) isoladas de diferentes animais e análise comparativa do gene fliC por PCR-RFLP.; Serology of flagellar antigens from strains of enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) and Shiga Toxin producing E. coli (STEC) isolated from different animals and comparative analysis of the fliC gene by PCR-RFLP.

Ayala, Claudia de Oliveira
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 19/11/2009 PT
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A espécie Escherichia coli constitui um grupo de bactérias tipicamente não patogênicas e que fazem parte do trato intestinal de humanos e animais. As amostras são sorotipadas com base em seus antígenos de superfície O (somático), H (flagelar) e K (capsular). O antígeno flagelar correspondente ao filamento é formado pela polimerização da flagelina, codificada pelo gene fliC. O presente trabalho empregou a técnica de PCR-RFLP para analisar os padrões de antígenos flagelares de 112 amostras de EPEC e STEC. Quatorze amostras não amplificaram o gene fliC, 17 tiveram seu antígeno flagelar determinado apenas por PCR-RFLP e 75 amostras tiveram seus antígenos flagelares confirmados por esta técnica. Três antígenos H com padrões irregulares foram clonados e sequenciados. Após o sequenciamento, inserções e remoções de nucleotídeos foram encontradas. Até o momento, poucos estudos utilizam um número abrangente de amostras de STEC e EPEC provenientes de diferentes animais para a determinação do antígeno H empregando a técnica de PCR-RFLP do gene fliC. De acordo com os resultados encontrados neste estudo, podemos concluir que a técnica de PCR-RFLP do gene fliC é mais rápida, menos trabalhosa e mais eficiente que a metodologia de sorotipagem clássica.; The Escherichia coli species consists of a group of typically non-pathogenic bacteria present in the intestinal tract of humans and animals. Strains are serotyped according to their O (somatic)...

Detection of the single nucleotide polymorphism (rs2227307) in the human interleukin 8 gene using a pcr-rflp assay

Kim, Yeon Jung; Viana, Aline Cavalcanti; Tfaile Corbi, Samia Cruz; de Carvalho Curtis, Karen Maria; Renzi, Rivelto; Perez Orrico, Silvana Regina; Cirelli, Joni Augusto; Scarel-Caminaga, Raquel Mantuaneli
Fonte: Universidade Federal de Uberlândia (UFU) Publicador: Universidade Federal de Uberlândia (UFU)
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 136-142
ENG
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Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP); Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES); Processo FAPESP: 03/10424-0; Processo FAPESP: 05/03231-7; Processo FAPESP: 05/04553-8; Processo FAPESP: 06/04492-1; Interleukin 8 (IL-8) is a chemokine that acts as a potent chemoattractant for neutrophils. Single nucleotide polymorphisms ( SNPs) in the human IL8 gene have been investigated in many disease association studies. We have developed a different PCR-RFLP (Polymerase Chain Reaction - Restriction Fragment of Length Polymorphism) assay for genotyping the SNP (rs2227307) in the IL8 gene. This method was used for typing 147 white healthy Brazilian individuals, whose DNA was obtained from buccal epithelial cells and extracted with phenol: chloroform: isoamyl alcohol. Genomic DNA was amplified by PCR using a conventional thermal cycler. The PCR products ( 573 bp) were submitted to RFLP reactions. The RFLP fragments were analyzed in a 4% agarose gel stained with ethidium bromide. The genotype distribution observed in this study was consistent with the assumption of Hardy-Weinberg equilibrium and was similar (p=0.30) to those reported for other white populations in the SNP Database of the National Center for Biotechnology Information (NCBI). Because the PCR-RFLP method presented here was efficient...

A novel PCR-RFLP assay for the detection of the single nucleotide polymorphism at position+1440 in the human CXCR2 gene

Viana, Aline C.; Kim, Yeon J.; Cirelli, Joni A.; Orrico, Silvana R. P.; Curtis, Karen C.; Cano, Veridiana S. P.; Valentini, Sandro R.; Scarel-Caminaga, Raquel Mantuaneli
Fonte: Springer Publicador: Springer
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 737-741
ENG
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66.35%
We designed a novel PCR-RFLP assay to genotype for the CXCR2 +1440 (G/A) single nucleotide polymorphism, which provides a simple, low-cost, practical, and reproducible method. Allele frequencies in healthy Brazilian individuals were found to be 0.65% for allele A and 0.35% for allele G.

