Página 1 dos resultados de 17844 itens digitais encontrados em 0.017 segundos

Gene silencing during development of in vitro-produced female bovine embryos

MERIGHE, G. K. F.; BIASE, F. H.; SANTOS-BIASE, W. K. F.; MIRANDA, M. S.; BEM, T. H. C. de; WATANABE, Y. F.; MEIRELLES, F. V.
Fonte: FUNPEC-EDITORA Publicador: FUNPEC-EDITORA
Tipo: Artigo de Revista Científica
ENG
Relevância na Pesquisa
36.8%
In early development, female embryos (XX) produce twice the transcripts of X-linked genes compared with male embryos (XY). During the course of development, inactivation of the X chromosome equilibrates gene dosage, making the development of female embryos viable. Moreover, the biotechnologies used for producing embryos in vitro seem to work better with male embryos, making it easier for them to reach the blastocyst stage and allow for complete gestation. We investigated the expression of three X-linked genes that are involved in development, XIST, G6PD, and HPRT, and of the transcript interferon-tau, in male and female bovine blastocysts produced by nuclear transfer (NT) and by in vitro fertilization (IVF). Oocytes that had been matured in vitro were enucleated and reconstructed with somatic cells from adult animals at 18 h post-maturation. After fusion (two pulses of 2.25 kv/cm) and chemical activation (5.0 mu M ionomycin for 5 min and 2.0 mM 6-DMAP for 3 h), the oocytesomatic cell units were cultivated in CR2 with a monolayer of granulosa cells at 38.8 degrees C, in a humidified 5% CO(2) atmosphere. IVF embryos were inseminated, after centrifugation in a Percoll gradient, with 2 x 10(6) sperm/mL TALP medium supplemented with BSA and PHE and cultivated under the same conditions as the cloned embryos. We used real-time PCR to analyze the gene expression of individual blastocysts compared to expression of the housekeeping gene...

Allele-Specific Expression of the MAOA Gene and X Chromosome Inactivation in In Vitro Produced Bovine Embryos

FERREIRA, A. R.; MACHADO, G. M.; DIESEL, T. O.; CARVALHO, J. O.; RUMPF, R.; MELO, E. O.; DODE, M. A. N.; FRANCO, M. M.
Fonte: WILEY-LISS Publicador: WILEY-LISS
Tipo: Artigo de Revista Científica
ENG
Relevância na Pesquisa
36.69%
During embryogenesis, one of the two X chromosomes is inactivated in embryos. The production of embryos in vitro may affect epigenetic mechanisms that could alter the expression of genes related to embryo development and X chromosome inactivation (XCI). The aim of this study was to understand XCI during in vitro, pre-implantation bovine embryo development by characterizing the allele-specific expression pattern of the X chromosome-linked gene, monoamine oxidase A (MAOA). Two pools of ten embryos, comprised of the 4-, 8- to 16-cell, morula, blastocyst, and expanded blastocyst stages, were collected. Total RNA from embryos was isolated, and the RT-PCR-RFLP technique was used to observe expression of the MAOA gene. The DNA amplicons were also sequenced using the dideoxy sequencing method. MAOA mRNA was detected, and allele-specific expression was identified in each pool of embryos. We showed the presence of both the maternal and paternal alleles in the 4-, 8-to 16-cell, blastocyst and expanded blastocyst embryos, but only the maternal allele was present in the morula stage. Therefore, we can affirm that the paternal X chromosome is totally inactivated at the morula stage and reactivated at the blastocyst stage. To our knowledge, this is the first report of allele-specific expression of an X-linked gene that is subject to XCI in in vitro bovine embryos from the 4-cell to expanded blastocyst stages. We have established a pattern of XCI in our in vitro embryo production system that can be useful as a marker to assist the development of new protocols for in vitro embryo production. Mol. Reprod. Dev. MoL Reprod. Dev. 77: 615-621...

