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Efeitos da criopreservação do sêmen bovino sobre as membranas plasmática, acrossomal e mitocondrial e estrutura da cromatina dos espermatozóides utilizando sondas fluorescentes ; Effects of bovine semen cryopreservation on sperm plasmatic, acrosomal, and mitochondrial membranes and chromatin structure using fluorescent probes

Celeghini, Eneiva Carla Carvalho
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 20/05/2005 PT
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37.52%
A criopreservação, como já conhecido, causa danos da função celular podendo, com isso, apresentar redução da fertilidade. O desenvolvimento de técnicas para avaliar a viabilidade espermática, que visam aperfeiçoar o processo de avaliação seminal tem sido meta de muitas pesquisas. Este trabalho foi dividido em dois experimentos. O experimento 1 foi realizado para o desenvolvimento e validação de técnicas práticas e de alta repetibilidade para a avaliação simultânea da integridade das membranas plasmática e acrossomal e função mitocondrial de espermatozóides bovinos pela associação de sondas fluorescentes. O experimento 2 foi realizado para avaliar os efeitos que a criopreservação pode causar sobre a motilidade espermática, membranas plasmática, acrossomal e mitocondrial (pela técnica desenvolvida no experimento 1) e estrutura da cromatina de espermatozóides bovinos frente a dois diluidores diferentes, bem como verificar a existência de correlações entre alterações nas membranas e características de motilidade em espermatozóides bovinos criopreservados. No experimento 1 as associações das sondas iodeto de propídio (PI, para avaliar integridade da membrana plasmática) e aglutinina de Pisum sativum conjugada a isotiocionato de fluoresceína (FITC-PSA...

Avaliação do desenvolvimento após a criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro; Evaluation of development after cryopreservation of in vitro bovine produced embryos

Nicacio, Alessandra Corallo
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 07/03/2008 PT
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A ineficiência dos protocolos de criopreservação limita o uso em larga escala da produção in vitro de embriões bovinos. O objetivo deste trabalho foi identificar os danos causados pela criopreservação e pelo cultivo embrionário de embriões bovinos produzidos in vitro após a descongelação, avaliando a morfologia, a expressão gênica e o desenvolvimento in vitro antes e após a criopreservação. Complexos cummulusoócitos foram maturados, fecundados e cultivados in vitro. Blastocistos expandidos (n=600) obtidos entre os dias 7 e 9 de cultivo (fecundação D0) foram submetidos a congelação controlada (grupo controlado: 10% de etileno glicol (EG) por 10 minutos, 1,2oC por minuto), congelação rápida (grupo rápido: 10% de EG por 10 minutos , 20% de EG + 20% de Glicerol (Gli) por 30 segundos) ou vitrificação (grupo vitrificação: 10% de EG por 10 minutos, 25% EG + 25% Gli por 30 segundos). Os embriões do grupo controle não foram expostos a crioprotetores e nem a protocolos de criopreservação, sendo avaliado o índice de eclosão 12 dias após a fecundação (46,09%). As palhetas para os protocolos de congelação rápida e vitrificação foram mantidas em vapor de nitrogênio líquido (0,8cm sobre o líquido) por 2 minutos e imersas no nitrogênio líquido. Os embriões foram descongelados por 10 segundos em ar e 20 segundos em banhomaria a 25oC. Os embriões foram reidratados em solução de PBS + 0...

Efeito da glutationa reduzida (GSH) na criopreservação de espermatozóides da espécie canina: avaliação in vitro e in vivo.; Effect of reduced glutathione (GSH) in the cryopreservation of canine spermatozoa: in vitro and in vivo evaluation.

