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Sequenciamento, identificação e análise de proteínas do caule de mudas de Eucalyptus grandis; Sequencing, identification and analysis of juvenile Eucalyptus grandis xylem proteins

Andrade, Alexander de
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 05/05/2006 PT
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26.3%
Apesar da importância econômica e ambiental que a madeira representa como fonte natural e renovável de energia e fibras, pouco é conhecido sobre os processos celulares, moleculares e bioquímicos envolvidos com a sua formação. Usando metodologias proteômicas como 2D-PAGE e espectrometria de massas foi iniciada a análise do proteoma do caule de Eucalyptus grandis em diferentes estádios de desenvolvimento (5 meses, 3 anos e 6 anos). O presente trabalho baseou-se especificamente na idade de cinco meses. As plantas tiveram suas folhas, raízes e cascas removidas e seus caules foram macerados em almofariz com nitrogênio líquido e as proteínas extraídas pelo método de extração fenólica. As proteínas foram separadas por eletroforese bidimensional em fitas IPG com gradiente de pH imobilizado linear de 4-7 na primeira dimensão e gel de poliacrilamida (12,5%) na segunda dimensão. A coloração dos géis foi realizada com coomassie G250. Foram detectados 438 spots e um total de 168 spots foram retirados do gel, digeridos com tripsina e submetidos ao sequenciamento por espectrometria de massas através do sistema LCMS/ MS. O sequenciamento por MS apresentou uma eficiência de 72,02% possibilitando a identificação de 121 spots...

Análise proteômica da matriz do esmalte nos estágios de secreção e maturação em camundongos susceptíveis ou resistentes à fluorose dentária, expostos cronicamente ao fluoreto através da água de beber; Proteomic analysis of secretory and maturation-stage enamel matrix in mice susceptible or resistant to dental fluorosis, chronically exposed to fluoride in the drinking water

Charone, Senda
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 11/10/2013 PT
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26.48%
Análise proteômica da matriz do esmalte nos estágios de secreção e maturação em camundongos susceptíveis ou resistentes à fluorose dentária, expostos cronicamente ao fluoreto através da água de beber. Os mecanismos pelos quais a ingestão excessiva de fluoreto (F) durante a amelogênese levam à fluorose dentária ainda não são precisamente conhecidos. Tem sido demonstrado que determinadas linhagens de camundongos são mais susceptíveis que outras à fluorose dentária, o que faz destas linhagens o modelo ideal para se estudarem os fenômenos moleculares envolvidos nesta patologia. No presente estudo, foi empregada uma abordagem proteômica para avaliar alterações na expressão de proteínas da matriz do esmalte dentário nos estágios de secreção e maturação, em duas linhagens de camundongos com diferentes susceptibilidades à fluorose (A/J, susceptível e 129P3/J, resistente). Camundongos de ambos os gêneros, representantes das linhagens 129P3/J (n=200) e A/J (n=200) foram distribuídos em dois grupos para cada linhagem, que receberam ração com baixa concentração de F e água de beber contendo 0 (controle) ou 50 mg/L F por 6 semanas. A concentração de F foi analisada no plasma e no esmalte dos incisivos. Para a análise proteômica...

Desenvolvimento e validação de metodos para a determinação de agrotoxicos em agua e solo das areas de recarga de Aquifero Guarani, na região das nascentes do Rio Araguaia, MT/GO; Development and validation of methods for determination of pesticides in water and soil from the Guarani Aquifer recharging, area, near the source Araguaia River, MT/GO

Lais Sayuri Ribeiro de Morais
Fonte: Biblioteca Digital da Unicamp Publicador: Biblioteca Digital da Unicamp
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 29/07/2009 PT
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26.75%
A região das nascentes do Rio Araguaia, na divisa dos estados de Goiás e Mato Grosso abriga uma porção das áreas de recarga do Aquifero Guarani, o qual é um dos maiores sistemas aquíferos do mundo e representa a principal fonte de água potável na região. Este reservatório pode estar comprometido pelo uso crescente de agrotóxicos nas plantações de soja e de milho da região. Diante deste cenário, neste trabalho foram desenvolvidos métodos analíticos para a determinação dos agrotóxicos imazetapir, nicossulfurom, imazaquim, carbofuram, atrazina, linurom, clorimurom-etil e diflubenzurom, utilizados em culturas de milho ou de soja. Para separação, identificação e quantificação dos agrotóxicos foram utilizadas a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com detecção por arranjo de diodos e a Cromatografia Líquida acoplada por Fonte de Ionização por Eletronebulização à Espectrometria de Massas em série. A extração em fase sólida (SPE), com cartuchos C18, foi selecionada e otimizada para a extração dos agrotóxicos em amostras de água. Para o preparo das amostras de solo foram estudadas as técnicas de extração por agitação mecânica, por banho ultrassônico e assistida por micro-ondas industrial e caseiro. Os métodos desenvolvidos foram validados obtendo-se limites de quantificação (LQ) em água...