Insulin-like growth factor-1 protects preimplantation embryos from anti-developmental actions of menadione

MOSS, James I.; PONTES, Eduardo; HANSEN, Peter James
Fonte: SPRINGER Publicador: SPRINGER
Tipo: Artigo de Revista Científica
ENG
Relevância na Pesquisa
36.67%
Menadione is a naphthoquinone used as a vitamin K source in animal feed that can generate reactive oxygen species (ROS) and cause apoptosis. Here, we examined whether menadione reduces development of preimplantation bovine embryos in a ROS-dependent process and tested the hypothesis that actions of menadione would be reduced by insulin-like growth factor-1 (IGF-1). Menadione caused a concentration-dependent decrease in the proportion of embryos that became blastocysts. All concentrations tested (1, 2.5, and 5.0 mu M) inhibited development. Treatment with 100 ng/ml IGF-1 reduced the magnitude of the anti-developmental effects of the two lowest menadione concentrations. Menadione also caused a concentration-dependent increase in the percent of cells positive for the TUNEL reaction. The response was lower for IGF-1-treated embryos. The effects of menadione were mediated by ROS because (1) the anti-developmental effect of menadione was blocked by the antioxidants dithiothreitol and Trolox and (2) menadione caused an increase in ROS generation. Treatment with IGF-1 did not reduce ROS formation in menadione-treated embryos. In conclusion, concentrations of menadione as low as 1.0 mu M can compromise development of bovine preimplantation embryos to the blastocyst stage of development in a ROS-dependent mechanism. Anti-developmental actions of menadione can be blocked by IGF-1 through effects downstream of ROS generation.; USDA Cooperative State Research...

Production of Bovine Hand-Made Cloned Embryos by Zygote-Oocyte Cytoplasmic Hemi-complementation

MEZZALIRA, Joana Claudia; OHLWEILER, Lain Uriel; GERGER, Renato Pereira da Costa; CASALI, Renata; VIEIRA, Fabiano Koerich; AMBROSIO, Carlos Eduardo; MIGLINO, Maria Angelica; RODRIGUES, Jose Luiz; MEZZALIRA, Alceu; BERTOLINI, Marcelo
Fonte: MARY ANN LIEBERT INC Publicador: MARY ANN LIEBERT INC
Tipo: Artigo de Revista Científica
ENG
Relevância na Pesquisa
36.69%
The aim of this study was to evaluate the effect of the cytoplast type and activation process on development of cloned embryos. Bovine oocytes (MII) or zygotes at the one-cell stage (IVF) were manually bisected and segregated in MII or IVF hemi-cytoplasts or hemi-karyoplasts. Adult skin cells from a bovine female were used as nucleus donors (SC). Experimental groups were composed of IVF embryos; parthenogenetic embryos; handmade cloned (HMC) embryos; and reconstructed HMC embryos using IVF hemi-cytoplast + MII hemi-cytoplast + SC (G-I); IVF hemi-cytoplast + IVF hemi-cytoplast + SC (G-II); MII hemi-cytoplast + IVF hemi-karyoplast (G-III); and IVF hemi-cytoplast + IVF hemi-karyoplast (G-IV). Embryos from G-I to G-IV were allocated to subgroups as sperm-activated (SA) or were further chemically activated (SA + CA). Embryos from all groups and subgroups were in vitro cultured in the WOW system. Blastocyst development in subgroup G-I SA (28.2%) was similar to IVF (27.0%) and HMC (31.4%) controls, perhaps due to a to a more suitable activation process and/or better complementation of cytoplasmic reprogramming factors, with the other groups and subgroups having lower levels of development. No blastocyst development was observed when using IVF hemi-karyoplasts (G-III and G-IV)...

Presença da Caspase-3 ativa e das proteínas de reparo de lesões do DNA em embriões suínos ativados partenogeneticamente com alta ou baixa capacidade de desenvolvimento; Presence of active Caspase-3 and DNA damage and repair proteins in parthenogenetically activated swines embryos of high and low developmental capacity

Coutinho, Ana Rita Sousa
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 08/10/2007 PT
Relevância na Pesquisa
36.81%
Apoptose é uma forma de morte celular extremamente conservada que tem papel primordial no desenvolvimento animal e na homeostasia celular, agindo como mecanismo de controle de qualidade com a função de remover células danificadas, em excesso ou não-funcionais. Este processo tem papel importante no desenvolvimento embrionário pré-implantacional, pois as células embrionárias estão sujeitas aos danos no DNA que podem ativar mecanismos de reparo de DNA ou induzir apoptose, que culmina com a ativação da enzima caspase-3 responsável pela clivagem de vários substratos celulares. Deste modo, o presente trabalho teve como objetivos determinar a presença da Caspase-3 ativa (+casp-3) e sua influência no desenvolvimento de embriões suínos no estágio de pré-implantação, bem como investigar a detecção de proteínas que atuam no mecanismo de lesão e reparo do DNA. Foram realizados 4 experimentos com oócitos imaturos de fêmeas pré-púberes, obtidos de ovários oriundos de abatedouro, maturados in vitro (MIV) por 44-46 horas. Oócitos em metáfase II (MII) foram ativados partenogeneticamente (AP) com ionomicina e cloreto de estrôncio e cultivados in vitro em PZM3 a 38ºC e 5% CO2 em ar e alta umidade. No primeiro experimento os embriões foram classificados em 4 grupos de acordo com o tempo de clivagem e o número de células: R4 - clivado às 24 horas e com ≥4 células às 48 horas; R2 - clivado às 24 horas e com 2 ou 3 células às 48 horas; L4 - não clivado às 24 horas e com ≥4 células às 48 horas; L2 - não clivado às 24 horas e com 2 ou 3 células às 48 horas. Os embriões foram então avaliados no D-6 do CIV para determinação do índice de desenvolvimento até o estágio de blastocisto. Os embriões do grupo R apresentaram maiores índices de blastocisto...

