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Periodontal ligament and gingival fibroblasts participate in the production of TGF-β, interleukin (IL)-8 and IL-10

MORANDINI, Ana Carolina de Faria; SIPERT, Carla Renata; RAMOS-JUNIOR, Erivan Schnaider; BROZOSKI, Daniel Thomas; SANTOS, Carlos Ferreira
Fonte: Sociedade Brasileira de Pesquisa Odontológica Publicador: Sociedade Brasileira de Pesquisa Odontológica
Tipo: Artigo de Revista Científica
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36.62%
The aim of this study was to quantify and compare the production of transforming growth factor beta (TGF-β), interleukin (IL)-8 and IL-10 by human cultured periodontal ligament and gingival fibroblasts both obtained from the same donors challenged with lipopolysaccharide (LPS) from Porphyromonas gingivalis. Fibroblasts were exposed to 0.1-10 µg/mL of LPS from P. gingivalis and after 24 h the supernatants were collected and analyzed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). TGF-β protein production was upregulated in a concentration-dependent manner, mainly in gingival fibroblasts, which was statistically significant when challenged by 10 µg/mL LPS. Additionally, at this concentration, gingival fibroblasts had almost a two-fold increase in the amount of TGF-β when compared to periodontal ligament fibroblasts. Both periodontal ligament and gingival fibroblasts showed an increase in IL-8 production when challenged with 1 µg/mL and 10 µg/mL LPS. IL-10 production remained unaffected when challenged by any of the LPS concentrations tested in either periodontal ligament or gingival fibroblasts. Our results demonstrate that periodontal ligament and gingival fibroblasts when challenged by LPS from P. gingivalis with 24 h may play a critical role in producing TGF-β and IL-8 but not IL-10.

Differential Production of Macrophage Inflammatory Protein-1 alpha, Stromal-Derived Factor-1, and IL-6 by Human Cultured Periodontal Ligament and Gingival Fibroblasts Challenged With Lipopolysaccharide From P. gingivalis

MORANDINI, Ana Carolina F.; SIPERT, Carla Renata; GASPAROTO, Thais Helena; GREGHI, Sebastiao Luiz A.; PASSANEZI, Euloir; REZENDE, Maria Lucia R.; SANT`ANA, Adriana P.; CAMPANELLI, Ana Paula; GARLET, Gustavo P.; SANTOS, Carlos F.
Fonte: AMER ACAD PERIODONTOLOGY Publicador: AMER ACAD PERIODONTOLOGY
Tipo: Artigo de Revista Científica
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36.6%
Background: Fibroblasts are considered important cells in periodontitis. When challenged by different agents, they respond through the release of cytokines that participate in the inflammatory process. The aim of this study is to evaluate and compare the expression and production of macrophage inflammatory protein (MIP)-1 alpha, stromal-derived factor (SDF)-1, and interleukin (IL)-6 by human cultured periodontal ligament and gingival fibroblasts challenged with lipopolysaccharide (LPS) from Porphyromonas gingivalis. Methods: Fibroblasts were cultured from biopsies of gingival tissue and periodontal ligament of the same donors and used on the fourth passage. After confluence in 24-well plates, the culture medium alone (control) or with 0.1 to 10 mu g/ml of LPS from P. gingivalis was added to the wells, and after 1, 6, and 24 hours, the supernatant and the cells were collected and analyzed by enzyme-linked immunosorbent assay and real-time polymerase chain reaction, respectively. Results: MIP-1 alpha, SDF-1, and IL-6 protein production was significantly greater in gingival fibroblasts compared to periodontal ligament fibroblasts. IL-6 was upregulated in a time-dependent manner, mainly in gingival fibroblasts (P<0.05), which secreted more MIP-1 alpha in the lowest concentration of LPS used (0.1 mu g/ml). In contrast...

