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Disparity between Multilocus Enzyme Electrophoresis, Microsatellite Markers and Pulsed-Field Gel Electrophoresis in epidemiological tracking of Candida albicans

BORIOLLO, Marcelo Fabiano Gomes; DIAS, Ricardo Antunes; FIORINI, Joao Evangelista; OLIVEIRA, Nelma de Mello Silva; SPOLIDORIO, Denise Madalena Palomari; SOUZA, Henrique Marques Barbosa de; FIGUEIRA, Antonio Vargas de Oliveira; PIZZIRANI-KLEINER, Aline Apa
Fonte: ELSEVIER SCIENCE BV Publicador: ELSEVIER SCIENCE BV
Tipo: Artigo de Revista Científica
ENG
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Various molecular systems are available for epidemiological, genetic, evolutionary, taxonomic and systematic studies of innumerable fungal infections, especially those caused by the opportunistic pathogen C. albicans. A total of 75 independent oral isolates were selected in order to compare Multilocus Enzyme Electrophoresis (MLEE), Electrophoretic Karyotyping (EK) and Microsatellite Markers (Simple Sequence Repeats - SSRs), in their abilities to differentiate and group C. albicans isolates (discriminatory power), and also, to evaluate the concordance and similarity of the groups of strains determined by cluster analysis for each fingerprinting method. Isoenzyme typing was performed using eleven enzyme systems: Adh, Sdh, M1p, Mdh, Idh, Gdh, G6pdh, Asd, Cat, Po, and Lap (data previously published). The EK method consisted of chromosomal DNA separation by pulsed-field gel electrophoresis using a CHEF system. The microsatellite markers were investigated by PCR using three polymorphic loci: EF3, CDC3, and HIS3. Dendrograms were generated by the SAHN method and UPGMA algorithm based on similarity matrices (S(SM)). The discriminatory power of the three methods was over 95%, however a paired analysis among them showed a parity of 19.7-22.4% in the identification of strains. Weak correlation was also observed among the genetic similarity matrices (S(SM)(MLEE) x S(SM)(EK) x S(SM)(SSRs)). Clustering analyses showed a mean of 9 +/- 12.4 isolates per cluster (3.8 +/- 8 isolates/taxon) for MLEE...

Determination of ciclopirox olamine in pharmaceutical products by capillary electrophoresis with capacitively coupled contactless conductivity detection

FELIX, Fabiana Silva; LAGO, Claudimir Lucio do; ANGNES, Lucio
Fonte: WILEY-BLACKWELL Publicador: WILEY-BLACKWELL
Tipo: Artigo de Revista Científica
ENG
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This paper describes the determination of ciclopirox olamine in pharmaceutical formulations using capillary electrophoresis with capacitively coupled contactless conductivity detection. In an alkaline medium, ciclopirox olamine is converted into an anionic species and its detection is possible in capillary electrophoresis with capacitively coupled contactless conductivity detection without an electroosmotic flow modifier, because it is a low-mobility species. A linear working range from 2.64 to 264 mu g/mL in sodium hydroxide electrolyte as well as low detection limit (0.39 mu g/mL) and a good repeatability (RSD = 3.4% for 264 mu g/mL ciclopirox solution (n = 10)) were achieved. It was also possible to determine olamine in its cationic form when acetic acid was used as the electrolyte solution. The results obtained include a linear range from 26.4 to 184.8 mu g/mL and a detection limit of 2.6 mu g/mL olamine. The proposed methods were applied to the analysis of commercial pharmaceutical products and the results were compared with the values indicated by the manufacturer as well as those obtained using a titrimetric method recommended by American Pharmacopoeia.; FAPESP; Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP); Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); CNPq; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES); CAPES; IM2C (Instituto do Milenio de Materiais Complexos); IM2C (Instituto do Milenio de Materiais Complexos); RENAMI project; RENAMI project; SAMUTI project; SAMUTI project