Lúcio, Cristina de Fatima
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 12/06/2012 PT
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O presente experimento teve por objetivos comparar a adição de diferentes concentrações de glutationa reduzida (GSH) no diluidor para criopreservação do sêmen de cães, considerando-se as características morfofuncionais pós-descongelação; e verificar os índices de gestação e número de filhotes por ninhada obtidos a partir da inseminação artificial intra-uterina, por cateterização cervical endoscópica, com sêmen criopreservado contendo diferentes concentrações de glutationa. Na primeira fase do experimento, foram realizadas duas colheitas seminais de 11 reprodutores com intervalo mínimo de uma semana entre os procedimentos. Foram empregadas três concentrações diferentes de glutationa reduzida (0, 10 e 20 mM) ao meio de congelação tris-gema-citrato. O sêmen fresco, refrigerado, glicerolizado e descongelado foram avaliados por citometria de fluxo com uso de sondas específicas para determinar a integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial de membrana mitocondrial e fragmentação de DNA. Também foi realizada dosagem de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) para avaliar os níveis de estresse oxidativo. Na segunda fase do experimento, foram inseminadas 6 fêmeas, alocadas em dois grupos: inseminação intra-uterina com sêmen congelado em diluidor contendo 10 mM (IA-GSH10...

Utilização da lecitina de soja para a refrigeração e criopreservação do sêmen de cães; Effect of soy lecithin on dog semen refrigeration and cryopreservation

Dalmazzo, Andressa
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 23/08/2012 PT
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Sabe-se que a criopreservação do sêmen provoca uma perda significativa na qualidade espermática. Apesar de diversos estudos visando à melhora na qualidade do sêmen pós-descongelamento, é de consenso geral que a gema de ovo apresenta uma significante capacidade em evitar as crio-injúrias. No entanto, a grande variação na sua composição, assim como o risco potencial para a contaminação do diluidor, caso certos contaminantes estejam no produto in natura, são empecilhos para sua utilização para a exportação do sêmen, assim como sua utilização em humanos. Deste modo, estudos visando substituir a gema de ovo por produtos quimicamente definidos e de origem não-animal, são de extrema importância. Neste contexto, a lecitina da soja, por possuir uma fração de lipoproteína de baixa densidade semelhante à encontrada na gema de ovo, pode ser uma alternativa interessante. O presente estudo visa comparar diluidores a base de lecitina de soja e aqueles contendo gema de ovo utilizados rotineiramente para a refrigeração e criopreservação do sêmen canino. Para isto, foi utilizado o sêmen de 12 cães adultos, que foi refrigerado e criopreservado em diluidores a base de gema de ovo (OVO) e a base de lecitina de soja (LEC) em diferentes concentrações (0...

Criopreservação de Araucaria angustifolia (BERT.) O. Kuntze: aspectos fisiológicos e bioquímicos.; Cryopreservation of Araucaria angustifolia (BERT.) O. Kuntze: physiological and biochemical aspects.

Pieruzzi, Fernanda Piccolo
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 16/12/2013 PT
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Técnicas de cultivo in vitro, associadas à criopreservação, são ferramentas importantes para conservação ex situ de espécies recalcitrantes. O objetivo deste trabalho foi o estudo da criopreservação no sistema A. angustifolia. Um protocolo de criopreservação para culturas celulares da espécie foi desenvolvido e os níveis de PAs, ABA e ROS, ao longo do protocolo, foram avaliados. Embriões zigóticos foram utilizados como modelo para o estudo de diferentes aspectos biofísicos do processo de criopreservação como a permeabilidade dos crioprotetores, a capacidade de resposta osmótica e congelamento, presença de água nos tecidos e a análise histológica da organização e aspectos das estruturas celulares, comparados ao controle, não resfriado. Os resultados deste trabalho permitiram uma melhor compreensão dos diferentes aspectos fisiológicos, bioquímicos e biofísicos durante a criopreservação, em espécies recalcitrantes, além da perspectiva de estabelecimento de bancos de germoplasma ex situ de culturas celulares de A. angustifolia.; The aim of this work was the study of cryopreservation A. angustifolia plant systems. A protocol for cryopreservation of A. angustifolia cell cultures was developed based on optimum DMSO concentration. It was observed that cells exposed to cryoprotectants showed lower levels of PAs...