Avaliação do desenvolvimento após a criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro; Evaluation of development after cryopreservation of in vitro bovine produced embryos

Nicacio, Alessandra Corallo
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 07/03/2008 PT
Relevância na Pesquisa
36.71%
A ineficiência dos protocolos de criopreservação limita o uso em larga escala da produção in vitro de embriões bovinos. O objetivo deste trabalho foi identificar os danos causados pela criopreservação e pelo cultivo embrionário de embriões bovinos produzidos in vitro após a descongelação, avaliando a morfologia, a expressão gênica e o desenvolvimento in vitro antes e após a criopreservação. Complexos cummulusoócitos foram maturados, fecundados e cultivados in vitro. Blastocistos expandidos (n=600) obtidos entre os dias 7 e 9 de cultivo (fecundação D0) foram submetidos a congelação controlada (grupo controlado: 10% de etileno glicol (EG) por 10 minutos, 1,2oC por minuto), congelação rápida (grupo rápido: 10% de EG por 10 minutos , 20% de EG + 20% de Glicerol (Gli) por 30 segundos) ou vitrificação (grupo vitrificação: 10% de EG por 10 minutos, 25% EG + 25% Gli por 30 segundos). Os embriões do grupo controle não foram expostos a crioprotetores e nem a protocolos de criopreservação, sendo avaliado o índice de eclosão 12 dias após a fecundação (46,09%). As palhetas para os protocolos de congelação rápida e vitrificação foram mantidas em vapor de nitrogênio líquido (0,8cm sobre o líquido) por 2 minutos e imersas no nitrogênio líquido. Os embriões foram descongelados por 10 segundos em ar e 20 segundos em banhomaria a 25oC. Os embriões foram reidratados em solução de PBS + 0...

Avaliação de embriões bovinos cultivados in vitro na presença de ácidos graxos e sua sobrevivência pós-criopreservação; Assessment of bovine embryos grown in vitro in the presence of fatty acids and their survival after cryopreservation

Accorsi, Mônica Ferreira
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 14/01/2009 PT
Relevância na Pesquisa
36.69%
Tendo em vista a possibilidade de que a adição de ácidos graxos ao meio de cultivo embrionário aumente a sobrevivência ao congelamento, a proposta deste trabalho foi avaliar o efeito da adição de quatro ácidos graxos isoladamente ao meio de cultivo, dois do grupo ômega 6 (ácido linoléico e ácido linoléico conjugado) e dois do grupo ômega 3 (ácido eicosapentaenóico e ácido docosahexaenóico), na produção de embriões, no número de células, na quantidade de lipídeos, na taxa de re-expansão da blastocele após 48 horas de cultivos pós-descongelamento, na taxa de eclosão pósdescongelamento e na taxa de gestação. Para tal, os oócitos bovinos colhidos de ovários de vacas abatidas foram maturados, fecundados e cultivados in vitro em atmosfera de 5% CO2 em ar, à 38,8°C e máxima umidade. No cultivo, foi adicionado isoladamente um destes ácidos graxos, e foram avaliadas a taxa de clivagem, e a produção de embriões no sétimo e oitavo dia de cultivo. No sétimo dia, os blastocistos expandidos foram congelados com 1,5M de etileno glicol. Eles permaneceram nesta solução por 9 minutos antes de serem envasados e seguirem para a maquina de congelamento numa taxa de resfriamento de 0,5°C/minuto até chegarem à temperatura de -32°C. Dos embriões que foram congelados...