Fabrication and integration of planar electrodes for contactless conductivity detection on polyester-toner electrophoresis microchips

COLTRO, Wendell Karlos Tomazelli; SILVA, Jose Alberto Fracassi da; CARRILHO, Emanuel
Fonte: WILEY-V C H VERLAG GMBH Publicador: WILEY-V C H VERLAG GMBH
Tipo: Artigo de Revista Científica
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In this report, we describe the microfabrication and integration of planar electrodes for contactless conductivity detection on polyester-toner (PT) electrophoresis microchips using toner masks. Planar electrodes were fabricated by three simple steps: (i) drawing and laser-printing the electrode geometry on polyester films, (ii) sputtering deposition onto substrates, and (iii) removal of toner layer by a lift-off process. The polyester film with anchored electrodes was integrated to PT electrophoresis microchannels by lamination at 120 degrees C in less than 1 min. The electrodes were designed in an antiparallel configuration with 750 mu m width and 750 gm gap between them. The best results were recorded with a frequency of 400 kHz and 10 V-PP using a sinusoidal wave. The analytical performance of the proposed microchip was evaluated by electrophoretic separation of potassium, sodium and lithium in 150 mu m wide x 6 mu m deep microchannels. Under an electric field of 250 V/cm the analytes were successfully separated in less than 90 s with efficiencies ranging from 7000 to 13 000 plates. The detection limits (S/N = 3) found for K+, Na+, and Li+ were 3.1, 4.3, and 7.2 mu mol/L, respectively. Besides the low-cost and instrumental simplicity...

Detecção condutométrica sem contato (oscilométrica) para eletroforese capilar de zona e cromatografia micelar eletrocinética; Contactless conductivity detection for capillary zone electrophoresis and micellar electrokinetic chromatography

Silva, José Alberto Fracassi da
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 19/03/2001 PT
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36.48%
Este trabalho descreve a construção e avaliação de um detector condutométrico sem contato (oscilométrico) para sua aplicação em eletroforese capilar de zona e cromatografia micelar eletrocinética (MEKC). A construção do detector contou com a avaliação de diversos materiais e métodos para a confecção dos eletrodos, tão bem como o aperfeiçoamento do seu circuito eletrônico. O seu comportamento e desempenho foram verificados através do estudo dos diversos parâmetros que influenciam sua resposta, como freqüência e amplitude do sinal aplicado, temperatura e condutividade do meio. Além disso, a simulação do circuito equivalente da cela de detecção auxiliou no entendimento das propriedades do detector frente a alterações na condutividade do meio, na freqüência de operação e nas dimensões da cela. A otimização dos parâmetros operacionais foi racionalizada pela formulação de equações analíticas que descrevem o fator de resposta do detector a partir de parâmetros obtidos experimentalmente. Para o desenvolvimento do sistema de detecção, dois equipamentos completos de eletroforese capilar foram construídos. Sistemas de injeção de amostra por pressão, por gravidade, e eletrocinética foram desenvolvidos. Um dos equipamentos permite que a injeção da amostra seja feita do lado aterrado da fonte de alta tensão. Conseqüentemente...

"Desenvolvimento de novos sensores a partir de CD-Rs para análise voltametrica e de métodos de eletroforese capilar para monitoramento de íons em águas"; Development of new sensors from compact disc for voltammetric analysis and electrophoresis methods for monitoring of ions in water