Estresse oxidativo na criopreservação do sêmen eqüino; Oxidative stress in equine semen cryopreservation

Bustamante Filho, Ivan Cunha
Fonte: Universidade Federal do Rio Grande do Sul Publicador: Universidade Federal do Rio Grande do Sul
Tipo: Dissertação Formato: application/pdf
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A criopreservação de sêmen é um processo de grande estresse celular, que impõe aos espermatozóides condições extremamente desfavoráveis à manutenção de sua viabilidade. Diversos estudos propõem que a produção excessiva de espécies reativas de oxigênio e a perda da capacidade antioxidante do sêmen potencializam os efeitos prejudiciais dessa biotécnica. O objetivo do presente estudo foi avaliar as atividades antioxidantes enzimáticas e não enzimáticas e a concentração de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBA-RS), como indicador de lipoperoxidação do sêmen eqüino, durante a criopreservação. Quinze ejaculados de seis garanhões comprovadamente férteis da raça Crioula, foram submetidos a criopreservação, utilizando-se diluente comercial à base de citrato-Hepes, gema de ovo e leite. Foram avaliadas as atividades das enzimas catalase, glutationa peroxidase e superóxido dismutase; o potencial antioxidante total e a concentração de TBARS no sêmen fresco, diluído e congelado. Uma maior atividade das três enzimas estudadas foi observada no sêmen fresco em relação ao sêmen diluído e congelado (p<0,0001), não havendo diferença entre os dois últimos (p>0,05). Não houve diferença na atividade antioxidante não enzimática nas três fases estudadas (p>0...

Efeito da criopreservação de linfócitos B transformados pelo vírus Epstein-Barr sobre a atividade de hidrolases lisossômicas

Mello, Alexandre Silva de
Fonte: Universidade Federal do Rio Grande do Sul Publicador: Universidade Federal do Rio Grande do Sul
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
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A presente tese aborda os principais aspectos da biologia do vírus Epstein-Barr (EBV), suas relações com doenças, seu potencial uso como ferramenta para a biologia celular e a reprodutibilidade desta célula para o auxílio no diagnóstico de Erros Inatos do Metabolismo (EIM) através da medida de atividades de hidrolases lisossômicas. Os objetivos deste trabalho foram investigar as alterações celulares e morfológicas nos linfócitos B infectados com EBV, afim de confirmar a transformação celular nos 12 dias de cultura, para certificação do protocolo empregado; determinar a atividade, no momento da coleta (12 dias de cultivo) e imediatamente após 180, 365 e 730 dias de criopreservação em nitrogênio líquido, das enzimas β-galactosidase, β-glicosidase, a-galactosidase, a- glicosidase e a-iduronidase em Linhagens Celulares Linfoblastóides (LCL) transformados com EBV de indivíduos normais e determinar a atividade, no momento da coleta (12 dias de cultivo) e imediatamente após 180 dias de criopreservação das enzimas β-glicosidase, a-galactosidase e a- iduronidase em LCLs transformados com EBV de pacientes com doenças de Gaucher e Fabry e Mucopolissacaridose tipo I. Este trabalho mostrou que o protocolo empregado foi eficiente na transformação de linfócitos B pelo EBV através das 3 ferramentas utilizadas: imunohistoquímica...

Viabilidade pós criopreservação de embriões de novilhas nelore suplementadas com gordura protegida ruminal