Divergência genética e relacionamento filogenético em espécies de morcegos das famílias Molossidae, Phyllostamidae, Vespertilionidae e Emballonuridae baseado em análise de PCR-RFLP

Marchesin, Sandra Regina de Carvalho
Fonte: Universidade Estadual Paulista (UNESP) Publicador: Universidade Estadual Paulista (UNESP)
Tipo: Tese de Doutorado Formato: 134 f. : il.
POR
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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES); Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP); Pós-graduação em Genética - IBILCE; A proposta do presente trabalho foi analisar as relações de proximidade genética e evolutiva entre espécies de Chiroptera, a partir da utilização da técnica PCR-RFLP para a obtenção de dados moleculares para os genes mitocondrial 12/16S e nuclear RAG2. A variabilidade detectada no presente estudo para as diferentes espécies é extremamente importante e poderá orientar ou subsidiar estudos com diferentes finalidades. A complexidade dos táxons de Chiroptera observada em outras análises, como citogenética e morfológica também foi revelada pela análise de RFLP, reforçando a importância dessa metodologia nos estudos evolutivos do grupo.; The aim of this study was to assess the relationships of genetic and evolutive proximity among Chiroptera species, through the obtention of molecular data through mitochondrial (12/16S) and nuclear (RAG2) genes by PCR-RFLP technique. The variability detected by this study to the different species is extremely important and can direct or subsidize studies with different purposes. The complexity of Chiroptera taxa observed in cytogenetic and morphologic analyses was also revealed by the RFLP technique...

The use of PCR-RFLP as an identification tool for two closely related species of bats of genus Platyrrhinus

Ferreira,Juliana Machado; Martins,Felipe de Melo; Ditchfield,Albert; Morgante,João Stenghel
Fonte: Sociedade Brasileira de Genética Publicador: Sociedade Brasileira de Genética
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/03/2005 EN
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The bat species Platyrrhinus lineatus and P. recifinus (Phyllostomidae: Stenodermatinae) are ecologically important because of their capacity for seed dispersal. P. recifinus is endemic to the Atlantic rain forest and is considered vulnerable by the IUCN. The lack of distinct morphological features makes identification of the two species a difficult task. This study was aimed at testing the hypothesis that these are actually two distinct species by using PCR-RFLP of the mitochondrial cytocrome b gene. The results showed no shared haplotypes, demonstrating that these are, in fact, two distinct species. No polymorphism was obtained for P. recifinus, which could be a sign of low genetic diversity in this threatened species.

The use of PCR-RFLP as an identification tool for three closely related species of rodents of the genus Akodon (Sigmodontinae, Akodontini)

Fagundes,Valéria; Nogueira,Cristina Dornelas de Andrade
Fonte: Sociedade Brasileira de Genética Publicador: Sociedade Brasileira de Genética
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/01/2007 EN
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Three cryptic species of the rodent Akodon (A. cursor, A. montensis and Akodon sp.) were analyzed. The two former species are sympatric in the Brazilian states of São Paulo, Rio de Janeiro and Minas Gerais, where hybrids have already been found. The third species, Akodon sp., occurs in an isolated area in Central Brazil. The identification of these species is difficult by the need of living animals. At present, karyotyping is the only method used in the identification of specimens. We used PCR-RFLP of the mitochondrial cytochrome gene to test the distinctiveness of the three species, which was confirmed by the absence of shared species-specific haplotypes. We also detected a geographical pattern of haplotypes distribution with highly polymorphic populations of A. cursor from Espírito Santo and of A. montensis from Rio Grande do Sul.

Use of pcr-rflp of thefla a gene for detection and subtyping of Campylobacter jejuni strains Potentially related to Guillain-barré syndrome, isolated from humans and animals