Richter, Eduardo Mathias
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 10/12/2004 PT
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36.54%
Neste trabalho descreve-se o desenvolvimento de metodologias para análise de metais pesados em águas de abastecimento (sistema Guarapiranga) e em água de chuva por métodos voltamétricos, a quantificação de cátions e ânions por eletroforese capilar com detecção condutométrica sem contato (EC-DCC), a construção de eletrodos de prata a partir de CD-Rs e sua aplicação para medidas potenciométricas, amperométricas e voltamétricas, a confecção de microeletrodos de ouro explorando técnicas de micro-fabricação com toner e sua aplicação como detector amperométrico em eletroforese capilar e o uso de máscaras de toner para construção de redes de microeletrodos de ouro, platina e carbono. Para o desenvolvimento de metodologia para monitorar chumbo, cobre e mercúrio em águas de abastecimento e em água de chuva, enfatizou-se a utilização de dispositivos semidescartáveis de ouro construídos a partir de CD-Rs utilizando técnicas eletroanalíticas de redissolução. O limite de detecção para 300 s de pré-concentração foi calculado em 80, 90 e 100 ng L-1 para Pb2+, Cu2+ e Hg2+, respectivamente. O volume mínimo de amostra necessário para esta análise é de 0,5 mL. Para analisar estes metais em amostras de águas coletadas do sistema Guarapiranga...

Avaliação da albuminúria e da eletroforese de proteínas urinárias de cães com hiperadrenocorticismo e a relação com a pressão arterial sistêmica; Evaluation of albuminuria and urinary protein electrophoresis in dogs with hyperadrenocorticism and the relationship with sistemic blood pressure

Cavalcante, Carolina Zaghi
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 19/12/2007 PT
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O hiperadrenocorticismo é uma das endocrinopatias mais comuns em cães, sendo caracterizado pela exposição excessiva de glicocorticóides secretados pelas adrenais. A hipercortisolemia crônica pode promover várias complicações, incluindo hipertensão sistêmica e glomerulonefrite. A glomerulonefrite pode desencadear variáveis graus de proteinúria e uma tendência de evolução para doença renal crônica. A perda de proteínas na urina, principalmente da albumina, é uma característica das doenças glomerulares e a determinação de variáveis laboratoriais, como a razão proteína:creatinina urinária (RPC), albuminúria (teste de ELISA) e eletroforese das proteínas urinárias, são recomendadas para a elucidação do diagnóstico. Assim, o objetivo do estudo é avaliar a relação entre proteinúria e hipertensão arterial sistêmica em cães com hiperadrenocorticismo e verificar, pela avaliação da albuminúria e do peso molecular das proteínas urinárias, o segmento do néfron que foi comprometido ou lesado. Foram avaliados 30 cães com diagnóstico de hiperadrenocorticismo, subdivididos em 13 cães com hipertensão arterial sistêmica (grupo I) e 17 cães normotensos (grupo II). Foram determinados a razão proteína:creatinina urinária (RPC); a albuminúria pela avaliação da albumina normalizada e razão albumina: creatinina urinária (RAC) e a eletroforese de proteínas pela técnica em gel de poliacrilamida...

Eletroforese capilar como ferramenta analítica para toxicologia forense; Cappilary electrophoresis as analytical tool for forensic toxicology

Costa, José Luiz da
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 13/06/2008 PT
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36.51%
No primeiro capítulo deste trabalho, são apresentados aspectos gerais sobre toxicologia forense e sobre a eletroforese capilar, onde se buscou mostrar como a técnica analítica pode ser útil para aplicações forenses. O segundo capítulo apresenta o desenvolvimento de metodologia analítica baseada em eletroforese capilar com detecção por arranjo de diodos para determinação de drogas de abuso ou seus produtos de biotransformação em humor vítreo. Foram estudados parâmetros como a composição do eletrólito de corrida (com especial atenção ao fenômeno de eletrodispersão), pré-concentração online (stacking) e modo de extração dos analitos. Foi obtida completa separação eletroforética de 12 analitos investigados em menos de 10 minutos de corrida. Os parâmetros de confiança analítica do método mostraram este é perfeitamente aplicável às análises toxicológicas com finalidade forense. O terceiro capítulo apresenta a elaboração de metodologia analítica baseada em eletroforese capilar acoplada a espectrometria de massas para determinação de cocaína e cinco produtos de biotransformação em urina, com procedimento de preparo da amostra biológica simplificado. O procedimento desenvolvido apresentou sensibilidade adequada para verificação de intoxicações agudas por cocaína...