Guardieiro, Monique Mendes
Fonte: Universidade Estadual Paulista (UNESP) Publicador: Universidade Estadual Paulista (UNESP)
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: 123 f.
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Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP); Pós-graduação em Medicina Veterinária - FMVZ; O objetivo do presente trabalho foi avaliar a resposta superovulatória, a produção embrionária e a resistência à criopreservação através de congelação ou vitrificação de embriões de novilhas Nelore suplementadas com gordura protegida ruminal (Megalac-E®). Foram utilizadas 40 novilhas da raça Nelore mantidas a pasto, divididas em dois grupos experimentais de acordo com o tipo de suplementação fornecido (G = concentrado com gordura protegida ruminal e C = suplementação controle, sem adição de gordura). Os suplementos foram formulados para serem isoenergéticos e isoprotéicos. O delineamento foi do tipo cross-over com 67 (primeira repetição) e 70 d (segunda repetição) de duração. Após 50 d de suplementação dietética, foi realizada a sincronização da emergência da onda para iniciar o protocolo de superovulação. Os embriões colhidos foram congelados ou vitrificados e avaliação de desenvolvimento embrionário in vitro foi realizada posteriormente. Não houve diferença (P > 0,10) entre os Grupos G e C em relação à resposta superestimulatória, ao número total de estruturas, embriões congeláveis...

Criopreservação de sêmen de epidídimo de garanhões

Kievitsbosch, Thaís
Fonte: Universidade Estadual Paulista (UNESP) Publicador: Universidade Estadual Paulista (UNESP)
Tipo: Trabalho de Conclusão de Curso
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It is a fact that Brasil has a featured position in the equine market due to the size and the high quality of its squad. To keep the competitivity, the reproduction biotechnologies have a big and important role. The cryopreservation of stallion semen, for example, generates innumerous advantages, which includes: larger number of obtained doses, storing genetic material for undetermined time, using the semen of a good stallion even after its dead or any other event that makes both semen collection and mating impossible, etc. In this context, the cryopreservation of epididymal sperm, has been seen as a promising technique in equine reproduction. The epididymal cauda has a significant quantity of fertile spermatozoa and this ensures a huge store of cells in cases of unexpected accidents, which can early interrupt with the reproductive life of a stallion. Lots of studies are being developed using the cryopreservation of stallion epididymal sperm. These studies permit the propagation of high quality genetic material and make possible for the stallion owner to opt for a final semen collect in unexpected circumstances; Diante da posição de destaque que o Brasil ocupa no mercado equídeo devido ao tamanho e à qualidade do seu plantel, é indispensável o papel das biotecnologias da reprodução para assegurar a competitividade do país nesse patamar. A criopreservação do sêmen de garanhões gera inúmeras vantagens que incluem: o armazenamento por período indeterminado do material genético...

Cultura de calos e criopreservação de sementes de Cedrela fissilis Vellozo (Meliaceae)

Laudano, Wellington Luiz de Souza
Fonte: Florianópolis, SC Publicador: Florianópolis, SC
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: xvii, 131 f.| grafs., tabs.
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37.44%
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia; Cedrela fissilis Vellozo (Meliaceae) é uma espécie nativa da Floresta Atlântica, que produz madeira de grande valor econômico. Os objetivos deste trabalho foram estudar o crescimento de calos em diferentes condições de cultivo, realizar análises preliminares do teor de óleos essenciais e dos constituintes voláteis produzidos pelos mesmos e desenvolver estudos sobre a criopreservação de sementes e conservação in vitro de propágulos vegetativos. Em todos os experimentos foram utilizados segmentos nodais cotiledonares, exceto para testar o efeito de diferentes tipos de explantes, em que segmentos apicais e foliares também foram utilizados. O meio de cultura Murashige & Skoog foi utilizado em todos os experimentos, suplementado com 2,5 M de 6-benzilaminopurina (BAP) e 5 M de ácido a-naftalenoacético (ANA), 0,2% de Phytagel e com 58,4 mM de sacarose, exceto nos casos em que outras fontes de carbono foram testadas ou em que foram testadas diferentes concentrações de sacarose na ausência ou na presença de glutamina ou em que diferentes concentrações de BAP e ANA foram utilizadas separadamente ou em combinação. As culturas foram mantidas em sala de crescimento com temperatura controlada de 25 2ºC...