In Vitro Evaluation of Acellular Dermal Matrix as a Three-Dimensional Scaffold for Gingival Fibroblasts Seeding

MAIA, Luciana P.; NOVAES JR., Arthur B.; SOUZA, Sergio L. S.; GRISI, Marcio F. M.; TABA JR., Mario; PALIOTO, Daniela B.
Fonte: AMER ACAD PERIODONTOLOGY Publicador: AMER ACAD PERIODONTOLOGY
Tipo: Artigo de Revista Científica
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36.58%
Background: Tissue engineering principles could improve the incorporation of acellular dermal matrix (ADM). The aim of this study is to verify if ADM is a suitable three-dimensional matrix for gingival fibroblasts and cancerous cells ingrowth, and also if cultured medium conditioned in ADM affect cellular behavior. Methods: Canine gingival fibroblasts (CGF), human gingival fibroblasts (HGF), and murine melanoma cell line (B16F10) were seeded on ADM for up to 14 days. The following parameters were assessed: morphology and distribution of CGF, HGF, and B16F10; CGF and HGF viability; and the effect of ADM conditioned medium (CM) on CGF viability. Results: Epifluorescence revealed that CGF were unevenly distributed on the ADM surface, showing no increase in cell number over the periods of study; HGF formed a monolayer on the ADM surface in a higher number at 14 days (P<0.05); B16F10 exhibited an increase in cell number within 7 days (P<0.05), and were mainly arranged in cell aggregates on the ADM, forming a continuous layer at 14 days. A higher percentage of cells on the ADM surface (P<0.05) compared to inside was observed for all cell types. 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MU) values indicated higher cell viability in samples cultured with HGF compared to CGF (P=0.024). A significantly lower cell viability for CGF grown in CM compared to cells grown in non-CM was observed at 48 and 72 hours (P<0.05). Conclusions: ADM is not suitable as a three-dimensional matrix for gingival fibroblasts ingrowth. Gingival fibroblasts and highly proliferative cells as B16F10 can only be superficially located on ADM...

FGFR2 Mutation Confers a Less Drastic Gain of Function in Mesenchymal Stem Cells Than in Fibroblasts

Yeh, Erika; Toledo, Rodrigo Atique Ferraz de; Ishiy, Felipe Augusto André; Fanganiello, Roberto Dalto; Alonso, Nivaldo; Matushita, Hamilton; Rocha, Katia Maria da; Bueno, Maria Rita dos Santos e Passos
Fonte: HUMANA PRESS INC; TOTOWA Publicador: HUMANA PRESS INC; TOTOWA
Tipo: Artigo de Revista Científica
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36.62%
Gain-of-function mutations in FGFR2 cause Apert syndrome (AS), a disease characterized by craniosynostosis and limb bone defects both due to abnormalities in bone differentiation and remodeling. Although the periosteum is an important cell source for bone remodeling, its role in craniosynostosis remains poorly characterized. We hypothesized that periosteal mesenchymal stem cells (MSCs) and fibroblasts from AS patients have abnormal cell phenotypes that contribute to the recurrent fusion of the coronal sutures. MSCs and fibroblasts were obtained from the periostea of 3 AS patients (S252W) and 3 control individuals (WT). We evaluated the proliferation, migration, and osteogenic differentiation of these cells. Interestingly, S252W mutation had opposite effects on different cell types: S252W MSCs proliferated less than WT MSCs, while S252W fibroblasts proliferated more than WT fibroblasts. Under restrictive media conditions, only S252W fibroblasts showed enhanced migration. The presence of S252W mutation increased in vitro and in vivo osteogenic differentiation in both studied cell types, though the difference compared to WT cells was more pronounced in S252W fibroblasts. This osteogenic differentiation was reversed through inhibition of JNK. We demonstrated that S252W fibroblasts can induce osteogenic differentiation in periosteal MSCs but not in MSCs from another tissue. MSCs and fibroblasts responded differently to the pathogenic effects of the FGFR2(S252W) mutation. We propose that cells from the periosteum have a more important role in the premature fusion of cranial sutures than previously thought and that molecules in JNK pathway are strong candidates for the treatment of AS patients.

Ciprofloxacin has antifibrotic effects in scleroderma fibroblasts via downregulation of Dnmt1 and upregulation of Fli1