Implementação e otimização de detector condutométrico sem contato para eletroforese capilar; Implementation and optimization of contactless conductometric detector for capillary electrophoresis

Francisco, Kelliton José Mendonça
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 14/12/2010 PT
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A presente dissertação trata da implementação e otimização de um sistema de detecção condutométrica sem contato capacitivamente acoplada (C4D) para Eletroforese Capilar (CE). O sistema é caracterizado pela compactação do sistema de detecção, versatilidade e flexibilidade de instalação em diferentes equipamentos comerciais de eletroforese capilar e home made. Desde a década de 80, a eletroforese capilar vem se consolidando como uma das técnicas de separação mais relevantes. Normalmente, os instrumentos comerciais são disponibilizados com detectores ópticos e detectores eletroquímicos. A C4D é utilizada em eletroforese capilar posicionando-se dois eletrodos tubulares envoltos ao capilar. A aplicação de sinais de alta frequência entre os eletrodos permite monitorar variações de condutividade da solução dentro do capilar. Assim, a resposta do detector depende de diversos fatores como mobilidade do analito, do co-íon do eletrólito, da frequência e amplitude do sinal aplicado entre os eletrodos e da geometria dos mesmos. A ausência de componentes móveis torna o presente detector compacto (6,5 cm3) e robusto. O presente C4D é constituído de um oscilador local funcionando a 1,1 MHz, um circuito capaz de converter corrente em tensão...

Separação de fármacos antimaláricos por eletroforese capilar; Separation of antimalarial drugs by capillary electrophoresis

Rodrigues, Karina Trevisan
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 24/08/2012 PT
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A malária é a doença que mais mortes causa no mundo. O uso de fármacos antimaláricos representa a solução mais eficaz para o combate e controle da doença e o interesse pelo desenvolvimento de novos fármacos é grande devido a problemas de resistência. Existe uma grande variedade de fármacos antimaláricos, sendo que muitos deles são quirais, vendidos e administrados como mistura racêmica. Nas últimas décadas, houve um aumento no interesse quanto aos aspectos farmacodinâmicos e farmacocinéticos de fármacos quirais, devido ao conhecimento de que um dos isômeros pode ser mais ativo ou mais tóxico que o outro. Sendo assim, tem-se a necessidade do desenvolvimento de métodos analíticos enantiosseletivos, e a eletroforese capilar tem emergido como uma técnica de separação quiral com alto poder de resolução. Além disso, a inexistência de métodos oficiais para fármacos antimaláricos e os poucos estudos que relatam aplicações na análise de formulações farmacêuticas, demandam o desenvolvimento e validação de novos métodos para tal finalidade. Este trabalho tem como objetivo o desenvolvimento de dois métodos analíticos, não quiral e quiral, para a determinação de fármacos antimaláricos em formulações farmacêuticas por eletroforese capilar. O método não quiral utilizou eletroforese capilar de zona...

Derivatização eletroquímica da álcoois num sistema em fluxo para determinação quantitativa por eletroforese capilar com detecção condutométrica sem contato; Electrochemical derivatization of alcohols in a flow system for quantitative determinations by capillary electrophoresis and contactless conductivity detection

Santos, Mauro Sergio Ferreira
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 29/10/2012 PT
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36.43%
A eletroforese capilar (CE) é uma técnica poderosa de separação que explora as diferenças na mobilidade de espécies iônicas sob efeito do campo elétrico. Não permite, contudo, separação de misturas de moléculas neutras, possível mediante formação de complexos com carga, derivatização química ou cromatografia eletrocinética micelar (MEKC). A derivatização eletroquímica tem sido usada em combinação com HPLC, entre outras técnicas, mas não ainda com CE e para fins quantitativos, como proposto e demonstrado nesta dissertação, em que se enfoca, como sistemas modelo, álcoois primários de cadeia curta e se recorre a sistema em fluxo designado de EC-CE-C4D, que consiste de uma célula eletroquímica acoplada com equipamento de eletroforese capilar provido de detector de condutividade sem contato direto com os eletrodos. O sistema EC-CE-C4D, inicialmente concebido para efetuar pré-concentração e redissolução eletroquímica de metais seguida de separação eletroforética, possibilitou também o monitoramento de produtos com carga, formados em processos eletrocatalíticos, fato que inspirou a investigação da aplicabilidade, também do sistema à derivatização eletroquímica de analitos neutros em iônicos ou ionizáveis. Inicialmente...