Regulação gênica dos processos iniciais do desenvolvimento de embriões haploides e diploides de Apis mellifera; Gene regulation of early developmental processes of haploid and diploid embryos of Apis mellifera

Pires, Camilla Valente
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 29/04/2014 PT
Relevância na Pesquisa
36.69%
O desenvolvimento embrionário é o resultado de uma sequência controlada de eventos modulados por sinais ambientais e mecanismos intracelulares. Em Hymenoptera, esse processo tem um caráter especial devido ao sistema de determinação do sexo (Haplodiploide). Neste sistema, os ovos fecundados se desenvolvem em fêmeas (diploides) e os ovos não fecundados em machos (haploides). Assim, eventos importantes, como a ativação do ovo e transição materno-zigótica, eventos iniciais da embriogênese, são elementos-chave para compreender o desenvolvimento de ambos os tipos de embriões. Ativação do ovo é um evento complexo acionado em resposta a estímulos externos, necessários para o início da embriogênese. Em abelhas a ativação ovo ocorre independentemente da fecundação e parece ser desencadeado durante a passagem pelo trato reprodutivo da mãe. Além disso, se o ovócito não for fecundado ele irá se desenvolver em um organismo haploide. No entanto, se o ovo recebe o espermatozóide até 30 minutos depois da ativação, o ovo se desenvolve em um organismo diploide. Em Drosophila, a ativação do ovo é também idependente da fecundação. O estímulo inicial que desencadeia o desenvolvimento é devido tensões mecânicas sofridas pelo ovócito durante a ovulação pela passagem através do trato reprodutivo. Neste modelo...

Vitrificação de embriões Mus domesticus domesticus contidos em volumes diferentes de 9,0 m de etileno glicol.; Vitrification of mus domesticus domesticus embryos exposed to differents volumes of 9.0 m ethylene glycol solution

Assaf, Sabrina Silveira
Fonte: Universidade Federal do Rio Grande do Sul Publicador: Universidade Federal do Rio Grande do Sul
Tipo: Dissertação Formato: application/pdf
POR
Relevância na Pesquisa
36.78%
Os experimentos tiveram como objetivo determinar a taxa de eclosão dos embriões vitrificados em volumes diferentes de 9,0 M de etileno glicol. Simultaneamente, testou-se dois procedimentos de estocagem dos fios de teflon, denominados caixa de aço inoxidável e globete/raque. No experimento I, os 881 embriões coletados foram distribuídos em 4 tratamentos: tratamento 1 (T1= controle): 307 embriões foram cultivados in vitro em meio PBSm, acrescido de 0,4% de BSA; tratamento 2 (T2): 292 embriões foram expostos à solução de glicerol 10% acrescida de 0,4% de BSA, envasados em palhetas de 0,25 mL e submetidos ao congelamento pelo método rápido em Biocool; tratamento 3 (T3): 138 embriões foram expostos durante 2 minutos à solução de desidratação (10% de EG + 6% BSA em PBSm) e então transferidos para a solução de vitrificação (50% de EG + 6% de BSA em PBSm), onde permaneceram por 30 segundos e foram colocados em volume de 1 μL no interior de um fio de teflon, medindo 0,4 mm de diâmetro, 2,0 cm de comprimento e 0,05 mm de espessura. Os fios foram acondicionados em uma caixa de aço inoxidável para serem armazenados em nitrogênio líquido; tratamento 4 (T4): 144 embriões foram expostos à solução de desidratação (10% de EG + 6% BSA em PBSm) e após 2 minutos...

Evaluation of developmental changes in bovine in vitro produced embryos following exposure to bovine Herpesvirus type 5

Brenner, Mariana P. C.; Silva-Frade, Camila; Ferrarezi, Marina C.; Garcia, Andrea F.; Flores, Eduardo F.; Cardoso, Tereza C.
Fonte: Biomed Central Ltd. Publicador: Biomed Central Ltd.
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 10
ENG
Relevância na Pesquisa
36.8%
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP); Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Processo FAPESP: 10/52465-9; Processo FAPESP: 10/03204-8; Background: Bovine Herpesvirus type-5 (BoHV-5) is a neurovirulent alpha-Herpesvirus which is potentially pathogenic for cows and suspected to be associated with reproductive disorders. Interestingly, natural transmission of BoHV-5 by contaminated semen was recently described in Australia. Additionally, BoHV-5 was also isolated from the semen of a healthy bull in the same country and incriminated in a natural outbreak of reproductive disease after artificial insemination. In contrast with BoHV-1, experimental exposure of in vitro produced bovine embryos to BoHV-5 does not affect embryo viability and seems to inhibit some pathways of apoptosis. However, the mechanisms responsible for these phenomena are poorly understood. In this study, we examined mitochondrial activity, antioxidant protection, stress response and developmental rates of in vitro produced bovine embryos that were exposed and unexposed to BoHV-5.Methods: For this purpose, bovine embryos produced in vitro were assayed for cell markers after experimental infection of oocytes (n = 30; five repetitions)...