Bujor, Andreea M.; Haines, Paul; Padilla, Cristina; Christmann, Romy B.; Junie, Monica; Sampaio-Barros, Percival D.; Lafyatis, Robert; Trojanowska, Maria
Fonte: SPANDIDOS PUBL LTD; ATHENS Publicador: SPANDIDOS PUBL LTD; ATHENS
Tipo: Artigo de Revista Científica
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36.63%
Systemic sclerosis (SSc) is characterized by fibrosis of the skin and internal organs. The present study was undertaken to examine the effects of ciprofloxacin, a fluoroquinolone antibiotic implicated in matrix remodeling, on dermal and lung fibroblasts obtained from SSc patients. Dermal and lung fibroblasts from SSc patients and healthy subjects were treated with ciprofloxacin. Western blotting was used to analyze protein levels and RT-PCR was used to measure in RNA expression. The pharmacologic inhibitor UO126 was used to block Erk1/2 signaling. SSc dermal fibroblasts demonstrated a significant decrease in collagen type I mRNA and protein levels after antibiotic treatment, while healthy dermal fibroblasts were less sensitive to ciprofloxacin, downregulating collagen only at the protein levels. Connective tissue growth factor (CCN2) gene expression was significantly reduced and matrix metalloproteinase (MMPI) levels were enhanced after ciprofloxacin treatment to a similar extent in healthy and SSc fibroblasts. Ciprofloxacin induced Erk1/2 phosphorylation, and Erk1/2 blockade completely prevented MMP1 upregulation. However. Smad1 and Smad3 activation in response to TGF beta was not affected. The expression of friend leukemia integration factor 1 (Fli1). a transcriptional repressor of collagen...

"Avaliação da expressão dos receptores de interleucina-8, CXCR1 e CXCR2, e da atividade proliferativa em fibroblastos de quelóide e de pele normal" ; Determination of the interleukin-8 receptors CXCR1 and CXCR2, and proliferative activity in keloids and normal skin fibroblasts

Abdo Filho, Décio
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 05/09/2006 PT
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36.67%
O quelóide é um tumor fibroso benigno que ocorre durante a cicatrização da pele em indivíduos geneticamente predispostos. A cicatrização é um processo biológico complexo e depende da interação de diferentes estruturas teciduais e de um grande número de tipos celulares residentes e infiltrativos, que produzem citocinas. A interleucina 8 (IL-8), citocina pró-inflamatória, é super-expressa pelos fibroblastos durante o desenvolvimento do tecido de granulação, acelerando o processo de cicatrização. Como o quelóide resulta de uma reparação tecidual anormal após lesão da pele, o presente estudo teve por objetivo determinar a expressão dos receptores da IL-8, CXCR1 e CXCR2, e a capacidade proliferativa, pelo ciclo celular, dos fibroblastos queloideanos cultivados e extraídos ex vivo, por citometria de fluxo. Fibroblastos de cicatriz queloideana e de pele normal foram obtidos de 21 pacientes da raça negra, com idade variando entre 10 e 40 anos, de lesões com até 2 anos de evolução. Em nosso estudo constatamos expressão reduzida dos receptores para a IL-8, CXCR1(35,7%±11,2) e CXCR2 (27,8%±11,3), em fibroblastos de cicatriz queloideana cultivados, comparando com a pele normal (44,1±16,2 e 46,3±27,1 respectivamente). Entretanto...

Expressão gênica diferencial de fibroblastos de linfonodos comprometidos ou não comprometidos de pacientes com câncer de mama após cultura isolada ou co-cultura com células epiteliais mamárias normais ou malignas; Differential gene expression of fibroblasts from involved or uninvolved lymph nodes from breast cancer patients cultured alone or cocultured with normal or malignant mammary epithelial cells

Santos, Rosângela Portilho Costa
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 19/01/2007 PT
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36.69%
As interações epitélio-mesênquima podem influenciar o desenvolvimento do tumor no sítio primário e no linfonodo comprometido de pacientes com câncer de mama. Nosso objetivo foi avaliar a taxa de proliferação e perfil gênico de fibroblastos de linfonodos comprometidos e não comprometidos obtidos de pacientes com câncer de mama e determinar a influência de células epiteliais mamárias normais (MCF10A) ou malignas (MDA-MB-231) na expressão gênica destes fibroblastos. Foram estabelecidas culturas primárias de fibroblastos de linfonodos (3 comprometidos e 3 não comprometidos) de 6 diferentes pacientes com câncer de mama e não houve diferença na taxa de proliferação destes fibroblastos. Co-culturas de células MCF10A ou MDA-MB-231 com fibroblastos, separadas fisicamente por membranas porosas, foram realizadas por 72 horas. O RNA total dos fibroblastos foi extraído, amplificado e o perfil gênico foi analisado usando-se uma lâmina de cDNA microarray. Fibroblastos de linfonodos comprometidos e não comprometidos apresentaram perfil gênico similar, pois apenas 13 genes foram modulados, sendo que maior expressão de PGBD3 e PTBP2 em fibroblastos de linfonodos comprometidos foi confirmada em ensaios de RT-PCR em tempo real. Em fibroblastos...