Análise de aldeídos de baixa massa molar no ar utilizando eletroforese capilar; Analysis of low molecular-weight aldehydes in air using capillary electrophoresis

Pereira, Elisabete Alves
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 07/05/2002 PT
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36.48%
Depois dos hidrocarbonetos, os aldeídos de baixa massa molar são os mais abundantes dos gases orgânicos encontrados na atmosfera. Os aldeídos provêm de diversas fontes como as atividades industriais, incompleta combustão de combustível fóssil e biomassa e como resultado de reações fotoquímicas na atmosfera. Os aldeídos são potentes precursores de importantes oxidantes como o nitrato de peroxiacetila (PAN) e ozônio. Eles são reconhecidamente irritante dos olhos e trato respiratório, além de possuir características mutagênicas e carcinogênicas em animais. Considerando o impacto toxicológico e ambiental destes compostos, a prevenção e controle dos aldeídos requerem o uso de novas e versáteis metodologias analíticas. Neste sentido, a eletroforese capilar tem mostrado ser uma técnica alternativa para a análise de aldeídos em amostras ambientais. Este trabalho descreve diferentes metodologias desenvolvidas, em eletroforese capilar, para a separação e análise de aldeídos em amostras de ar (indoor, outdoor) e emissão veicular. As metodologias incluem a separação dos adutos aniônicos bissulfito-aldeído e das hidrazonas aniônicas formadas a partir da reação dos aldeídos com dansilhidrazina (DNSH) e ácido 4-hidrazino benzóico (HBA) por eletroforese capilar em solução livre (free solution capillary electrophoresis...

Seasonal influence on biochemical profile and serum protein electrophoresis for Boa constrictor amarali in captivity

Silva, LFN; Riani-Costa, CCM; Ramos, PRR; Takahira, RK
Fonte: Instituto Internacional de Ecologia Publicador: Instituto Internacional de Ecologia
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 517-520
ENG
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36.43%
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP); As serpentes, como outros répteis, são animais ectotérmicos e dependem exclusivamente do meio para a manutenção de seus processos fisiológicos, bioquímicos e imunológicos. Desta forma, alterações nos valores bioquímicos podem ser esperadas considerando-se a influência sazonal. Foram utilizadas vinte e duas Boa constrictor amarali adultas mantidas em cativeiro. A coleta de sangue foi realizada em duas estações diferentes: inverno (julho 2004) e verão (Janeiro 2005), para a realização dos exames: ácido úrico, aspartato aminotransferase (AST), glicose, colesterol, proteína total e eletroforese da proteína sérica. As médias dos exames bioquímicos obtidos no verão e inverno, respectivamente, foram: 6.3 ± 3.4 e 11.3 ± 6.2 mg/dL para ácido úrico; 28.7 ± 12.4 e 20.7 ± 16.2 UI/L para AST; 26.3 ± 17 e 17.4 ± 6.8 mg/dL para glicose; 67.3 ± 30.2 e 69.7 ± 38.5 mg/dL para colesterol; e 5.9 ± 1.6 e 5.9 ± 1.4 g/dL para proteína total. Os resultados da eletroforese no verão e inverno, respectivamente, foram: 1.9 ± 0.7 e 2.4 ± 0.6 g/dL para albumina; 0.7 ± 0.2 e 0.5 ± 0.2 g/dL para α globulina; 1.5 ± 0.5 e 1.7 ± 0.6 g/dL β globulina; e 1.8 ± 0.5 e 1.5 ± 0.5 g/dL para g globulina. No verão foi observado aumento significativo da AST (p < 0...