Presence and location of modified nucleotides in Escherichia coli tmRNA: structural mimicry with tRNA acceptor branches.

Felden, B; Hanawa, K; Atkins, J F; Himeno, H; Muto, A; Gesteland, R F; McCloskey, J A; Crain, P F
Fonte: PubMed Publicador: PubMed
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em 01/06/1998 EN
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26.3%
Escherichia coli tmRNA functions uniquely as both tRNA and mRNA and possesses structural elements similar to canonical tRNAs. To test whether this mimicry extends to post-transcriptional modification, the technique of combined liquid chromatography/ electrospray ionization mass spectrometry (LC/ESIMS) and sequence data were used to determine the molecular masses of all oligonucleotides produced by RNase T1 hydrolysis with a mean error of 0.1 Da. Thus, this allowed for the detection, chemical characterization and sequence placement of modified nucleotides which produced a change in mass. Also, chemical modifications were used to locate mass-silent modifications. The native E.coli tmRNA contains two modified nucleosides, 5-methyluridine and pseudouridine. Both modifications are located within the proposed tRNA-like domain, in a seven-nucleotide loop mimicking the conserved sequence of T loops in canonical tRNAs. Although tmRNA acceptor branches (acceptor stem and T stem-loop) utilize different architectural rules than those of canonical tRNAs, their conformations in solution may be very similar. A comparative structural and functional analysis of unmodified tmRNA made by in vitro transcription and native E.coli tmRNA suggests that one or both of these post-transcriptional modifications may be required for optimal stability of the acceptor branch which is needed for efficient aminoacylation.

Early intermediates in the PDI-assisted folding of ribonuclease A.

Vinci, F.; Ruoppolo, M.; Pucci, P.; Freedman, R. B.; Marino, G.
Fonte: Cold Spring Harbor Laboratory Press Publicador: Cold Spring Harbor Laboratory Press
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em /03/2000 EN
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26.79%
The oxidative refolding of ribonuclease A has been investigated in several experimental conditions using a variety of redox systems. All these studies agree that the formation of disulfide bonds during the process occurs through a nonrandom mechanism with a preferential coupling of certain cysteine residues. We have previously demonstrated that in the presence of glutathione the refolding process occurs through the reiteration of two sequential reactions: a mixed disulfide with glutathione is produced first which evolves to form an intramolecular S-S bond. In the same experimental conditions, protein disulfide isomerase (PDI) was shown to catalyze formation and reduction of mixed disulfides with glutathione as well as formation of intramolecular S-S bonds. This paper reports the structural characterization of the one-disulfide intermediate population during the oxidative refolding of Ribonuclease A under the presence of PDI and glutathione with the aim of defining the role of the enzyme at the early stages of the reaction. The one-disulfide intermediate population occurring at the early stages of both the uncatalyzed and the PDI-catalyzed refolding was purified and structurally characterized by proteolytic digestion followed by MALDI-MS and LC/ESIMS analyses. In the uncatalyzed refolding...

On-Line 1D and 2D PLOT/LC-ESI-MS Using 10 μm i.d. Poly(styrene–divinylbenzene) Porous Layer Open Tubular (PLOT) Columns For Ultrasensitive Proteomic Analysis