Effects of heat stress on development, quality and survival of Bos indicus and Bos taurus embryos produced in vitro

Silva, C. F.; Sartorelli, E. S.; Castilho, A. C S; Satrapa, R. A.; Puelker, R. Z.; Razza, E. M.; Ticianelli, J. S.; Eduardo, H. P.; Loureiro, B.; Barros, C. M.
Fonte: Universidade Estadual Paulista Publicador: Universidade Estadual Paulista
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 351-357
ENG
Relevância na Pesquisa
36.8%
Heat stress is an important cause of poor development and low survival rates in bovine embryos. Experiments were conducted to test the hypothesis that Bos indicus embryos are more resistant to heat stress than are Bos taurus embryos. In experiment 1, Nelore and Jersey embryos from oocyte pick-up-derived oocytes were submitted to heat stress (96 hours post-insemination, 41 °C, 6 hours), developmental ratios were assessed at Day 7 (Day 0 = day of fertilization), and blastocysts were frozen for RNA extraction. Experiment 2 evaluated expression of COX2, CDX2, HSF1, and PLAC8 in previously frozen blastocysts. In experiment 3, Nellore and Angus embryos from oocyte pick-up-derived oocytes were submitted to heat stress (96 hours post-insemination, 41 °C, 12 hours) and transferred to recipients on Day 7. In experiment 4, embryos developed as in experiment 3 were fixed for Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling labeling and total cell counting. In experiment 1, heat stress decreased the percentage of Jersey oocytes that became blastocysts, but had no effect on Nellore embryos (34.6%, 25.0%, 39.5%, and 33.0% for Jersey control, Jersey heat-stressed, Nellore control, and Nellore heat-stressed oocytes, respectively; P < 0.05). In experiment 2...

Morphology, sex ratio and gene expression of Day 14 in vivo and in vitro bovine embryos

MacHado, Grazieli M.; Ferreira, Allice R.; Guardieiro, Monique M.; Bastos, Michele R.; Carvalho, José O.; Lucci, Carolina M.; Diesel, Tiago O.; Sartori, Roberto; Rumpf, Rodolfo; Franco, Maurício M.; Dode, Margot A. N.
Fonte: Universidade Estadual Paulista Publicador: Universidade Estadual Paulista
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 600-608
ENG
Relevância na Pesquisa
36.73%
The present study was designed to compare Day 14 bovine embryos that were produced entirely in vitro using the post-hatching development (PHD) system with in vivo-derived embryos without or with transient PHD culture from Day 7 to Day 14. Embryos on Day 14 were used for sex determination and gene expression analysis of PLAC8, KRT8, CD9, SLC2A1, SLC2A3, PGK1, HSF1, MNSOD, HSP70 and IFNT using real-time quantitative (q) polymerase chain reaction (PCR). First, Day 7 in vivo-and in vitro-produced embryos were subjected to the PHD system. A higher rate of survival was observed for in vitro embryos on Day 14. Comparing Day 14 embryos produced completely in vivo or completely in vitro revealed that the mean size of the former group was greater than that of the latter (10.29±1.83 vs 2.68±0.33mm, respectively). Expression of the HSP70 and SLC2A1 genes was down-and upregulated, respectively, in the in vitro embryos. The present study shows that in vitro embryos cultured in the PHD system are smaller than in vivo embryos and that of the 10 genes analysed, only two were differentially expressed between the two groups. These findings indicate that, owing to the poor survival rate, the PHD system is not reliable for evaluation of in vitro embryo quality. © 2013 CSIRO.

Programmed cell death-associated gene transcripts in bovine embryos exposed to bovine Herpesvirus type 5