Estudo da expressão da a-actina de músculo liso em cultura de células de polpas dentárias e gengivas humanas tratadas com o fator de transformação de crescimento b1(TGF-b1).; Expression of a-smooth muscle actin in cultured human dental pulp and gingival fibroblasts induced by transforming growth factor-b1 (TGF-b1).

Martinez, Elizabeth Ferreira
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 12/06/2008 PT
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Durante o processo de reparação tecidual, o fator de transformação de crescimento b1 (TGF-b1) apresenta um importante papel na regulação da expressão da a-actina de músculo liso (a-AML) e portanto, na diferenciação miofibroblástica. Como os fibroblastos pulpares apresentam características peculiares, com a expressão de proteínas específicas que os diferem de fibroblastos de outros tecidos conjuntivos, o presente estudo avaliou in vitro se o TGF-b1 aumenta a expressão de a-AML em fibroblastos pulpares humanos comparando-os com fibroblastos de gengiva. Para tal, diferentes doses de TGF-b1 (5 à 10 ng/ml) foram adicionadas às culturas de células, sendo a expressão da a-AML analisada por imunofluorescência e western-blotting. Ambos os tipos celulares imunoexpressaram a-AML mesmo sem o tratamento com o TGF-b1, estando aumentada consideravelmente, quando o TGF-b1 foi adicionado às culturas. Os resultados do presente estudo demonstraram que o TGF-b1 induz a expressão de a-AML...

Produção de MIP-1alfa e SDF-1 por fibroblastos de polpa dental humana em cultura frente ao desafio com Enterococcus faecalis inativado por calor; Production of MIP-1alfa and SDF-1 by cultured human dental pulp fibroblasts challenged by heat killed Enterococcus faecalis

Sipert, Carla Renata
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 01/06/2007 PT
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36.62%
A polpa dental é formada de tecido conjuntivo frouxo sendo constituída por diversas células, dentre as quais os fibroblastos são as mais numerosas. Ao serem submetidas a agressões diversas, estas células respondem com a liberação de substâncias, tais como citocinas e quimiocinas, que participam de maneira ativa no processo inflamatório. Assim sendo, este trabalho teve como proposição: 1. avaliar a capacidade de fibroblastos de polpa dental humana em cultura em produzirem as quimiocinas MIP-l'alfa' /CCL3 e SDF-1/CXCL12; 2. avaliar a produção destas quimiocinas pelos fibroblastos quando estimulados por Enterococcus faecalis morto por calor com relação à quantidade de bactérias por célula e 3. avaliar a liberação destas quimiocinas com relação ao tempo de estímulo. Para o estabelecimento das culturas, foi coletada a polpa de terceiro molar hígido de um paciente saudável. O tecido foi extraído, armazenado e picotado em meio de cultura para fibroblastos (DMEM), os quais foram utilizados a partir da quarta passagem. Após adesão das células a placas de 24 poços, o meio de cultura contendo Enterococcus .faecalis morto por calor numa concentração correspondente a 1, 10 e 100 bactérias por fibroblasto foi adicionado aos poços. Após 1...

Produção diferencial de pró-colágeno tipo I e citocinas por fibroblastos humanos de ligamento periodontal e de gengiva estimulados por lipopolissacarídeo de Porphyromonas gingivalis; Differential production of pro-collagen type I and cytokines by cultured human periodontal ligament and gingival fibroblasts challenged with lipopolyssacharide from Porphyromonas gingivalis.

Morandini, Ana Carolina de Faria
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 26/03/2009 PT
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36.63%
O ligamento periodontal e o tecido gengival são formados por tecido conjuntivo frouxo, sendo constituídos por diversas células, dentre as quais os fibroblastos são as mais numerosas. Ao serem submetidas a agressões diversas, estas células respondem com a liberação de substâncias, tais como citocinas e quimiocinas, que participam de maneira ativa no processo inflamatório, e com a produção de componentes da matriz extracelular fundamentais para o reparo, como por exemplo, o colágeno. Assim sendo, este trabalho teve como objetivo: Avaliar e comparar a expressão e a produção de prócolágeno tipo I, IL6, MIP1 e SDF1 por fibroblastos humanos, cultivados de ligamento periodontal e de tecido gengival, estimulados por lipopolissacarídeo (LPS) de Porphyromonas gingivalis. Foram coletados ligamentos periodontais de terceiros molares não irrompidos e biópsias de gengiva de um mesmo indivíduo (n=3). Estes tecidos foram picotados e mantidos em meio de cultura adequado para fibroblastos, que foram utilizados na quarta passagem. Após adesão dos fibroblastos a placas de 24 poços, o meio de cultura contendo 0,1 10 g/mL de LPS de P. gingivalis foi adicionado às placas em duplicata. O sobrenadante e as células foram coletados após 1...