Luo, Quanzhou; Yue, Guihua; Valaskovic, Gary A; Gu, Ye; Wu, Shiaw-Lin; Karger, Barry L.
Fonte: PubMed Publicador: PubMed
Tipo: Artigo de Revista Científica
EN
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36.63%
Following on our recent work, on-line one dimensional (1D) and two dimensional (2D) PLOT/LC-ESI-MS platforms using 3.2 m × 10 μm i.d. poly(styrenedivinylbenzene) (PS-DVB) porous layer open tubular (PLOT) columns have been developed to provide robust, high performance and ultrasensitive proteomic analysis. Using a PicoClear tee, the dead volume connection between a 50 μm i.d. PS-DVB monolithic microSPE column and the PLOT column was minimized. The microSPE/PLOT column assembly provided a separation performance similar to that obtained with direct injection onto the PLOT column at a mobile phase flow rate of 20 nL/min. The trace analysis potential of the platform was evaluated using an in-gel tryptic digest sample of a gel fraction (15 to 40 kDa) of a cervical cancer (SiHa) cell line. As an example of the sensitivity of the system, ∼2.5 ng of protein in 2 μL solution, an amount corresponding to 20 SiHa cells, was subjected to on-line microSPE-PLOT/LC-ESIMS/MS analysis using a linear ion trap MS. 237 peptides associated with 163 unique proteins were identified from a single analysis when using stringent criteria associated with a false positive rate less than 1% . The number of identified peptides and proteins increased to 638 and 343...

Conserved and species-specific oxylipin pathways in the wound-activated chemical defense of the noninvasive red alga Gracilaria chilensis and the invasive Gracilaria vermiculophylla

Rempt, Martin; Weinberger, Florian; Grosser, Katharina; Pohnert, Georg
Fonte: Beilstein-Institut Publicador: Beilstein-Institut
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em 21/02/2012 EN
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26.3%
Chemical defense of the invasive red alga Gracilaria vermiculophylla has been studied and compared to that of the noninvasive but related Gracilaria chilensis. Both species rely on a wound-activated chemical defense that makes them less attractive to the herbivorous sea snail Echinolittorina peruviana. The chemical stress response of both species was monitored by LC–ESIMS-based metabolic profiling and revealed commonalities and differences. Both algae rely on a rapid lipoxygenase mediated transformation of arachidonic acid to known and novel oxylipins. Common products are 7,8-dihydroxyeicosatetraenoic acid and a novel eicosanoid with an unusual γ-lactone moiety. Several prostaglandins were predominantly formed by the invasive species. The role of some of these metabolites was investigated by surveying the attachment of E. peruviana on artificial food containing the respective oxylipins. Both algae species are defended against this general herbivore by 7,8-dihydroxyeicosatetraenoic acid, whereas the prostaglandins and the novel oxylipins were inactive at naturally occurring concentrations. The role of different oxylipins in the invasive potential of Gracilaria spp. is discussed.

Mechanism of hypochlorous acid mediated heme destruction and free iron release

Maitra, Dhiman; Byun, Jaeman; Andreana, Peter R.; Abdulhamid, Ibrahim; Saed, Ghassan M.; Diamond, Michael P.; Pennathur, Subramaniam; Abu-Soud, Husam M.
Fonte: PubMed Publicador: PubMed
Tipo: Artigo de Revista Científica
EN
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26.3%
Here, we show that hypochlorous acid (HOCl), a potent neutrophil generated oxidant, can mediate destruction of free heme (Ht) and the heme precursor, protoporphyrin IX (PPIX). Ht display a broad Soret peak centered at 365 and 394 nm, indicative of the presence of monomer and μ-oxo-dimer. Oxidation of Ht by HOCl was accompanied by a marked decrease in the Soret absorption peak and release of free iron. Kinetic measurements showed that the Ht-HOCl reaction was triphasic. The first two phases were HOCl concentration dependent and attributable to HOCl binding to the monomeric and dimeric forms. The third phase was HOCl concentration independent, and attributed to Ht destruction with the release of free iron. HPLC and LC-ESIMS analyses of the Ht-HOCl reaction revealed the formation of a number of degradation products, resulting from the cleavage or modification of one or more carbon-methene bridges of the porphyrin ring. Similar studies with PPIX showed that HOCl also mediated tetra-pyrrole ring destruction. Collectively, this work demonstrates the ability of HOCl to modulate destruction of heme, through a process that occurred independent of the iron molecule that resides in the porphyrin center. This phenomenon may play a role in HOCl-mediated oxidative injury in pathological conditions.

