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Princípios básicos, importância e desafios das biotécnicas aplicadas à reprodução animal

FIGUEIREDO, José Ricardo de; GONÇALVES, Paulo Bayard Dias; VISINTIN, José Antonio
Fonte: Brasília Publicador: Brasília
Tipo: Artigo de Revista Científica
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Transferência intratubárica videolaparoscópica de embriões ovinos fertilizados in vitro; Embryo transfer in oviduc of ovine in vitro fertilized by laparoscopy

Tabet, Alexandre de Faria
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 18/12/2007 PT
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O desenvolvimento da técnica de transferência embrionária no oviduto mediante videolaparoscopia e a avaliação de produtividade da punção folicular laparoscópica (LOPU) associada à transferência embrionária laparoscópica e/ou por laparotomia videoassistida, ambas no oviduto, foram os objetivos do presente trabalho. Foram utilizados 53 animais, sendo as punções foliculares para obtenção dos oócitos realizadas em 9 ovelhas adultas estimuladas hormonalmente, chamadas doadoras. Os oócitos foram obtidos através de LOPU repetidamente com intervalo mínimo de um mês entre os procedimentos nas mesmas doadoras. Os oócitos puncionados foram maturados, fertilizados e mantidos em cultivo por até três. Os embriões clivados foram transferidos no segundo dia após a fertilização in vitro (FIV) em ovelhas receptoras com cio sincronizado. A transferência dos embriões (TE) foi realizada primeiramente em 10 receptoras por laparoscopia e em 34 receptoras por laparotomia videoassistida, sendo esta última dividida em duas etapas cronológicas. Para a realização da TE por videolaparoscopia, foi introduzido, inicialmente, um trocarte de 5 mm na linha média ventral próximo à glândula mamária para passagem da óptica. Um segundo portal...

Identificação de marcadores de pluripotência em células-tronco embrionárias e embriões suínos; Identification of pluripotency markers in swine embryonic stem cells and embryos

Barros, Flavia Regina Oliveira de
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 22/01/2009 PT
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Células-tronco embrionárias (CTE) são importantes para estudos de desenvolvimento embrionário, diferenciação e manipulação genética. Além disso, essas células podem ser utilizadas na terapia celular e organogênese in vitro. Na pesquisa sobre terapia celular a partir de CTE oriundas de embriões humanos, considerações éticas, morais e religiosas têm sido feitas por pesquisadores e leigos. Portanto, um modelo animal como o suíno (Sus scrofa) será bastante válido por transpor tais barreiras, visto que o suíno possui parâmetros fisiológicos semelhantes aos humanos. Apesar do alto potencial biomédico das CTE, existem dificuldades na manutenção da pluripotência in vitro dessas células em suínos. Portanto, estudos que visam elucidar os mecanismos de manutenção da pluripotência de CTE in vitro são necessários para viabilizar o cultivo dessas células. Os objetivos do presente estudo foram (1) isolar células-tronco embrionárias suínas a partir de blastocistos produzidos in vitro e in vivo; (2) comparar dois sistemas de cultivo in vitro das massas celulares internas (MCI) isoladas, MEF ou Matrigel e (3) identificar e comparar a expressão dos fatores de transcrição Nanog, Sox2 e FoxD3 em CTE e blastocistos suínos produzidos in vitro e in vivo. Assim...

Otimização dos sistema de produção de clones por transferência nuclear com a utilização de oócitos vitrificados e diferentes tipos celulares como doadores de núcleo.

Forell, Fabiana
Fonte: Universidade Federal do Rio Grande do Sul Publicador: Universidade Federal do Rio Grande do Sul
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
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A técnica de transferência nuclear é uma ferramenta que possibilita a produção de embriões clones que podem ser utilizados tanto na clonagem reprodutiva, proporcionando o nascimento de produtos, como modelo para o estudo de diversos mecanismos fisiológicos durante o desenvolvimento embrionário. Este trabalho teve como objetivos a otimização da técnica de clonagem no Laboratório de Embriologia e Biotécnicas de Reprodução (FAVET, UFRGS), avaliar a taxa de sucesso da clonagem interespécie, e testar e eficiência da utilização de oócitos vitrificados como citoplasmas receptores para a reconstrução dos embriões clones, sendo realizado em três etapas. A primeira teve por objetivo o estabelecimento da técnica de clonagem, bem como sua otimização nas nossas condições, dando condições para que os experimentos subseqüentes pudessem ser realizados. Para isto foram realizados experimentos in vitro comparando diferentes meios de manipulação, sistemas de ativação química, meios de cultivo e fontes protéicas no cultivo dos embriões, e células oriundas de diferentes origens e animais como doadores de núcleo. Os resultados obtidos in vitro alcançaram taxas de 64,7% de clivagem e de 19,5% de blastocistos. Um grupo de embriões foi transferido para receptoras (n=24)...