Estudo in vitro da produção de quimiocinas e pró-colágeno I por fibroblastos de gengiva, ligamento periodontal e polpa dental humanos; In vitro study of chemokines and procollagen I by human gingival, periodontal ligament and dental pulp fibroblasts

Sipert, Carla Renata
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 19/08/2011 PT
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36.69%
Fibroblastos são as células mais numerosas encontradas nos tecidos orais como gengiva, ligamento periodontal e polpa dental. Além de exercerem função estrutural, estas células também desempenham papel importante na resposta imune destes tecidos através do reconhecimento de antígenos e produção de mediadores inflamatórios e citocinas. Evidências apontam ainda para o fato de que fibroblastos não constituem um grupo único de células. Sendo assim, os objetivos deste estudo foram: (I) avaliar a produção diferencial de fibroblastos de gengiva, ligamento periodontal e polpa dental de dentes permanentes e decíduos quanto à produção das quimiocinas CCL3 e CXCL12; (II) avaliar a produção de pró-colágeno I pelas células de polpa e (III) avaliar a expressão diferencial dos fibroblastos quanto a microRNAs. Dentes recentemente extraídos (terceiros molares hígidos) e fragmentos de gengivas saudáveis de três pacientes adultos foram obtidos no Laboratório de Farmacologia e Fisiologia Clínica da Faculdade de Odontologia de Bauru. Caninos decíduos de dois pacientes com indicação para extração por motivos ortodônticos foram obtidos na Clínica de Odontopediatria da mesma unidade. Culturas primárias de fibroblastos de gengiva (n=3)...

Avaliação do papel dos receptores TLR2 e TLR4 na produção de citocinas por fibroblastos humanos periodontais deficientes desses receptores; The role of TLR2 and TLR4 in cytokines production by human periodontal fibroblasts knocked down for these receptors

Morandini, Ana Carolina de Faria
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 02/10/2012 PT
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36.58%
Os fibroblastos são atualmente considerados componentes ativos da resposta imune porque estas células expressam receptores do tipo Toll (TLRs), são capazes de reconhecer padrões moleculares associados a patógenos e mediar a produção de citocinas e quimiocinas durante a inflamação. A resposta imune inata do hospedeiro a lipopolissacarídeos (LPS) de Porphyromonas gingivalis é incomum, já que diferentes estudos relataram que este LPS pode ser um agonista para TLR2 e um antagonista ou agonista para TLR4. A sinalização por TLRs envolve proteínas adaptadoras, como MyD88 e TRAM, que são necessárias para a transdução do sinal até o núcleo para que ocorra a transcrição de RNAm para os mediadores da inflamação. O objetivo deste estudo foi investigar e comparar se a sinalização por meio de TLR2 ou TLR4 poderia afetar a produção de Interleucina (IL)-6, IL-8 e CXCL12 em fibroblastos humanos gengivais (HGF) e fibroblastos humanos de ligamento periodontal (HPLF). Objetivamos também comparar a participação das moléculas adaptadoras MyD88 e TRAM na expressão do RNAm dos mesmos alvos. Material e Métodos: Após silenciamento mediado por RNA de interferência de TLR2, TLR4, MyD88 ou TRAM, confirmado por RT-qPCR, HGF e HPLF...