Purpurogemutantin and Purpurogemutantidin, New Drimenyl Cyclohexenone Derivatives Produced by a Mutant Obtained by Diethyl Sulfate Mutagenesis of a Marine-Derived Penicillium purpurogenum G59

Fang, Shi-Ming; Cui, Cheng-Bin; Li, Chang-Wei; Wu, Chang-Jing; Zhang, Zhi-Jun; Li, Li; Huang, Xiao-Jun; Ye, Wen-Cai
Fonte: MDPI Publicador: MDPI
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em 04/06/2012 EN
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26.3%
Two new drimenyl cyclohexenone derivatives, named purpurogemutantin (1) and purpurogemutantidin (2), and the known macrophorin A (3) were isolated from a bioactive mutant BD-1-6 obtained by random diethyl sulfate (DES) mutagenesis of a marine-derived Penicillium purpurogenum G59. Structures and absolute configurations of 1 and 2 were determined by extensive spectroscopic methods, especially 2D NMR and electronic circular dichroism (ECD) analysis. Possible biosynthetic pathways for 1–3 were also proposed and discussed. Compounds 1 and 2 significantly inhibited human cancer K562, HL-60, HeLa, BGC-823 and MCF-7 cells, and compound 3 also inhibited the K562 and HL-60 cells. Both bioassay and chemical analysis (HPLC, LC-ESIMS) demonstrated that the parent strain G59 did not produce 1–3, and that DES-induced mutation(s) in the mutant BD-1-6 activated some silent biosynthetic pathways in the parent strain G59, including one set for 1–3 production.

Detoxification of Toxic Phorbol Esters from Malaysian Jatropha curcas Linn. Kernel by Trichoderma spp. and Endophytic Fungi

Najjar, Azhar; Abdullah, Norhani; Saad, Wan Zuhainis; Ahmad, Syahida; Oskoueian, Ehsan; Abas, Faridah; Gherbawy, Youssuf
Fonte: Molecular Diversity Preservation International (MDPI) Publicador: Molecular Diversity Preservation International (MDPI)
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em 05/02/2014 EN
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16.3%
The presence of phorbol esters (PEs) with toxic properties limits the use of Jatropha curcas kernel in the animal feed industry. Therefore, suitable methods to detoxify PEs have to be developed to render the material safe as a feed ingredient. In the present study, the biological treatment of the extracted PEs-rich fraction with non-pathogenic fungi (Trichoderma harzianum JQ350879.1, T. harzianum JQ517493.1, Paecilomyces sinensis JQ350881.1, Cladosporium cladosporioides JQ517491.1, Fusarium chlamydosporum JQ350882.1, F. chlamydosporum JQ517492.1 and F. chlamydosporum JQ350880.1) was conducted by fermentation in broth cultures. The PEs were detected by liquid chromatography-diode array detector-electrospray ionization mass spectrometry (LC-DAD-ESIMS) and quantitatively monitored by HPLC using phorbol-12-myristate 13-acetate as the standard. At day 30 of incubation, two T. harzianum spp., P. sinensis and C. cladosporioides significantly (p < 0.05) removed PEs with percentage losses of 96.9%–99.7%, while F. chlamydosporum strains showed percentage losses of 88.9%–92.2%. All fungal strains could utilize the PEs-rich fraction for growth. In the cytotoxicity assay, cell viabilities of Chang liver and NIH 3T3 fibroblast cell lines were less than 1% with the untreated PEs-rich fraction...

A1BG and C3 are overexpressed in patients with cervical intraepithelial neoplasia III

CANALES, NORMA ANGÉLICA GALICIA; MARINA, VICENTE MADRID; CASTRO, JORGE SALMERÓN; JIMÉNEZ, ALFREDO ANTÚNEZ; MENDOZA-HERNÁNDEZ, GUILLERMO; McCARRON, ELIZABETH LANGLEY; ROMAN, MARGARITA BAHENA; CASTRO-ROMERO, JULIETA IVONE
Fonte: D.A. Spandidos Publicador: D.A. Spandidos
Tipo: Artigo de Revista Científica
EN
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26.3%
The present study aimed to analyze sera proteins in females with cervical intraepithelial neoplasia, grade III (CIN III) and in healthy control females, in order to identify a potential biomarker which detects lesions that have a greater probability of cervical transformation. The present study investigated five sera samples from females who were Human Papilloma Virus (HPV) 16+ and who had been histopathologically diagnosed with CIN III, as well as five sera samples from healthy control females who were HPV-negative. Protein separation was performed using two-dimensional (2D) gel electrophoresis and the proteins were stained with Colloidal Coommassie Blue. Quantitative analysis was performed using ImageMaster 2D Platinum 6.0 software. Peptide sequence identification was performed using a nano-LC ESIMS/MS system. The proteins with the highest Mascot score were validated using western blot analysis in an additional 55 sera samples from the control and CIN III groups. The eight highest score spots that were found to be overexpressed in the CIN III sera group were identified as α-1-B glycoprotein (A1BG), complement component 3 (C3), a pro-apolipoprotein, two apolipoproteins and three haptoglobins. Only A1BG and C3 were validated using western blot analysis...