Silva-Frade, Camila; Gameiro, Roberto; Okamura, Lucas Hidenori; Flores, Eduardo Furtado; Cardoso, Tereza Cristina
Fonte: Elsevier B.V. Publicador: Elsevier B.V.
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 113-117
ENG
Relevância na Pesquisa
36.67%
In vitro-produced bovine embryos become infected after exposure to bovine Herpesvirus type 5 (BoHV-5), yet no changes in developmental rates, mitochondrial activity and inhibition of apoptosis are detected in comparison to unexposed embryos. Thus, the aim of the present study was to assess the transcription of mitochondria-mediated apoptosis genes using TaqMan real-time polymerase chain reaction. Transcripts of mcl-1, caspase-2, -3, Apaf-1 and Bax genes were measured after exposure to BoHV-5 in vitro. Mitochondrial dehydrogenase activity was evaluated by MIT test and compared between groups of exposed and unexposed embryos, at day 7 of development. The rate of oocyte maturation was assessed by the extrusion of the first polar body. In summary, BoHV-5 exposed embryos retained their viability, mitochondrial dehydrogenase activity and displayed up-regulation of transcription of survival mcl-1 gene and down-regulation of Bax transcription in relation to mitochondria-mediated pathway which might improve embryo viability. These findings demonstrate that BoHV-5 exposed embryos maintain their viability and mitochondrial dehydrogenase activity with no compromise of embryos produced in vitro. (c) 2013 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Cryopreservation of Byrsonima intermedia embryos followed by room temperature thawing

Silva,Luciano Coutinho; Paiva,Renato; Swennen,Rony; Andrè,Edwige; Panis,Bart
Fonte: Editora da Universidade Estadual de Maringá - EDUEM Publicador: Editora da Universidade Estadual de Maringá - EDUEM
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/09/2014 EN
Relevância na Pesquisa
36.67%
Byrsonima intermedia is a shrub from the Brazilian Cerrado with medicinal properties. The storage of biological material at ultra-low temperatures (-196°C) is termed cryopreservation and represents a promising technique for preserving plant diversity. Thawing is a crucial step that follows cryopreservation. The aim of this work was to cryopreserve B. intermedia zygotic embryos and subsequently thaw them at room temperature in a solution rich in sucrose. The embryos were decontaminated and desiccated in a laminar airflow hood for 0-4 hours prior to plunging into liquid nitrogen. The embryo moisture content (% MC) during dehydration was assessed. Cryopreserved embryos were thawed in a solution rich in sucrose at room temperature, inoculated in a germination medium and maintained in a growth chamber. After 30 days, the embryo germination was evaluated. No significant differences were observed between the different embryo dehydration times, where they were dehydrated for at least one hour. Embryos with a MC between 34.3 and 20.3% were germinated after cryopreservation. In the absence of dehydration, all embryos died following cryopreservation. We conclude that B. intermedia zygotic embryos can be successfully cryopreserved and thawed at room temperature after at least one hour of dehydration in a laminar airflow bench.

Tissue vitamin E concentrations in Rainbow Trout (Oncorhynchus mykiss) embryos exposed to Retene, Dispersed Oil, and Oil Dispersant

Duimering, Kristen N.
Fonte: Quens University Publicador: Quens University
Tipo: Tese de Doutorado
EN
Relevância na Pesquisa
36.67%
Oil components such as alkyl polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) induce oxidative stress in developing fish embryos because reactive oxygen species (ROS) are a by-product of PAH metabolism by Cytochrome P450 1A (CYP1A) enzymes. The result is a syndrome of pathology and malformations known as blue sac disease that leads to mortality and reduced recruitment. Vitamin E, a known antioxidant, has been implicated as a maternally-derived defence mechanism against ROS that are generated from catabolism for energy production and tissue development. The goals of this study were to quantify vitamin E in developing rainbow trout and to characterize vitamin E metabolism under normal conditions, as well as in the presence of chemicals that have been shown to induce ROS production. Vitamin E in trout embryos exposed to retene (a model alkyl PAH), chemically dispersed oil, and associated controls, was quantified throughout development from newly fertilized eggs to feeding larvae. The results indicate a significant metabolic depletion of vitamin E concentrations during normal trout embryogenesis from fertilization to feeding, but the rate of vitamin E depletion was not significantly different among rainbow trout embryos exposed to oil dispersants...

The development and ultrastructure of intergeneric nuclear transfer embryos using ovine ooplasm.