Efeito de surfatantes e modificações metodologicas na solubilização de membrana mitocondrial interna de ratos analisada por eletroforese nativa e bidimensional; Effect of surfactants and methodologic alterations in the rat inner mitochondrial membrane solubilization analysed by native and two dimensional electrophoresis

Elizabeth Sousa da Cunha
Fonte: Biblioteca Digital da Unicamp Publicador: Biblioteca Digital da Unicamp
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 27/06/2008 PT
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36.48%
A mitocôndria é uma organela vital, pois em células aeróbicas, ela é responsável pela produção da maior parte da energia química necessária para a célula. A síntese de ATP ocorre por fosforilação oxidativa na Fo,F1-ATPase, usando a energia gerada pela cadeia de transporte de elétr ons, uma série de enzimas presentes na membrana mitocondrial interna. A análise de proteínas de membrana pode ser feita pela técnica de eletroforese, tanto em condições nativas quanto desnaturantes. Neste trabalho analisamos a solubilização de proteínas da membrana interna de mitocôndria de músculo de rato, através do uso de surfatantes zwiteriônicos (ASB-14, ASB-16, CHAPS), não-iônicos (Digitonina, C12E8, Triton X- 100) e aniônico (Colato de sódio) na separação por eletroforese em gel nativo e bidimensional. Desenvolvemos um novo protocolo para preparo de eletroforese em gel nativo, mantendo o tampão de amostra descrito no procedimento de BN-PAGE e adaptando as demais etapas da técnica de acordo com o protocolo de Laemmli et al (1970). Os géis assim preparados em temperatura ambiente mostraram melhor resolução que os pelo método BN-PAGE, foram obtidos menor tempo de corrida (1- 2 horas), sem troca de tampões e com emprego de reagentes de menor custo. Quanto a eficiência dos diferentes surfatantes...

Protein Electrophoresis in Saliva Study

Lamy, Elsa; Costa, Ana R; Antunes, Celia M; Vitorino, Rui; Amado, Francisco
Fonte: Elsa Lamy, Ana R. Costa, Célia M. Antunes, Rui Vitorino and Francisco Amado (2012). Protein Electrophoresis in Saliva Study, Electrophoresis, Kiumars Ghowsi (Ed.), ISBN: 978-953-51-0846-7, InTech, Available from: http://www.intechopen.com/books/electrophoresis/protein-electrophoresis-in-saliva-study Publicador: Elsa Lamy, Ana R. Costa, Célia M. Antunes, Rui Vitorino and Francisco Amado (2012). Protein Electrophoresis in Saliva Study, Electrophoresis, Kiumars Ghowsi (Ed.), ISBN: 978-953-51-0846-7, InTech, Available from: http://www.intechopen.com/books/electrophoresis/protein-electrophoresis-in-saliva-study
Tipo: Parte de Livro
ENG
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46.54%
The following sections will give an overview about the use of electrophoresis in saliva studies. Methodological issues and the major advantages and limitations for the use of this technique in human and animal saliva studies will be presented. We will finish the chapter by presenting alternatives to electrophoresis for the study of salivary proteome.

The Use of Electrophoresis for the Study of Saliva Involvement in Ingestive Behavior