Scarcelli,E.; Piatti,R.M.; Harakava,R.; Miyashiro,S.; Campos,F.R.; Souza,M.C.A.; Cardoso,M.V.; Teixeira,S.R.; Genovez,M.E.
Fonte: Sociedade Brasileira de Microbiologia Publicador: Sociedade Brasileira de Microbiologia
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/12/2009 EN
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The objectives of the present study were the subtyping of Campylobacter jejuni subsp. jejuni strains obtained from humans and different animal species using PCR-RFLP, and the detection, by means of the same technique, of strains related to serotype PEN O19:LIO 7, the main C. jejuni serotype linked to Guillain-Barré Syndrome (GBS). Seventy C. jejuni strains isolated from human feces (n=33), primates (n=15), dogs (n=5), swine (n=2), bovines (n=1), abortion material from goats (n=2) and poultry carcasses (n=12), all collected in the state of São Paulo, were subtyped by means of PCR-RFLP of fla A gene, using restriction endonucleases Hae III, Afa I and Mbo I. Seven subtypes were observed when using the enzyme Hae III; eight when using Mbo I; and seven when using Afa I. The combination of the three endonucleases led to 16 fla-RFLP subtypes, from which ten subtypes shared strains of human and animal origin. From these, seven subtypes were observed in human and broiler strains. In eight subtypes, the other animal species shared patterns with human strains. It was inferred that, besides broilers, swine, goats, dogs and primates may be sources of infection for human in São Paulo. PCR-RFLP is a highly discriminatory technique that may be applied to molecular epidemiology studies of samples from different origins. Besides...

Characterization of Neoparamoeba pemaquidensis strains: PCR-RFLP of the internal transcribed spacer region from the amoeba and endosymbiont

Caraguel, C.; Donay, N.; Frasca, S.; O'Kelly, C.; Cawthorn, R.; Greenwood, S.
Fonte: Inter-research Publicador: Inter-research
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em //2007 EN
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66.46%
Neoparamoeba pemaquidensis continues to be an ongoing problem for commercial finfish aquaculture and has also sporadically been associated with mass mortalities of commercially relevant marine invertebrates. Despite the ubiquity and importance of this amphizoic amoeba, our understanding of the biology as it applies to host range, pathogenicity, tissue tropism, and geographic distribution is severely lacking. This may stem from the inability of current diagnostic tests based on morphology, immunology, and molecular biology to differentiate strains at the subspecies level. In the present study, we developed a polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method based on the internal transcribed spacer (ITS) region that can accurately differentiate amoeba strains of N. pemaquidensis. The investigation focused on the complications of the amoeba ITS microheterogeneity in the development of a subspecies marker and the use of the endosymbiont, Ichthyobodo necator related organism (IRO), ITS region as an alternative marker. The combination of host amoeba and endosymbiont ITS PCR-RFLP analyses was successfully used to correctly identify and characterize an N. pemaquidensis isolate from an outbreak of amoebic gill disease in Atlantic salmon Salmo salar from the west coast of North America (Washington State...

PCR-RFLP of 16S ribosomal DNA to confirm the identification of Enterococcus gallinarum and Enterococcus casseliflavus isolated from clinical and food samples

Medeiros,Aline Weber; d'Azevedo,Pedro; Pereira,Rebeca Inhoque; Cassenego,Ana Paula; Van Der Sand,Sueli; Frazzon,Jeverson; Frazzon,Ana Paula Guedes
Fonte: Sociedade Brasileira de Medicina Tropical - SBMT Publicador: Sociedade Brasileira de Medicina Tropical - SBMT
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/02/2010 EN
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INTRODUCTION: This study aimed to confirm the identification of Enterococcus gallinarum and Enterococcus casseliflavus isolated from clinical and food samples by PCR-RFLP. METHODS: Fifty-two strains identified by conventional biochemical exams were submitted to PCR amplification and digested with HinfI. Only 20 (38.5%) of the 52 strains showed a DNA pattern expected for E. gallinarum and E. casseliflavus. RESULTS: Analysis of the results of this study showed that E. gallinarum and E. casseliflavus are occasionally erroneously identified and confirmed the potential application of 16S rDNA analysis for accurate identification of these species. CONCLUSIONS: A correct identification is important to distinguish between intrinsic and acquired vancomycin resistance.

PCR-RFLP of 16S ribosomal DNA to confirm the identification of Enterococcus gallinarum and Enterococcus casseliflavus isolated from clinical and food samples