Efeitos de diferentes níveis de luz, temperaturas e criopreservação na germinação de crescimento inicial de Rumohra adiantiformis (FORST.) Ching (Dryopteridaceae)

Brum, Frâncis Maria Roxo de
Fonte: Florianópolis, SC Publicador: Florianópolis, SC
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: 86 f.| grafs., fots.
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Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas; Rumohra adiantiformis (Forst.) Ching é uma pteridófita terrestre, rupestre, epífita crescendo em habitats como solo arenoso descoberto, áreas arbustivas, rochas, florestas, ocorrendo desde o nível do mar até altitudes acima de 2400 m, nos Andes. É explorada para confecção de arranjos florais. Este trabalho foi desenvolvido para analisar efeitos de algumas temperaturas, níveis de luz e criopreservação sobre a germinação e crescimento inicial desta espécie. Esporos de R. adiantiformis atingiram 97% de germinação após 10 dias de cultivo sob temperaturas de 20 e 25 °C apresentando inibição e retardo a 30°C. Após 13 meses de armazenamento não houve perda de viabilidade de esporos. Com relação aos efeitos de diferentes níveis de luz, a maior porcentagem de germinação foi obtida pelo tratamento de 91% de redução da luminosidade, implantado na estação do inverno (5-26°C), do ano 2000, cuja curva estabilizou aos 8 dias de cultivo, com 97% de esporos germinados. Reduções de 28 e 46% dos níveis de luz, durante o verão (17-32°C) inibiram completamente a germinação após 40 dias de cultivo. A criopreservação por curtos e médios períodos constituiu-se em um método viável de armazenamento de esporos de R. adiantiformis quando não esterilizados e não crioprotegidos...

Proteínas do plasma seminal e sua influência sobre a criopreservação espermática em ovinos; Seminal plasma protein and its influence on espermatic criopreservation in ram

Silva, Thiago Antonio de Souza Nascimento
Fonte: Universidade de Brasília Publicador: Universidade de Brasília
Tipo: Tese
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Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Ciências Animais, 2014.; A qualidade do sêmen é influenciada por diversos fatores tais como os inerentes aos indivíduos, a frequência de coletas, o meio ambiente, a estação do ano, a temperatura, precipitação pluviométrica. Interferindo, diretamente, na qualidade das amostras criopreservadas com reflexos diretos nos índices de concepção das fêmeas inseminadas. Estudos têm demonstrado que o plasma seminal pode favorecer a viabilidade e heterogeneidade da membrana plasmática, motilidade e a fertilidade do sêmen ovino criopreservado. O objetivo do presente trabalho foi caracterizar o perfil proteico do plasma seminal de carneiros com diferentes níveis de congelabilidade de sêmen e o efeito da adição de plasma seminal de carneiros de alta congelabilidade de sêmen no sêmen de carneiros de baixa congelabilidade de sêmen antes da criopreservação. No capitulo 2 observou-se uma superioridade (P<0,05) do carneiro 1 de alta congelabilidade de sêmen em relação ao carneiro 18 de baixa congelabilidade de sêmen após a descongelação e teste de termo resistência (TTR), baseado nos parâmetros de motilidade...

Transferência embrionária e técnicas de criopreservação em pequenos ruminantes.r.

Bettencourt, Elisa Maria Varela
Fonte: Universidade de Évora Publicador: Universidade de Évora
Tipo: Tese de Doutorado
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37.72%
O presente trabalho engloba vários estudos em transferência embrionária e criopreservação de embriões da espécie ovina. Todos os trabalhos foram realizados na raça ovina portuguesa Merina Preta. O primeiro estudo teve como objectivo a avaliação do efeito da estação do ano - Primavera versus Outono - e da preparação de origem da FSH - FSH ovina (Ovagen®) versus FSH porcina (Pluset®) - na resposta superovulatória e nas taxas de ovulação, de recolha embrionária, fertilização e congelabilidade, bem como no número de embriões viáveis obtidos e número de embriões susceptíveis de serem criopreservados. Concluiu-se ser possível realizar de forma eficaz a estimulação superovulatória nas duas estações do ano, sendo vantajosa a utilização de FSH ovina (Ovagen®) relativamente à FSH porcina (Pluset ®). O segundo estudo teve como objectivo a avaliação da eficácia de três técnicas de criopreservação de embriões: congelação lenta, vitrificação clássica e vitrificação ultra-rápida por OPS, tendo as três técnicas sido avaliadas pelos resultados das transferências dos embriões para fêmeas receptoras da mesma raça. Não se obtiveram diferenças significativas entre as técnicas de criopreservação aplicadas...