Lamy, E; Morzel, Martine; Rodrigues, L; Pinheiro, C; Costa, AC; Antunes, CM; Lopes, O; Capela e Silva, F
Fonte: InTech Publicador: InTech
Tipo: Parte de Livro
ENG
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36.56%
Whole saliva contains a wide variety of proteins with diverse functions, namely proteins which participate in teeth and oral tissues protection, as well as proteins related to ingestive and digestive processes. Several studies, in animals and humans, present evidences that saliva is involved in ingestive behavior. The link between saliva composition and oral perception is increasingly reported. Several studies report that oral sensations, such as astringency, result from interaction between food constituents (e.g. polyphenols) and salivary proteins. Moreover, the involvement of saliva in taste sensitivity has been also considered and an example was the correlation established between taste dysfunction and reduced levels of salivary carbonic anhydrase VI. More recently, studies presented evidences that protein saliva composition is also associated to fat perception and liking, as well as to sensitivity for the bitter taste of 6-n-propylthiouracil (PROP) and caffeine. Besides the involvement of saliva in oral perception, which can greatly influence food choices, the influence of this fluid in ingestive behavior can also be considered by the role of certain salivary proteins in digestive processes or even in the regulation of energy intake: for example...

Comparison of capillary electrophoresis and high performance liquid chromatography methods for caffeine determination in decaffeinated coffee

Bizzotto,Carolina Schaper; Meinhart,Adriana Dillenburg; Ballus,Cristiano Augusto; Ghiselli,Gislaine; Godoy,Helena Teixeira
Fonte: Sociedade Brasileira de Ciência e Tecnologia de Alimentos Publicador: Sociedade Brasileira de Ciência e Tecnologia de Alimentos
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/03/2013 EN
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Decaffeinated coffee accounts for 10 percent of coffee sales in the world; it is preferred by consumers that do not wish or are sensitive to caffeine effects. This article presents an analytical comparison of capillary electrophoresis (CE) and high performance liquid chromatography (HPLC) methods for residual caffeine quantification in decaffeinated coffee in terms of validation parameters, costs, analysis time, composition and treatment of the residues generated, and caffeine quantification in 20 commercial samples. Both methods showed suitable validation parameters. Caffeine content did not differ statistically in the two different methods of analysis. The main advantage of the high performance liquid chromatography (HPLC) method was the 42-fold lower detection limit. Nevertheless, the capillary electrophoresis (CE) detection limit was 115-fold lower than the allowable limit by the Brazilian law. The capillary electrophoresis (CE) analyses were 30% faster, the reagent costs were 76.5-fold, and the volume of the residues generated was 33-fold lower. Therefore, the capillary electrophoresis (CE) method proved to be a valuable analytical tool for this type of analysis.

Development of Advanced Capillary Electrophoresis Techniques with UV and Mass Spectrometry Detection for Forensic, Pharmaceutical and Environmental Applications

Fu, Hanzhuo
Fonte: FIU Digital Commons Publicador: FIU Digital Commons
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: application/pdf
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36.54%
Capillary electrophoresis (CE) is a modern analytical technique, which is electrokinetic separation generated by high voltage and taken place inside the small capillaries. In this dissertation, several advanced capillary electrophoresis methods are presented using different approaches of CE and UV and mass spectrometry are utilized as the detection methods. Capillary electrochromatography (CEC), as one of the CE modes, is a recent developed technique which is a hybrid of capillary electrophoresis and high performance liquid chromatography (HPLC). Capillary electrochromatography exhibits advantages of both techniques. In Chapter 2, monolithic capillary column are fabricated using in situ photoinitiation polymerization method. The column was then applied for the separation of six antidepressant compounds. Meanwhile, a simple chiral separation method is developed and presented in Chapter 3. Beta cycodextrin was utilized to achieve the goal of chiral separation. Not only twelve cathinone analytes were separated, but also isomers of several analytes were enantiomerically separated. To better understand the molecular information on the analytes, the TOF-MS system was coupled with the CE. A sheath liquid and a partial filling technique (PFT) were employed to reduce the contamination of MS ionization source. Accurate molecular information was obtained. It is necessary to propose...