Medeiros, Aline Weber; D'Azevedo, Pedro Alves; Pereira, Rebeca Inhoque; Cassenego, Ana Paula Vaz; Sand, Sueli Teresinha van der; Frazzon, Jeverson; Frazzon, Ana Paula Guedes
Fonte: Universidade Federal do Rio Grande do Sul Publicador: Universidade Federal do Rio Grande do Sul
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: application/pdf
ENG
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66.5%
Introdução: O objetivo deste estudo foi confirmar a identificação de amostras clínicas e alimentos de Enterococcus gallinarum e Enterococcus casseliflavus por PCR-RFLP. Métodos: Cinquenta e duas cepas identificadas por exames bioquímicos convencionais foram submetidos a amplificação por PCR e digestão com HinfI. Apenas 20 (38,5%) das 52 amostras apresentaram um padrão de DNA esperado E. gallinarum e E. casseliflavus. Resultados: Analise dos resultados deste estudo demonstraram que, algumas vezes E. gallinarum e E. casseliflavus são erroneamente identificados e confirmaram a potencial aplicação da análise do 16S rDNA para identificação exata destas espécies. Conclusões: A correta identificação é importante a fim de distinguir entre resistência intrínseca e adquirida à vancomicina.; Introduction: This study aimed to confirm the identification of Enterococcus gallinarum and Enterococcus casseliflavus isolated from clinical and food samples by PCR-RFLP. Methods: Fifty-two strains identified by conventional biochemical exams were submitted to PCR amplification and digested with HinfI. Only 20 (38.5%) of the 52 strains showed a DNA pattern expected for E. gallinarum and E. casseliflavus. Results: Analysis of the results of this study showed that E. gallinarum and E. casseliflavus are occasionally erroneously identified and confirmed the potential application of 16S rDNA analysis for accurate identification of these species. Conclusions: A correct identification is important to distinguish between intrinsic and acquired vancomycin resistance.

High levels of genetic variability and differentiation in hilsa shad, Tenualosa ilisha (Clupeidae, Clupeiformes) populations revealed by PCR-RFLP analysis of the mitochondrial DNA D-loop region

Mazumder,Sabuj Kanti; Alam,Md. Samsul
Fonte: Sociedade Brasileira de Genética Publicador: Sociedade Brasileira de Genética
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/01/2009 EN
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66.46%
The hilsa shad, Tenualosa ilisha (Clupeidae, Clupeiformes) is an important anadromous clupeid species from the Western division of the Indo-Pacific region. It constitutes the largest single fishable species in Bangladesh. Information on genetic variability and population structure is very important for both management and conservation purposes. Past reports on the population structure of T. ilisha involving morphometric, allozyme and RAPD analyses are contradictory. We examined genetic variability and divergence in two riverine (the Jamuna and the Meghna), two estuarine (Kuakata and Sundarbans) and one marine (Cox's Bazar) populations of T. ilisha by applying PCR-RFLP analysis of the mtDNA D-loop region. The amplified PCR products were restricted with four restriction enzymes namely, XbaI, EcoRI, EcoRV, and HaeIII. High levels of haplotype and gene diversity within and significant differentiations among, populations of T. ilisha were observed in this study. Significant F ST values indicated differentiation among the river, estuary and marine populations. The UPGMA dendrogram based on genetic distance resulted in two major clusters, although, these were subsequently divided into three, corresponding to the riverine, estuarine and marine populations. The study underlines the usefulness of RFLP of mtDNA D-loop region as molecular markers...

CHARACTERIZATION OF CANINE LEISHMANIASIS BY PCR-RFLP IN CUIABA, MATO GROSSO, BRAZIL

Almeida, Arleana do Bom Parto Ferreira; UFMT; Paula, Daphine Ariadne Jesus de; UFMT; Dutra, Valéria; UFMT; Colodel, Edson Moleta; UFMT; Nakazato, Luciano; UFMT; Sousa, Valéria Régia Franco; UFMT
Fonte: UFPR Publicador: UFPR
Tipo: info:eu-repo/semantics/article; info:eu-repo/semantics/publishedVersion; Artigo Avaliado pelos Pares Formato: application/pdf
Publicado em 31/07/2012 POR
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Leishmaniases are neglected zoonoses that are increasing in Brazil. The dog is considered the main reservoir of the visceral form in urban areas of Brazil and also important in maintaining the cycle of transmission of the cutaneous form in endemic areas. We used PCR-RFLP to identify the species of Leishmania involved in canine infection in Cuiaba City, Mato Grosso. Samples of bone marrow and lymph were collected from 181 dogs, of which 7.2% tested positive with indirect immunofluorescence and 24.9% using PCR-RFLP; a significant difference (p ≤ 0.05), had been possible to characterize the species Leishmania (L.) chagasi. This will aid in developing prevention measures and in the control of disease in Cuiaba and the surrounding area.