Criopreservação de sêmen humano: comparação entre métodos de congelação e tipos de envase

Cavalcante,Marcelo Borges; Duarte,Ana Beatriz Graça; Araújo,Danielle Oliveira de; Teles,Eugênio Pacelli de Barreto
Fonte: Federação Brasileira das Sociedades de Ginecologia e Obstetrícia Publicador: Federação Brasileira das Sociedades de Ginecologia e Obstetrícia
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/12/2006 PT
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37.67%
OBJETIVOS: comparar duas diferentes técnicas de congelação e dois tipos de envase do sêmen humano durante processo de criopreservação. MÉTODOS: estudo experimental, no qual foi analisada a criopreservação de 18 amostras de sêmen de 18 voluntários. Após a adição de meio crioprotetor, "Test-yolk buffer" , as amostras de sêmen foram envasadas em palhetas com capacidade de 0,25 mL ou em criotubos de 2 mL e submetidas à criopreservação por dois métodos, um lento e outro rápido, totalizando quatro tratamentos distintos: RP (congelação pelo método rápido e envasado em palheta), RT (rápido-criotubo), LP (lento-palheta) e LT (lento-criotubo). As amostras, após 24 horas, foram descongeladas em temperatura ambiente e mantidas a 37ºC. Os dados coletados foram analisados através do teste t de Student, com p<0,05, utilizando o programa de computador SPSS for Windows® versão 11.0.0. RESULTADOS: houve redução da motilidade espermática após o processo de criopreservação. A taxa de motilidade inicial foi 58,1% e as motilidades após os diferentes métodos de criopreservação foram: 19,2% (RP), 27% (RT), 21,1% (LP) e 30,3% (LT). Houve redução significativa na morfologia normal. A taxa de morfologia normal inicial foi 14...

Rendimento de células mesenquimais do ligamento periodontal humano submetidas a diferentes protocolos de criopreservação

Soares,Diego Moura; Ginani,Fernanda; Barboza,Carlos Augusto Galvão
Fonte: Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho Publicador: Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/12/2012 PT
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37.63%
INTRODUÇÃO: A técnica de criopreservação tem como característica cessar reversivelmente todas as funções biológicas dos tecidos vivos em baixas temperaturas e tem sido aplicada a diversas células humanas, visando à sua utilização posterior. OBJETIVO: Avaliar a proliferação de células mesenquimais do ligamento periodontal humano após a criopreservação por dois diferentes protocolos. MÉTODO: As células do ligamento periodontal foram obtidas a partir de dois dentes (terceiros molares) hígidos, com indicação de remoção cirúrgica. Após o processamento, as células foram cultivadas em placas de Petri e mantidas a 37 °C em 5% de CO2, até atingirem 70-90% de confluência, com troca de meio a cada três dias. Na primeira passagem, as células foram divididas em dois grupos e criopreservadas: Grupo -80 °C - criopreservação em ultrafreezer por 45 dias; Grupo -196 °C - criopreservação em nitrogênio líquido por 45 dias. Decorrido esse tempo, as células dos dois grupos foram descongeladas e plaqueadas para o experimento. A curva de crescimento dos grupos estudados foi traçada a partir de contagem em Câmara de Neubauer e pelo método de ensaio do MTT, nos intervalos de 24, 48 e 72 horas. Os resultados foram analisados por meio do teste de Mann‑Whitney...