Pesticide residue determination in groundwater using solid-phase extraction and high-performance liquid chromatography with diode array detector and liquid chromatography-tandem mass spectrometry

Caldas, Sergiane Souza; Demoliner, Adriana; Costa, Fabiane Pinho; D???Oca, Marcelo Gon??alves Montes; Primel, Ednei Gilberto
Fonte: Universidade Federal do Rio Grande Publicador: Universidade Federal do Rio Grande
Tipo: Artigo de Revista Científica
ENG
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36.67%
Res??duos de quatro agrot??xicos foram determinados durante um ano em ??guas de po??os de uma ??rea agr??cola no Sul do Brasil. Os m??todos para a separa????o, identifica????o e quantifica????o dos compostos inclu??ram cromatografia l??quida de alta efici??ncia com detec????o por arranjo de diodos(HPLC-DAD) e cromatografia l??quida acoplada ?? espectrometria de massas (LC-ESI-MS/MS). Uma etapa de pr??-concentra????o baseada na extra????o em fase s??lida com cartuchos de 200 mg de C18 foi realizada. Todos os par??metros anal??ticos ficaram de acordo com os limites sugeridos para a valida????o de m??todos cromatogr??ficos. Os limites de quantifica????o para o m??todo, considerando um fator de pr??-concentra????o de 250 vezes, foram 0,2 ??g L-1 para todos os analitos por HPLCDAD, 4,0 ng L-1 para o clomazona, carbofurano e tebuconazol e 40,0 ng L-1 para o 2,4-D por LC-ESI-MS/MS. Nas amostras de ??guas subterr??neas, o 2,4-D n??o foi detectado e o carbofurano, clomazona e tebuconazol apresentaram concentra????es que variaram entre 0,25 e 10,40 ??g L-1, 0,20 e 0,82 ??g L-1, e 0,20 e 4,16 ??g L-1, respectivamente. Os m??todos mostraram-se adequados para a determina????o de agrot??xicos em ??guas subterr??neas.; Residues of four pesticides in groundwaters were surveyed during one year in an agricultural area in southern Brazil. The methods for separation...

Pesticide residue determination in groundwaters using solid phase extraction and high-performance liquid chromatography with diode array detector and liquid chromatography-tandem mass spectrometry

Demoliner, Adriana; Costa, Fabiane Pinho; D’Oca, Marcelo Gonçalves Montes; Primel, Ednei Gilberto; CALDAS, Sergio Souza
Fonte: Universidade Federal do Rio Grande Publicador: Universidade Federal do Rio Grande
Tipo: Artigo de Revista Científica
ENG
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36.67%
Resíduos de quatro agrotóxicos foram determinados durante um ano em águas de poços de uma área agrícola no Sul do Brasil. Os métodos para a separação, identificação e quantificação dos compostos incluíram cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por arranjo de diodos (HPLC-DAD) e cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-ESI-MS/MS). Uma etapa de pré-concentração baseada na extração em fase sólida com cartuchos de 200 mg de C18 foi realizada. Todos os parâmetros analíticos ficaram de acordo com os limites sugeridos para a validação de métodos cromatográficos. Os limites de quantificação para o método, considerando um fator de pré-concentração de 250 vezes, foram 0,2 μg L-1 para todos os analitos por HPLCDAD, 4,0 ng L-1 para o clomazona, carbofurano e tebuconazol e 40,0 ng L-1 para o 2,4-D por LC-ESI-MS/MS. Nas amostras de águas subterrâneas, o 2,4-D não foi detectado e o carbofurano, clomazona e tebuconazol apresentaram concentrações que variaram entre 0,25 e 10,40 μg L-1, 0,20 e 0,82 μg L-1, e 0,20 e 4,16 μg L-1, respectivamente. Os métodos mostraram-se adequados para a determinação de agrotóxicos em águas subterrâneas.; Residues of four pesticides in groundwaters were surveyed during one year in an agricultural area in southern Brazil. The methods for separation...