Hamilton, Hamish MacDonald
Fonte: Universidade de Adelaide Publicador: Universidade de Adelaide
Tipo: Tese de Doutorado
Publicado em //2005
Relevância na Pesquisa
36.85%
This thesis encompasses work that aimed to further understand genomic reprogramming, an event crucial in obtaining development in cloned embryos produced by somatic cell nuclear transfer (SCNT). An increasing number of different mammalian species have been cloned using nuclear transfer technology since Dolly the cloned sheep was first successfully produced. However, the biological mechanisms involved in the process of nuclear reprogramming are yet to be fully described. At the centre of this study was an intergeneric SCNT model, which was implemented to determine whether reprogramming factors are conserved across genera. The interaction between donor nucleus and recipient ooplasm was characterised with regard to developmental potential, timing of genome activation, nucleolus formation, and expression of significant proteins. In initial studies, fusion parameters of the intergeneric SCNT procedure were optimised for the ovine cytoplast and porcine donor granulosa cell. Cell fusion and lysis percentages were determined over a range of electrical pulse voltage, duration and repetition. The optimal electrofusion settings were a single DC pulse of 1.5 kV/cm for 20 usec following a 2 sec 400 kHz alignment pulse. In addition, it was demonstrated that ovine oocytes were sensitive to electric stimulation to the extreme that oocyte activation would occur no matter how low the voltage. The practical significance was that it would not be possible to implement a fusion before activation protocol. The ability of the ooplasm of one species to replicate chromosomes and support early embryo cleavage was determined in a preliminary experiment where intergeneric embryos were produced by SCNT using bovine and ovine foetal fibroblasts...

Influência de etossulfato de fenazina na produção in vitro de embriões bovinos, gestação e na expressão gênica da via do metabolismo do triacilglicerol; Influence of phenazine ethosulphate on in vitro production of bovine embryos, pregnancy and gene expression of triacylglycerol metabolism pathway

Vaquero, Camila Gabriela Pereira
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 26/06/2015 PT
Relevância na Pesquisa
36.73%
A produção in vitro (PIV) de embriões tem sido utilizada amplamente no Brasil como ferramenta para acelerar o melhoramento genético do rebanho. Quando associada à criopreservação, a PIV permite maior flexibilidade da biotecnologia e possibilita estabelecer um banco de embriões. Há a possibilidade que a alta sensibilidade à criopreservação dos embriões bovinos seja influenciada principalmente pela grande quantidade de lipídeos intracitoplasmáticos, sendo isso relacionado especialmente às condições de cultivo in vitro. O Etossulfato de Fenazina (PES) consiste em um regulador do metabolismo de lipídeos. Através da oxidação de NADPH, estimula a via da pentose-fosfato e assim inibe a síntese de ácidos graxos, podendo levar a efeitos benéficos na criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro. O Fator de transcrição denominado proteína de ligação do elemento regulatório de esterol (SREBP-1c), regula preferencialmente a transcrição de genes da síntese de triacilglicerol e fosfolipídios e, a enzima Estearoil Co-A desaturase (SCD1) promove a síntese de ácidos graxos monoinsaturados, conferindo fluidez às membranas celulares. O objetivo desse trabalho foi avaliar a suplementação de diferentes concentrações do etossulfato de fenazina (PES) no meio de cultivo...

Effects of different cryopreservation methods on post-thaw culture conditions of in vitro produced bovine embryos

Nicacio, Alessandra Corallo; Simoes, Renata; de Paula-Lopes, Fabiola Freitas; Oliveira de Barros, Flavia Regina; Peres, Maria Angelica; Ortiz D'Avila Assumpcao, Mayra Elena; Visintin, Jose Antonio
Fonte: Cambridge Univ Press; New York Publicador: Cambridge Univ Press; New York
Tipo: Artigo de Revista Científica
ENG
Relevância na Pesquisa
36.69%
The aim of this work was to evaluate the effect of cryopreservation protocols on subsequent development of in vitro produced bovine embryos under different culture conditions. Expanded in vitro produced blastocysts (n = 600) harvested on days 7-9 were submitted to controlled freezing [slow freezing group: 10% ethylene glycol (EG) for 10 min and 1.2 degrees C/min cryopreservation]; quick-freezing [rapid freezing group: 10% EG for 10 min, 20% EG + 20% glycerol (Gly) for 30 s]; or vitrification [vitrification group: 10% EG for 10 min, 25% EG + 25% Gly for 30 s] protocols. Control group embryos were not exposed to cryoprotectant or cryopreservation protocols and the hatching rate was evaluated on day 12 post-insemination. In order to evaluate development, frozen-thawed embryos were subjected to granulosa cell co-culture in TCM199 or SOFaa for 4 days. Data were analyzed by PROC MIXED model using SAS Systems for Windows (R). Values were significant at p < 0.05. The hatching rate of the control group was 46.09%. In embryos cultured in TCM199, slow freezing and vitrification group hatching rates were 44.65 +/- 5.94% and 9.43 +/- 6.77%, respectively. In embryos cultured in SOFaa, slow freezing and vitrification groups showed hatching rates of 11.65 +/- 3.37 and 8.67 +/- 4.47%...