Estudo da expressão e produção de componentes do sistema renina-angiotensina por fibroblastos de gengiva e ligamento periodontal humanos; Study of expression and production of the renin-angiotensin system components by gingival and periodontal ligament human fibroblasts

Ishikiriama, Bella Luna Colombini
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 13/04/2012 PT
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36.6%
O Sistema Renina-angiotensina (SRA), e um sistema capaz de gerar hormonios peptideos com grande impacto na regulacao cardiovascular e na patogenese das doencas cardiovasculares. Este sistema opera, por meio das acoes da Angiotensina II, tanto em nivel sistemico (endocrino) quanto tecidual (local, paracrino/autocrino) controlando importantes funcoes, varias delas relacionadas a facilitacao da instalacao e progressao do processo inflamatorio. Por este motivo, a producao desta proteina nos tecidos pode estar relacionada a patogenese de muitas doencas, dentre elas a doenca periodontal (DP), tendo em vista seu carater infeccioso-inflamatorio e os achados da literatura que mostram que a inibicao da formacao de Ang II, diminui a perda óssea da DP em animais. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivos: Avaliar in vitro, a) A expressao de componentes do SRA (ANGT, RENINA, ECA, ECA-2, AT1, AT2 e Mas) por fibroblastos de gengiva e ligamento periodontal humanos, por RT-qPCR; b) A producao de componentes do SRA (RENINA, ECA, ECA-2) no sobrenadante de culturas de fibroblastos de gengiva e ligamento periodontal humanos, por ELISA; c) A producao dos receptores do SRA (AT1, AT2 e Mas), nestes fibroblastos, por Imunofluorescencia e d) Se a expressao e a producao dos componentes do SRA por fibroblastos de gengiva e ligamento periodontal humanos...

Avaliação comparativa do comportamento adaptativo de fibroblastos humanos cultivados de mucosa palatina não marginal e de enxerto gengival em área marginal; Comparative evaluation of the adaptive behavior between cultivated fibroblasts from human palatal mucosa and from gingival graft in marginal area

Azevedo, Fabiola Pontes
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 22/03/2013 PT
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36.68%
Enxertos gengivais livres são importantes para garantir condições necessárias para o estabelecimento da homeostasia do periodonto de proteção. O processo de inflamação não ocorre por igual em todos os tecidos conjuntivos do organismo e os fibroblastos têm a capacidade de reagir a estímulos agressivos por meio de liberação de diversas citocinas, que desempenham importante função na formação do infiltrado inflamatório. Até o presente trabalho, não há relatos na literatura acerca da comparação do comportamento dos fibroblastos que compõem a mucosa palatina não marginal e dos fibroblastos provenientes de enxerto gengival livre (EGL) marginal em resistir aos estímulos agressores que ocorrem na doença periodontal. Dessa forma, a proposta do presente trabalho foi investigar se os fibroblastos da mucosa palatina não marginal mudariam seu perfil de secreção de citocinas quando enxertados na margem gengival. Foram coletadas biópsias da mucosa palatina no momento da cirurgia de EGL (período inicial) e após 4 meses (período final) no momento da cirurgia para recobrimento radicular. Os fibroblastos foram cultivados e estimulados com LPS de Porphyromonas gingivalis (Pg) e de Escherichia coli (Ec) por 24h e 48h para avaliação comparativa da expressão de citocinas e mediadores do reparo tecidual...

CCL3 and CXCL12 production in vitro by dental pulp fibroblasts from permanent and deciduous teeth stimulated by Porphyromonas gingivalis LPS

Sipert, Carla Renata; Morandini, Ana Carolina de Faria; Modena, Karin Cristina da Silva; Dionisio, Thiago Jose; Machado, Maria Aparecida Andrade Moreira; Oliveira, Sandra Helena Penha de; Campanelli, Ana Paula; Santos, Carlos Ferreira
Fonte: Universidade Estadual Paulista Publicador: Universidade Estadual Paulista
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 99-105
ENG
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Objective: The aim of this study was to compare the production of the chemokines CCL3 and CXCL12 by cultured dental pulp fibroblasts from permanent (PDPF) and deciduous (DDPF) teeth under stimulation by Porphyromonas gingivalis LPS (PgLPS). Material and Methods: Primary culture of fibroblasts from permanent (n=3) and deciduous (n=2) teeth were established using an explant technique. After the fourth passage, fibroblasts were stimulated by increasing concentrations of PgLPS (0 - 10 pg/mL) at 1, 6 and 24 h. The cells were tested for viability through MTT assay, and production of the chemokines CCL3 and CXCL12 was determined through ELISA. Comparisons among samples were performed using One-way ANOVA for MTT assay and Two-way ANOVA for ELISA results. Results: Cell viability was not affected by the antigen after 24 h of stimulation. PgLPS induced the production of CCL3 by dental pulp fibroblasts at similar levels for both permanent and deciduous pulp fibroblasts. Production of CXCL12, however, was significantly higher for PDPF than DDPF at 1 and 6 h. PgLPS, in turn, downregulated the production of CXCL12 by PDPF but not by DDPF. Conclusion: These data suggest that dental pulp fibroblasts from permanent and deciduous teeth may present a differential behavior under PgLPS stimulation.