Aplicación de PCR-RFLP para subtipificar Campylobacter jejuni

Giacoboni,G.; Echeverría,M.G.; Perfumo,C.
Fonte: Revista argentina de microbiología Publicador: Revista argentina de microbiología
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/06/2005 ES
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66.46%
Diez cepas de Campylobacter jejuni aisladas de fetos porcinos abortados fueron identificadas por pruebas bioquímicas: 8 como C. jejuni biotipo II de Lior, y 2 como C. jejuni biotipo I. Para poder subtipificarlas se utilizó la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para amplificar el gen flaA y al producto obtenido se lo digirió con la enzima de restricción DdeI (RFLP). Se pudieron obtener 6 subtipos a partir de C. jejuni biotipo II, mientras que los dos aislamientos de biotipo I correspondieron a un mismo subtipo. Aunque existe una amplia variedad de técnicas de biología molecular que son aplicadas con fines epidemiológicos para Campylobacter, PCR-RFLP, demostró ser una técnica simple y accesible, capaz de subtipificar a C. jejuni.

Detection of the mosquitocidal toxin genes encoding Cry11 proteins from Bacillus thuringiensis using a novel PCR-RFLP method

Sauka,D. H.; Monella,R. H.; Benintende,G. B.
Fonte: Revista argentina de microbiología Publicador: Revista argentina de microbiología
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/04/2010 EN
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66.53%
A polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method for detection of cry11 genes from Bacillus thuringiensis was established. Based on the analysis of conserved regions of the cry11 genes, 2 oligonucleotide primers were designed to amplify a 1459-bp fragment of the cry11Aa gene, and a 1471-bp of the cry11Ba and cry11Bb genes. The amplification products were digested with restriction endonuclease HinfI. Exotic B. thuringiensis strains and native isolates collected from soils, leaves and stored product dust of Argentina were analyzed to study the distribution of cry11 genes. The PCR-RFLP patterns revealed the detection of cry11 genes in 3 of 64 exotic strains and in 10 of 107 native B. thuringiensis isolates tested. Just the cry11Aa gene subclass was detected among these bacteria. Since the methodology was also developed to detect cry11Ba and cry11Bb genes, an experimental future confirmation will be required. Based on the results obtained, the PCR-RFLP method presented may be a valuable tool for specific detection of the mosquitocidal toxin genes encoding Cry11 proteins from B. thuringiensis.

Detección y tipificación de virus del papiloma humano (VPH) mediante PCR- RFLP

Quintero Vega,Militza; Cruz Gómez,Jhon Fredy; Bastidas,Marco; Márquez,Lusmary; Puig Pons,Juan
Fonte: Sociedad de Obstetricia y Ginecología de Venezuela Publicador: Sociedad de Obstetricia y Ginecología de Venezuela
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/03/2008 ES
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66.58%
Objetivo: Estandarizar una técnica de PCR-RFLP para la detección y tipificación de VPH en mujeres con diagnóstico clínico previo de infección por VPH. Método: Estudio descriptivo de corte transversal donde se procesaron 189 muestras del área genital de mujeres que acudieron para extracción de ADN, diagnóstico y tipificación por técnicas moleculares: PCR-RFLP. Ambiente: Facultad de Ciencias, Laboratorio de Biología y Medicina Experimental LABIOMEX, Universidad de Los Andes. Mérida, Estado Mérida, Venezuela. Resultados: La PCR-RFLP permitió detectar el virus y su identificación. El 16,8 % de las muestras presentó VPH de alto riesgo tipos 16, 31, 33, 35, 56, 59 y 68; el 6,8 % presentó VPH de riesgo intermedio tipos 51, 53, 58, 61 y 83; y el 18 % los tipos de bajo riesgo 6, 32, 53, 54, y 81. Conclusiones: La técnica PCR-RFLP estandarizada fue adecuada para el diagnóstico y la tipificación de VPH en muestras del área genital. El 51,9 % del total de las muestras resultaron positivas para VPH, siendo VPH 16 el subtipo de alto riesgo más común (20,0 %), y VPH 6 el de bajo riesgo más frecuente (23,8 %).