Total enzymatic synthesis of the cholecystokinin octapeptide (CCK 26-33); Vollenzymatische Synthese des Cholecystokininoctapeptids (CCK 26-33)

Meng, Li-Ping
Fonte: Universidade de Tubinga Publicador: Universidade de Tubinga
Tipo: Dissertação
EN
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26.3%
Enzymes can be used often favorably in organic syntheses, because they can be applied at room or slightly elevated temperature and in aqueous phase. Therefore these enzymatically catalyzed reactions are economically and environmentally superior to classical organic reactions. The objective of this thesis is to develop a synthetic path to the cholecystokinin octapeptide CCK-8 using exclusively enzymatic methods. The fragment CCK-8 has nearly the full biological activity of cholecystokinin and its therapeutic potential against type 2 diabetes, obesity and epilepsy is studied intensively. During the coupling process, many side reactions observed in the chemical peptide synthesis can be avoided in the enzymatic peptide synthesis. However, each coupling reaction has to be optimized. That means the optimal strategy, substrate structure and concentration, reaction media and temperature, type of the protease and its support for enzyme deposition. In the synthesis of the N-terminal tripeptide fragment Phac-Asp(OMe)-Tyr-Met-OAl, two strategies (Scheme 3.5, Scheme 3.6) with stepwise peptide chain elongation from the N-terminus to the C-terminus were investigated. Because of less reaction steps, higher overall yield and more economic starting materials...

Mécanismes d'activation de la voie lysosomale durant l'apoptose chimio-induite

Parent, Nicolas
Fonte: Université de Montréal Publicador: Université de Montréal
Tipo: Thèse ou Mémoire numérique / Electronic Thesis or Dissertation
FR
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26.48%
L’apoptose est une forme de mort cellulaire essentielle au développement et au maintien de l’homéostase chez les animaux multicellulaires. La machinerie apoptotiq ue requiert la participation des caspases, des protéases conservées dans l’évolution et celle des organelles cytoplasmiques. Les lysosomes subissent des ruptures partielles, labilisation de la membrane lysosomale (LML), qui entraînent l’activation des cathepsines dans le cytoplasme de cellules cancéreuses humaines en apoptose induite par la camptothecin (CPT), incluant les histiocytes humains U-937. Ces modifications lysosomales se manifestent tôt durant l’activation de l’apoptose, concomitamment avec la perméabilisation de la mitochondrie et l’activation des caspases. Une étude protéomique quantitative et comparative a permis d’identifier des changements précoces dans l’expression/localisation de protéines lysosomales de cellules U-937 en apoptose. Lors de deux expériences indépendantes, sur plus de 538 protéines lysosomales identifiées et quantifiées grâce au marquage isobarique iTRAQ et LC-ESIMS/ MS, 18 protéines augmentent et 9 diminuent dans les lysosomes purifiés de cellules en cours d’apoptose comparativement aux cellules contrôles. Les candidats validés par immuno-buvardage et microscopie confocale incluent le stérol-4-alpha-carboxylate 3- déhydrogénase...

Identificação e caracterização de proteinas que se associam 'in vitro' a fita telomerica rica em G de 'Leishmania (Leishmania) amazonensis'; Identification and characterization of proteins that associate in vitro with the Leishmania (Leishmania) amazonensis G-rich telomeric strand