Cultivo de embriões bovinos produzidos in vitro: efeito do número de embriões e da proporção de meio; Culture of in vitro produced bovine embryos: effect of number of embryos and medium ratio

Brum, Daniela dos Santos; Leivas, Fábio Gallas; Bernardi, Mari Lourdes; Mozzaquatro, Fabrício Desconzi; Silva, Carlos Antonio Mondino; Rubin, Mara Iolanda Batistella
Fonte: Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Publicador: Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia
Tipo: info:eu-repo/semantics/article; info:eu-repo/semantics/publishedVersion; ; ; ; ; ; Formato: application/pdf
Publicado em 01/01/2006 POR
Relevância na Pesquisa
36.73%
Na última década, os produtores de leite e carne bovina incrementaram consideravelmente o uso da aspiração folicular (OPU) associada à produção in vitro de embriões (IVP). Oócitos recuperados pela OPU têm qualidade diversificada e seu número reduzido requer condições diferenciadas de cultivo para a IVP. Para determinar o efeito do número de embriões e volume de meio sobre a IVP, 1428 embriões bovinos foram cultivados em grupos de 5, 10 e 20, em 1:1, 1:5 e 1:10mL de meio. Grupos de 20 oócitos foram maturados in vitro em 200mL de TCM-199+ rFSHh+10% de soro de vaca em estro (SVE), por 24h. A fecundação in vitro foi em grupos de 20 oócitos/200mL de meio Fert-Talp, por 18h com 1x10(6) espermatozóides/mL. O cultivo foi em SOFaaci+5% SVE por 8 dias. Considerando-se o dia da fecundação como D0, conduziu-se as avaliações no D2 (clivagem), D7 (blastocistos) e no D9 (eclosão). A taxa de clivagem foi superior quando o cultivo foi com 20 embriões e não foi afetada quando a proporção de meio variou (1:1; 1:5 e 1:10). Com as proporções de meio de cultivo 1:5 ou 1:10, a taxa de embriões em D7 foi superior (P<0.05) à 1:1. O número de embriões cultivados influenciou a produção de blastocistos em D7 (P<0,05) com 20 embriões/gota. Estes resultados também se refletem nos percentuais de blastocistos eclodidos em D9...

Co-cultivo de zigotos e embriões de duas células de camundongos (Mus musculus domesticus) em suspensão de células epiteliais de ovidutos de camundongos e bovinos nos meios CZB sem glicose, TCM199 e Ménézo B2; Zygotes and two cells mouse embryos in co-culture of mouse and bovine epithelial cells in CZB glucose free, TCM199 and Ménézo B2 mediuns

Tavares, Liliam Mara Trerrisan; Assumpção, Mayra Elena Ortiz D'’Avila; Ferreira, Fernando; Lima, Alecsandra Sobreira; Mello, Marco Roberto Bourg; Visintin, José Antonio
Fonte: Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Publicador: Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia
Tipo: info:eu-repo/semantics/article; info:eu-repo/semantics/publishedVersion; ; Formato: application/pdf
Publicado em 01/01/1999 POR
Relevância na Pesquisa
36.69%
Zigotos e embriões de 2 células de camundongos F1 (C57/DBA) foram cultivados (controle) e co-cultivados em suspensões de células epiteliais de ovidutos de camundongos (MOEC) e de bovinos (BOEC) até o estádio de blastocistos nos meios CZB, TCM199 e Ménézo B2. Os zigotos que atingiram os estádios de blastocistos expandido e eclodido no CZB foram 44 (38,26%) para o controle, 2 (1,89%) para as MOEC e 8 (6,72%) para as BOEC, sendo que o controle apresentou-se estatisticamente diferente (p<=0,05) em relação às MOEC e às BOEC. Os zigotos cultivados e co-cultivados nos meios TCM199 e B2 não clivaram além de 2 células. Os embriões de 2 células que desenvolveram até blastocistos no CZB foram 46 (43,80%) para o controle, 45 (38,79%) para as MOEC e 37 (29,60%) para as BOEC, sendo que o controle apresentou-se estatisticamente diferente (p<=0,05) em relação às BOEC. No TCM199, o total de blastocistos foi de 52 (48,15%) para o controle, 68 (39,08%) para as MOEC e 64 (48,49%) para as BOEC, não havendo diferença estatística (p>;0,05) entre os três grupos. No B2, o total de blastocistos foi de 28 (24,78%) para o controle, 34 (28,10%) para as MOEC e 25 (23,81%) para as BOEC, não havendo diferença estatística (p>;0...