In vitro effect of 470 nm LED (Light Emitting Diode) in keloid fibroblasts

Bonatti,Silvilena; Hochman,Bernardo; Tucci-Viegas,Vanina Monique; Furtado,Fabianne; Pinfildi,Carlos Eduardo; Pedro,Ana Carolina; Ferreira,Lydia Masako
Fonte: Sociedade Brasileira para o Desenvolvimento da Pesquisa em Cirurgia Publicador: Sociedade Brasileira para o Desenvolvimento da Pesquisa em Cirurgia
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/02/2011 EN
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36.58%
Purpose: To quantify keloid fibroblasts after irradiation with 470nm blue LED, in vitro. Methods: Fibroblasts from keloid and adjacent skin have been obtained from 6 patients. Cells have been cultivated and maintained in DMEM culture medium. In Petri dishes, they were irradiated with energy doses of 6J, 12J and 18J. After 24 h, counting was done by the average of the triplicates for each sample. Results: There were no significant differences in the number of irradiated keloid fibroblasts at the studied doses (p=0.261). In adjacent skin fibroblasts, differences were observed (p=0.025) concerning the doses of 18 J and 6 J (p=0.03). Conclusions: There was a reduction in the number of adjacent skin fibroblasts irradiated with 470nm blue LED at the energy dose of 18 J compared to the ones irradiated at the energy dose of 6 J. There were no changes in keloid fibroblasts counting at any of the doses applied, 24 h after irradiation.

Periodontal ligament and gingival fibroblasts participate in the production of TGF-β, interleukin (IL)-8 and IL-10

Morandini,Ana Carolina de Faria; Sipert,Carla Renata; Ramos-Junior,Erivan Schnaider; Brozoski,Daniel Thomas; Santos,Carlos Ferreira
Fonte: Sociedade Brasileira de Pesquisa Odontológica - SBPqO Publicador: Sociedade Brasileira de Pesquisa Odontológica - SBPqO
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/04/2011 EN
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36.62%
The aim of this study was to quantify and compare the production of transforming growth factor beta (TGF-β), interleukin (IL)-8 and IL-10 by human cultured periodontal ligament and gingival fibroblasts both obtained from the same donors challenged with lipopolysaccharide (LPS) from Porphyromonas gingivalis. Fibroblasts were exposed to 0.1-10 µg/mL of LPS from P. gingivalis and after 24 h the supernatants were collected and analyzed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). TGF-β protein production was upregulated in a concentration-dependent manner, mainly in gingival fibroblasts, which was statistically significant when challenged by 10 µg/mL LPS. Additionally, at this concentration, gingival fibroblasts had almost a two-fold increase in the amount of TGF-β when compared to periodontal ligament fibroblasts. Both periodontal ligament and gingival fibroblasts showed an increase in IL-8 production when challenged with 1 µg/mL and 10 µg/mL LPS. IL-10 production remained unaffected when challenged by any of the LPS concentrations tested in either periodontal ligament or gingival fibroblasts. Our results demonstrate that periodontal ligament and gingival fibroblasts when challenged by LPS from P. gingivalis with 24 h may play a critical role in producing TGF-β and IL-8 but not IL-10.

Adhesion and transcellular migration of neutrophils and B lymphocytes on fibroblasts