Aspectos relacionados à intenção dos pais e das mães em revelar ou não a criança sobre a ocorrência de métodos de reprodução assistida

Lourenço, Gisleine Verlang
Fonte: Universidade Federal do Rio Grande do Sul Publicador: Universidade Federal do Rio Grande do Sul
Tipo: Dissertação Formato: application/pdf
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Introdução: O desenvolvimento de técnicas de Reprodução Assistida, que consistem em todos os tipos de tratamento que incluem a manipulação in vitro (no laboratório) em alguma fase do processo, de gametas masculinos (espermatozóides), femininos (oócitos) ou embriões, tem favorecido com que casais inférteis tenham a possibilidade de alcançar a gravidez. Estas técnicas permitem a doação de óvulos, doação de sêmen, adoção de embriões ou útero de substituição, o que na prática, favoreceu o surgimento de novas formas de parentalidade e conjugalidade (paternidade homoparental, famílias uniparentais, produção independente, filho de Reprodução Assistida). Objetivo: verificar em uma amostra brasileira a freqüência e fatores implicados na intenção de revelar ou não revelar à criança acerca da maneira como foi gerada, ou seja, através de uma das técnicas de Reprodução Assistida. Método: estudo transversal, desenvolvido no Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Clínica particular (SEGIR) Serviço de Ecografia, Genética e Reprodução Humana, em Porto Alegre e Centro de Reprodução Humana (FERTIVITRO) em São Paulo. Aceitaram participar do estudo 37 mães e 28 pais que responderam a um questionário semi-estruturado. Resultados: 96...

Avaliação da laparoscopia na aspiração folicular em fêmeas caprinas pré-púberes e adultas com ou sem estimulação ovariana hormonal

Cordeiro, Mabel Freitas
Fonte: Universidade Estadual Paulista (UNESP) Publicador: Universidade Estadual Paulista (UNESP)
Tipo: Tese de Doutorado Formato: x, 59 f. : il
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Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP); Pós-graduação em Cirurgia Veterinária - FCAV; O uso repetido da laparoscopia para aspiração folicular (LAF) associado ou não à estimulação hormonal foi avaliado. Para tanto foram utilizadas 40 fêmeas caprinas sem-raça-definida, divididas aleatoriamente em 4 grupos com 10 animais cada, sendo: Grupo 1 - adultas estimuladas com 80 mg de FSHp e 300 UI de eCG; Grupo 2 - adultas não estimuladas (controle); Grupo 3 - prépúberes estimuladas com metade das doses preconizadas para o G1 e Grupo 4 - pré-púberes não estimuladas. Cada fêmea foi submetida a seis sessões de colheita com intervalo de uma semana entre as intervenções. A estimulação hormonal foi feita em dose única, 36 horas antes do ato operatório. A técnica consistiu do uso de duas punções para a introdução do endoscópio e da pinça de manipulação atraumática. Após a visualização dos ovários, os folículos visíveis na sua superfície foram puncionados com auxílio de agulha de aspiração acoplada a um sistema de vácuo. Os oócitos encontrados foram classificados de acordo com a qualidade, submetidos à maturação in vitro por 27 horas, e posteriormente fixados e corados para avaliação do estádio de maturação. A técnica utilizada...

Estudo do efeito da quantidade de cópias de DNA mitocondrial sobre o desenvolvimento embrionário : implicações na fertilidade e herança mitocondrial; Study of the effect of mitochondrial DNA amount on embryonic development : implications for fertility and mitochondrial inheritance