Detección del tipo de papilomavirus humano por el método de PCR-RFLP en un caso con neoplasia intraepitelial de alto grado y captura híbrida II negativa

Mendoza,LP; Kasamatsu,E; Mann Prado,J; Pereira,JS; Insaurralde,A; Rodríguez,I; Colmán,G; Paez,M
Fonte: Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud Publicador: Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/06/2007 ES
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66.46%
La infección persistente del virus del papiloma humano (HPV) es un factor necesario para el desarrollo del cáncer de cuello uterino. Este caso reporta una mujer de 43 años, con imágenes citológicas persistentes de neoplasia intraepitelial de grado III (CIN III) y resultados negativos para estudios colposcópicos y anatomopatológicos, como también, para HR-HPV analizado por el método de Captura Híbrida II. Una evaluación histopatológica posteriormente confirmó la existencia de CIN III en mucosa cervical. A fin de detectar otros tipos de HPV no incluidos en la Captura Híbrida II, la muestra fue analizada por el método de PCR-RFLP obteniendo un resultado positivo para HPV 73. En este caso, el uso del método de PCR-RFLP permitió detectar una infección por un tipo específico de HPV, brindando una información útil que puede ayudar en el manejo clínico de mujeres con diagnóstico citológico de CIN III y resultado de Captura Híbrida II negativo.

Estandarización de la técnica PCR-RFLP del gen mitocondrial cyt bcomo herramientapara la identificación de fuentes de alimentación de insectos hematófagos

Chena,L; Nara,E; Sánchez,Z; Espínola,E; Russomando,G
Fonte: Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud Publicador: Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/12/2014 ES
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66.56%
La identificación de la fuente de alimentación de insectos hematófagos puede proporcionar información sobre la capacidad vectorial, patrones de alimentación en condiciones naturales y proveer indirectamente datos sobre probables reservorios de enfermedades. Varias técnicas de identificación son empleadas, entre ellas las más utilizadas son las basadas en reacciones antígeno-anticuerpo. Actualmente, se han desarrollado ensayos moleculares, algunos de ellos permiten detectar e identificar solo sangre humana. Otros como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) del gen mitocondrial citocromo b (cyt b), que ha mostrado alto grado de sensibilidad y especificidad, permite detectar e identificar otras especies de vertebrados. El objetivo del trabajo fue estandarizar la técnica PCR-RFLP del gen mitocondrial citocromo b(cyt b) para determinar la fuente de alimentación sanguínea de insectos. Inicialmente se realizó un análisis bioinformático para la búsqueda y alineamiento de secuencias del gen cyt bde los potenciales huéspedes, con secuencias que están disponible en el GenBank. Se utilizaron 10 muestras de sangre de potenciales huéspedes vertebrados (humano, perro, gallina y roedor) y para la reacción de PCR se empleó un par de cebadores universales que amplifican una región del gen cyt b...

Caracterización de cepas de Leishmania, por medio de la técnica de PCR-RFLP de la región del Spliced Leader Miniexon (SLME), aisladas de humanos y caninos en Paraguay

Chena,L; Nara,E; Canese,A; Oddone,R; Morán,M; Russomando,G
Fonte: Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud Publicador: Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/06/2012 ES
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66.56%
La leishmaniosis es una enfermedad parasitaria con varias formas clínicas, desde lesiones cutáneas leves hasta enfermedades fatales con comprometimiento visceral. Existen varias técnicas moleculares como por ejemplo la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) que amplifica diferentes secuencias blanco, una de ellas es la región SLME (spliced leader miniexon), el producto se corta con enzimas de restricción (PCR-RFLP), permitiendo la identificación de las especies de Leishmania. Este trabajo fue realizado con el objetivo de caracterizar las cepas de Leishmania, empleando una PCR-RFLP de la región SLME, aisladas de humanos y caninos, provenientes de distintas zonas del país. Se analizaron 12 aislados de humanos y 40 de caninos debidamente codificados. Se empleó un par de cebadores para la región SLME, los productos amplificados fueron cortados con las enzimas Hae III y Nco I (RFLP) y los patrones de bandas analizados. Se detectó en un primer paso la presencia de parásitos del subgénero Viannia en 7 aislados de humanos y correspondientes al subgénero Leishmania en 5 aislados de humanos y 40 de caninos. La RFLP según los patrones de bandas permitió identificar a L. braziliensis en aislados de leishmaniosis tegumentaria y L. chagasi en los casos de leishmaniosis visceral. Es importante resaltar que este trabajo es el primero en el país en realizar la caracterización molecular a nivel de especies de Leishmania y los hallazgos descritos tienen una implicación a nivel epidemiológico...