Couture, Patrick; Paradis-Massie, Jérémie; Oualha, Nadia; Thibault, Gaétan
Fonte: Université de Montréal Publicador: Université de Montréal
Tipo: Artigo de Revista Científica
EN
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36.6%
During tissue inflammation, infiltrated leukocytes may have physical contacts with fibroblasts. We observed that neutrophils and B lymphocytes adhered in a larger proportion than T cells on cultured fibroblasts. Microscopy showed that adhesion was also characterized by leukocyte engulfment by the fibroblasts. In migration assays, only neutrophils and B lymphocytes were selectively able to migrate through a fibroblast barrier. Adhesion and migration were increased by stimulation with tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) and phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA). Antibodies against ICAM-1/beta2 integrin blocked the interaction of neutrophils to fibroblasts. For B lymphocytes the couple VCAM-1/alpha4 integrin was also involved in this interaction. Human skin fibroblasts presented similar adhesion characteristics as rat cardiac fibroblasts. By measuring the distance between the border of migration holes and cadherin-positive adherens junctions, more than 65% of the holes correspond to the transcellular route over the paracellular route. Furthermore, vimentin staining revealed that the migration holes were highly nested by intermediate filaments in accordance with the transcellular route. Our results demonstrated that engulfment of neutrophils and B lymphocytes by fibroblasts resulted in selective passage by a transcellular route.; This work was supported by grants from the Canadian Institutes of Health Research and the Natural Sciences and Engineering Research Council

Reprogramming of human gingival and periodontal ligament fibroblasts to pluripotency with defined factors.

Lin, Ni-Hung
Fonte: Universidade de Adelaide Publicador: Universidade de Adelaide
Tipo: Tese de Doutorado
Publicado em //2010
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Background: The use of periodontal stem cells with tissue engineering techniques constitutes an attractive strategy for regenerative periodontal therapy. However, technical difficulties of isolating a large quantity of these cells and problem of immune rejection in allogeneic transplantation limit their dental clinical usefulness. Recently, several groups have successfully reprogrammed adult cells to pluripotent cells by retroviral transduction with four genes - Oct3/4, Sox2, Klf4 and cMyc. The resultant induced pluripotent stem (iPS) cells have proliferative and developmental potentials comparable to those of embryonic stem (ES) cells. These cells may represent a good stem cell source for regenerative periodontal therapy. As periodontal tissues are easily accessible, it is hypothesised that periodontal fibroblasts may be an alternative cell source for derivation of iPS cells. Objective: The aim of this study was to generate and characterise iPS cells from human adult gingival fibroblasts and periodontal ligament (PDL) fibroblasts. Methods: Gingival and PDL tissues from around extracted human adult teeth were collected and digested to obtain single cell suspensions of gingival and PDL fibroblasts. The fibroblasts were lentivirally transduced with mouse receptor for retrovirus mSlc7a1...

Quantitative Analyse der Interleukin 16-Transkription in aktivierten Fibroblasten; Quantitative Analysis of Interleukin 16-Transcription in activated Fibroblasts

Schützle, Heike
Fonte: Universidade de Tubinga Publicador: Universidade de Tubinga
Tipo: Dissertação
DE_DE
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Das Hauptinteresse der vorliegenden Doktorarbeit galt der pharmakologischen Beeinflußbarkeit sowie der quantitativen Analyse der IL-16-Transkription in aktivierten Fibroblasten. Dieses Zytokin scheint in der Pathogenese der rheumatoiden Arthritis (RA) eine wichtige, vermutlich proinflammatorische Rolle zu spielen. Darüberhinaus wurde an einigen Fibroblastenkulturen die Transkriptions-Regulation von IL-18 untersucht, ein weiteres Zytokin, das in erhöhter Konzentration im Synovium von RA-Patienten nachweisbar ist. Für die Experimente wurden dermale und synoviale Fibroblasten von 6 Osteoarthrose (OA)- bzw. Traumapatienten sowie Hautfibroblasten einer neonatalen und adulten Zellinie gesunder Spender herangezogen. Zum Zeitpunkt der Versuche stand leider kein Gewebe von RA-Patienten zur Verfügung. Es kann aber davon ausgegangen werden, daß die Regulation der Zytokin-Transkription in humanen Fibroblasten von RA- und OA- bzw. Traumapatienten im Prinzip den gleichen Mechanismen unterliegt. In einem ersten Versuchsansatz wurden die Fibroblasten (meist in der 3. Subkultur) über 24 h parallel mit jeweils einem von 9 verschiedenen Pharmaka, die in unterschiedliche Signaltransduktionswege eingreifen, inkubiert. Anschließend erfolgte die exakte Quantifizierung der IL-16- bzw. IL-18-mRNA-Menge mittels quantitativer RT-PCR im LightCycler. Für jede Substanz wurde nun die pharmakologisch beeinflußte Transkriptmenge verglichen mit derjenigen einer unbehandelten Kontrolle. Durch die Inkubation mit Forskolin...