Marcos Roberto Chiaratti
Fonte: Biblioteca Digital da Unicamp Publicador: Biblioteca Digital da Unicamp
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 30/07/2010 PT
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O DNA mitocondrial (mtDNA) dos mamíferos é composto por cerca de 16.500 pares de bases, tem herança exclusivamente materna, e codifica 13 polipeptídios essenciais para a função mitocondrial. Centenas a milhares de cópias de mtDNA estão presentes nas células somáticas dependendo da necessidade energética do tecido. No entanto, oócitos contêm mais de 150.000 cópias, no mínimo uma ordem de magnitude maior que a quantidade presente na maioria das células somáticas. Além disso, uma vez que o mtDNA não é replicado durante o desenvolvimento inicial, a quantidade de mtDNA por célula diminui a cada ciclo celular. Portanto, o número de cópias presentes no oócito deve ser suficiente para atender às necessidade energéticas das células embrionárias até que a replicação do mtDNA seja restabelecida. Considerando que há uma grande variabilidade da quantidade de mtDNA entre oócitos e que alguns trabalhos têm relacionado infertilidade e cópias de mtDNA no oócito, a quantidade de mtDNA poderia ser utilizada para selecionar embriões mais competentes a se desenvolverem. Para testar esta hipótese utilizou-se como modelo experimental o bovino uma vez que o desenvolvimento embrionário desta espécie é muito mais similar ao do humano que o de camundongo. Para tanto...

Factors influencing the development of cloned embryos

Santos, Ricardo Cardoso de Almeida Ribas dos
Fonte: Universidade do Porto. Reitoria Publicador: Universidade do Porto. Reitoria
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
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A técnica de transferência nuclear consiste na introdução de um núcleo de uma célula dadora para um oócito previamente enucleado. Diferentes técnicas de transferência nuclear estão agora disponíveis, de forma a simplificar o processo e aumentar a sua eficiência. No entanto, no ratinho, os métodos ainda estão dependentes de equipamento muito dispendioso, requerem ainda grande experiência e conhecimento das técnicas de manipulação. Vários laboratórios ainda não obtiveram sucesso ao usar o método de Honolulu, tendo no entanto obtido sucesso quando usam métodos de fusão de células em outras espécies. A clonagem de ratinhos através da utilização de células somáticas diferenciadas está ainda longe de ser uma técnica de routina, apesar do primeiro animal já ter sido clonado em 1998. Muitos poucos laboratórios em todo mundo conseguiram repetidamente clonar animais saudáveis através da transferência directa de células somáticas adultas. Neste projecto, uma técnica de transferência nuclear em embriões "zona-free", previamente desenvolvida na espécie bovina, foi modificada e aplicada em ratinhos. Esta técnica incluí a remoção da zona pelúcida e a enucleação dos oócitos sem pipeta de sucção; a "colagem" da célula dadora ao citoplasto antes da aplicação dos pulsos eléctricos para a fusão e finalmente a cultura individual dos embriões reconstruídos em pequenas gotas para prevenir agregação. Por fim...

Natural genetic variation of male sperm size in the nematode Caenorhabditis elegans

Soares, Nuno Filipe da Silva, 1989-
Fonte: Universidade de Lisboa Publicador: Universidade de Lisboa
Tipo: Dissertação de Mestrado
Publicado em //2012 ENG
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Tese de mestrado. Biologia (Biologia Evolutiva e do Desenvolvimento). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2012; Sperm competition is a major evolutionary force driving diversity in sperm morphology. In Caenorhabditis elegans, an androdioecious nematode, sperm competition may occur between sperm of different males competing for fertilization of a hermaphrodite or between hermaphrodite self-sperm and male sperm. Upon outcrossing, male sperm consistently outcompetes hermaphrodite sperm, and the main factor increasing sperm competitiveness is sperm size, which is always larger in males. Previously observed variation in male sperm size in C. elegans thus potentially reflect adaptive responses to sperm competition. However, the extent of natural genetic variation in male sperm size has not been quantitatively studied and its underlying proximate causes remain elusive. Here we quantitatively assessed natural genetic variation of male sperm size in C. elegans using a world-wide set of 97 wild isolates, covering a maximum of reported genetic variation. The aim of the project was to initiate the genetic characterization of male sperm size using Genome-Wide Association Study (GWAS) and build the basis for future Quantitative Trait Loci (QTL) mapping. This work provides the most extensive analysis of natural genetic variation in C. elegans male sperm size up to date. We report significant heritable variation in male sperm size; however...