Maribel Fernandez Fernandez
Fonte: Biblioteca Digital da Unicamp Publicador: Biblioteca Digital da Unicamp
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 15/10/2004 PT
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26.48%
Os terminais dos cromossomos de Leishmania (Leishmania) amazonensis contêm repetições teloméricas mantidas pela enzima telomerase da seqüência 5'-TTAGGG-3', a qual é conservada também em outros tripanosomatídeos e outros eucariotos. Utilizando-se frações protéicas purificadas a partir de extratos S100 e nuclear, foi possível se detectar atividade de telomerase e três complexos proteína-DNA que se associam in vitro com seqüências teloméricas ricas em G do parasita. A atividade de telomerase de L. (L.) amazonensis foi detectada por ensaio TRAP ("Telomeric Repeat Amplification Protocol") e apresenta características comuns às telomerases já descritas em outros tripanosomatídeos. Os complexos proteína-DNA foram identificados por EMSA ("Electrophoretic Mobility Shift Assays") e ensaios de "UV cross-linking" e denominados LaGT1-3 (Leishmania amazonensis G-strand telomeric protein 1-3). Eles não são formados: i) com DNA telomérico na forma de dupla fita e com fita rica em C, ii) em experimentos de competição específica usando oligonucleotídeos de seqüências de DNA telomérico, ou iii) após o tratamento enzimático com proteinase K. LaGT1 foi o complexo mais específico, o qual é formado com todas as seqüências de DNA telomérico (Tel1-6...

Avaliação da resposta anti-inflamatória de um extrato de Vaccinium corymbosum (mirtilo) num modelo de artrite reumatoide

Oliveira, Mónica Ferreira
Fonte: Universidade de Lisboa Publicador: Universidade de Lisboa
Tipo: Dissertação de Mestrado
Publicado em //2014 POR
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16.48%
Tese de mestrado, Controlo da Qualidade e Toxicologia dos Alimentos, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2014; Os mirtilos pertencem ao grupo dos frutos vermelhos, vulgarmente conhecidos pelos seus efeitos benefícios na saúde, principalmente devido ao elevado teor de compostos fenólicos. Estes compostos já foram amplamente estudados e está comprovada que a sua ação está relacionada com a atividade antioxidante e anti-inflamatória, entre muitas outras. O principal objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade anti-inflamatória do extrato de mirtilos num modelo animal de artrite reumatóide e para tal preparou-se um extrato recorrendo à variedade Southern Highbush, da espécie Vaccinium corymbosum. Inicialmente testaram-se vários solventes extratantes e diferentes modos de preparação da amostra, com o intuito de determinar qual a melhor metodologia de extração para estes compostos. O extrato resultante da extração com etanol:água 60% e trituração com azoto líquido apresentou o maior teor em fenóis totais. Como tal para a preparação do extrato que foi administrado aos animais utilizou-se este procedimento e procedeu-se à caracterização dos compostos fenólicos presentes no extrato, por ensaios espetrofotométricos (determinação de fenóis...

Identificação e quantificação de adutos covalentes formados entre a valina Nterminal da hemoglobina e o fármaco nevirapina em doentes de HIV: Desenvolvimento e validação de um método analítico por espectrometria de massa de alta resolução

Pereira, Catarina Correia da Cruz
Fonte: Universidade Nova de Lisboa Publicador: Universidade Nova de Lisboa
Tipo: Dissertação de Mestrado
Publicado em /09/2015 POR
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36.48%
A nevirapina é o fármaco antirretroviral mais utilizado nos países em desenvolvimento para combater o vírus da imunodeficiência humana (HIV). Apesar dos seus efeitos benéficos, a nevirapina tem sido associada a casos de hipersensibilidade cutânea e hepatoxicidade graves ou mesmo fatais. Estudos recentes sugerem o envolvimento da bioactivação do seu metabolito de Fase I, 12-OHNevirapina, a espécies electrofílicas capazes de formar adutos covalentes com proteínas. A identificação dos adutos formados, por esta via de bioactivação, com a valina N-terminal da hemoglobina (Hb) isolada de doentes sob terapêutica com a nevirapina foi já efectuada. A técnica analítica utilizada envolveu a utilização do método de derivatização N-alquilo Edman que, por reacção com fenilisotiocianato (PITC), permite destacar o aduto formado com o resíduo N-terminal da Hb, sob a forma de uma hidantoina, que foi posteriormente analisado e quantificado por cromatografia líquida acoplado à espectrometria de massa de tandem por ionização de electrospray. O presente trabalho teve como objectivo inicial optimizar o procedimento experimental envolvido no procedimento de N-alquilo Edman, tendo-se inicialmente comparado a sensibilidades obtidas mediante a utilização de dois agentes derivatizante: o PITC e o isotiocianato de fluoresceína (FTIC). Este processo inicial permitiu estabelecer que a utilização do PTIC como agente de derivatização conduzia a melhores resultados...