Continuous free-flow electrophoresis separation of cytosolic proteins from the human colon carcinoma cell line LIM 1215: A non two-dimensional gel electrophoresis-based proteome analysis strategy

Hoffmann, P.; Ji, H.; Moritz, R.; Connolly, L.; Frecklington, D.; Layton, J.; Eddes, J.; Simpson, R.
Fonte: Wiley - V C H Verlag GmbH & Co. KGaA Publicador: Wiley - V C H Verlag GmbH & Co. KGaA
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em //2001 EN
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36.48%
The conventional approach for analyzing the protein complement of a genome involves the combination of two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) and mass spectrometric based protein identification technologies. While 2-DE is a powerful separation technique, it is severely limited by the insolubility of certain classes of proteins (e.g. hydrophobic membrane proteins), as well as the amount of protein that can be processed. Here, we describe a simple procedure for resolving complex mixtures of proteins that involves a combination of free flow electrophoresis (FFE), a liquid-based isoelectric focussing (IEF) method, and sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Resolved proteins were identified by peptide fragment sequencing using capillary column reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC)/mass spectrometry (MS). An initial demonstration of the method was performed using digitonin/ethylenediaminetetraacetic acid EDTA extracted cytosolic proteins from the human colon carcinoma cell line, LIM 1215. Cytosolic proteins were separated by liquid-based IEF (pH range 3-10) into 96 fractions, and each FFE fraction was further fractionated by SDS-PAGE. Selected protein bands were excised from the SDS-PAGE gel...

A combined free-flow electrophoresis and DIGE approach to identify proteins regulated by butyrate in HT29 cells

Fung, K.; Cursaro, V.; Lewanowitsch, T.; Brierley, G.; McColl, S.; Lockett, T.; Head, R.; Hoffmann, P.; Cosgrove, L.
Fonte: Wiley - V C H Verlag GmbH & Co. KGaA Publicador: Wiley - V C H Verlag GmbH & Co. KGaA
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em //2011 EN
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36.48%
Many biologically active agents exert a pleiotropic response in cells and tissues. This presents challenges in descriptive and comparative analysis of the proteome in response to these agents. Although free-flow electrophoresis has been applied in a number of proteomic studies as a protein separation technique, the combination of free-flow electrophoresis and DIGE has not yet been investigated for comparative proteomic analysis. In this study, we have compared the effects of butyrate on HT29 colorectal cancer cells with a particular focus on apoptosis and describe the utility of a novel approach combining free-flow electrophoresis with DIGE to identify differentially expressed proteins. We verify the results obtained by the combined free-flow electrophoresis and DIGE approach with Western blot analysis of selected proteins. We also report for the first time the regulation of a number of proteins by butyrate in HT29 colorectal cells including peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A (cyclophilin A) and profilin-1.; Kim Y. C. Fung, Chris Cursaro, Tanya Lewanowitsch, Gemma V. Brierley, Shaun R. McColl, Trevor Lockett, Richard Head, Peter Hoffmann and Leah Cosgrove; Article first published online: 31 JAN 2011

Characterization and study of transgenic cultivars by capillary and microchip electrophoresis

Domínguez Vega, Elena; Marina Alegre, María Luisa
Fonte: Multidisciplinary Digital Publishing Institute Publicador: Multidisciplinary Digital Publishing Institute
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: application/pdf
ENG
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Advances in biotechnology have increased the demand for suitable analytical techniques for the analysis of genetically modified organisms. Study of the substantial equivalence, discrimination between transgenic and non-transgenic cultivars, study of the unintended effects caused by a genetic modification or their response to diverse situations or stress conditions (e.g., environmental, climatic, infections) are some of the concerns that need to be addressed. Capillary electrophoresis (CE) is emerging as an alternative to conventional techniques for the study and characterization of genetically modified organisms. This article reviews the most recent applications of CE for the analysis and characterization of transgenic cultivars in the last five years. Different strategies have been described depending on the level analyzed (DNA, proteins or metabolites). Capillary gel electrophoresis (CGE) has shown to be particularly useful for the analysis of DNA fragments amplified by PCR. Metabolites and proteins have been mainly separated using capillary zone electrophoresis (CZE) using UV and MS detection. Electrophoretic chips have also proven their ability in the analysis of transgenic cultivars and a section describing the new applications is also included.