Comparação entre dois protocolos para estimulação ovariana com agonista/antagonista do hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH) em mulheres submetidas ao primeiro ciclo de reprodução assistida; Comparison GnRH agonist short protocol and GnRH antagonist in Brazilian normoresponder patients undergoing their first cycle of controlled ovarian stimulation

Arruda, Jalsi Tacon
Fonte: Universidade Federal de Goiás; Brasil; UFG; Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde (FM); Faculdade de Medicina - FM (RG) Publicador: Universidade Federal de Goiás; Brasil; UFG; Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde (FM); Faculdade de Medicina - FM (RG)
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
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Infertility affects more couples and assisted reproduction techniques offer a possibility of treatment and the chance of having a child. Thus, the first attempt to ovulation induction is critical to the success of the cycle or even for future attempts is successful. Objective: To compare the protocols using GnRH agonist or antagonist for ovarian stimulation in normo-responders undergoing the first cycle of IVF/ICSI. Methods: we conducted a literature review on the history of ovulation induction controlled by medications. From the data available in the database of electronic medical records SISFERT used in the Laboratory of Human Reproduction (LabRep-HC-FM-UFG) a comparative retrospective observational study was conducted with 50 patients divided into two groups according to protocol: GnRH-agonist (leuprolide acetate 1 mg/day short protocol) or GnRHantagonist (Cetrorelix 0.25 mg/day), which received 150 IU/day of rFSH (follitropin alpha) and 250 µg of rhCG (alpha-coriogonadotrofina) in both groups. Results: Statistically significant differences were observed in the days of stimulation with rFSH, total dose of gonadotropin, days of use of GnRH, GnRH dose and total number of follicles (≥ 16 mm) on the day of the group rhCG GnRH agonist. There was no significant difference in other parameters...

PIWI proteins in mammals: a cow's perspective

Silva, Ricardo Andrés Zacarias, 1988-
Fonte: Universidade de Lisboa Publicador: Universidade de Lisboa
Tipo: Dissertação de Mestrado
Publicado em //2011 ENG
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Tese de mestrado. Biologia (Biologia Evolutiva e do Desenvolvimento). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2011; The integrity of DNA is under constant threat from both exogenous and endogenous agents. As a response, the cell has evolved numerous mechanisms to protect its genetic information from such dangers, especially in the germline, where unwanted changes in the genome can be transferred to the offspring. One major peril to genomic stability are transposable elements, mobile genetic fragments that can insert themselves at new locations in the genome. The mechanisms involved in controlling these elements are poorly understood. However, recent breakthroughs have provided insight into a germ cell-specific mechanism that silences transposons through RNA interference. Piwi, a subclass of the Argonaute protein family, associates with a novel class of small RNAs termed piRNAs. Interestingly, these piRNAs exhibit sequences complementary to those of transposable elements and, together with Piwi proteins, are able to thwart the mobility of such elements. Although the importance of Piwi proteins in germ cells has been established in many different organisms, in mammals Piwi function seems to be male-specific. Interestingly, phylogenetic examination of the Argonaute protein family revealed an additional Piwi gene (PIWI-LIKE 3 or PIWIL3) that is present in numerous mammals...

Comparison of different methods for exogenous DNA uptake by bovine spermatozoa; Comparação de diferentes métodos de incorporação de DNA exógeno pelo espermatozoide bovino

Simões, Renata; Feitosa, Weber Beringui; Milazzotto, Marcella Pecora; Nicacio, Alessandra Corallo; Barros, Flavia Regina Oliveira de; Gonçalves, José Sergio de Arruda; Marques, Mariana Groke; Visintin, José Antônio; Assumpção, Mayra Elena Ortiz D'
Fonte: Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Publicador: Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia
Tipo: info:eu-repo/semantics/article; info:eu-repo/semantics/publishedVersion; ; ; ; Formato: application/pdf
Publicado em 13/04/2015 ENG
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Although genetic manipulation of farm animals is of great interest for animal production and the pharmaceutical industry, its efficiency remains far from satisfactory. Pronuclear injection, which is the most widely used technique for such modification, mainly in mice, remains limited for this species. Some alternatives have been developed such as sperm mediated gene transfer, in which the spermatozoa are used as vectors for DNA delivery during in vitro fertilization. Mature sperm cells are able to spontaneously bind exogenous DNA molecules which may be internalized into sperm nuclei. Given the potential of sperm mediated gene transfer for livestock animals transgenesis, the aim of this study was to evaluate four methods of DNA uptake for sperm mediated gene transfer in bovine: incubation with DNA, plasma membrane alteration induced by calcium ionophore followed by incubation with DNA, electroporation and lipofection. Spermatozoa not exposed to exogenous DNA were used as control group. Cleavage, blastocyst and hatching rates were recorded at 72 hours post insemination (hpi), days 9 and 12 of embryo culture, respectively. Exogenous DNA-positive embryos were evaluated by PCR. No effect of treatment was observed on cleavage, blastocyst and hatching rates. In addition...