Atividade biológica de células-tronco da polpa de dentes decíduos humanos submetidas à criopreservação

Antunes, Fernanda Ginani
Fonte: Universidade Federal do Rio Grande do Norte; BR; UFRN; Programa de Pós-Graduação em Saúde Coletiva; Saúde Pública Publicador: Universidade Federal do Rio Grande do Norte; BR; UFRN; Programa de Pós-Graduação em Saúde Coletiva; Saúde Pública
Tipo: Dissertação Formato: application/pdf
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37.58%
Dental pulp stem cells have been widely investigated because of their ability to differentiate into both dental and non-dental cells, with potential use in therapies involving tissue engineering. The technique of cell cryopreservation represents a viable alternative for the conservation of these cells, since it stops reversibly, in a controlled manner, all of cell biological functions in an ultra low temperature. The present study aimed to evaluate, using in vitro experiments, the influence of a cryopreservation protocol on the biologic acti vity of stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED). Cells obtained from the pulp of three deciduous teeth on end-stage exfoliation or with indicated extraction were expanded in α-MEM culture medium supplemented with antibiotics and 15% fetal bovine serum. At second subculture (P2), a group of cells were submitted to cryopreservation for 30 days in 10% DMSO diluted in fetal bovine serum, at -80º C, while the remind cells continued under normal conditions of cell culture. Cell proliferation was evaluated in both groups (not cryopreserved or cryopreserved) by Trypan blue stain essay at intervals of 24, 48 and 72h after plating. Cell cycle analysis of SHEDs submitted or not to the cryopreservation protocol was performed in the same intervals. Events related to cell death were studied by Annexyn V and PI expression under flow cytometry at the intervals of 24 and 72h. The presence of nuclear morphological changes was evaluated by DAPI staining at 72h interval. It was observed that both groups exhibited an upward cell proliferation curve...

A influência da criopreservação nas células mesenquimais indiferenciadas do ligamento periodontal de humanos análise comparativa in vitro

Vasconcelos, Rodrigo Gadelha
Fonte: Universidade Federal do Rio Grande do Norte; BR; UFRN; Programa de Pós-Graduação em Odontologia; Odontologia Preventiva e Social; Periodontia e Prótese Dentária Publicador: Universidade Federal do Rio Grande do Norte; BR; UFRN; Programa de Pós-Graduação em Odontologia; Odontologia Preventiva e Social; Periodontia e Prótese Dentária
Tipo: Dissertação Formato: application/pdf
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37.52%
Cryopreservation is a process where cells or biological tissues are preserved by freezing at very low temperatures and aims to cease reversibly, in a controlled manner, all the biological functions of living tissues, i.e., maintain cell preservation so that it can recover with high degree of viability and functional integrity. This study aimed to evaluate the influence of cryopreservation on the mesenchymal stem cells originating from the periodontal ligament of human third molars by in vitro experiments. Six healthy teeth were removed and the periodontal cells grown in culture medium containing α-MEM supplemented with antibiotics and 15% FBS in a humidified atmosphere with 5% CO2 at 37° C. Cells isolated from each sample were divided into two groups: Group I - immediate cell culture (not fresh cryopreserved cells) and Group II - cell cryopreservation, during a period of 30 days. Analyses of rates of cell adhesion and proliferation in different groups were performed by counting the cells adhered to the wells, in intervals of 24, 48 and 72 hours after the start of cultivation. The number of cells in each well was obtained by counting viable cells with the use of hemocytometer and the method of exclusion of cells stained by trypan blue. The difference between groups for each of the times was analyzed by Wilcoxon test. Regarding the temporal evolution for each group...

Caracterização, criopreservação e diferenciação in vitro de células tronco, derivadas de amniótica e gelatina de Wharton canina, visando a formação de um banco de células tronco

Arruda, Isadora
Fonte: Universidade Estadual Paulista (UNESP) Publicador: Universidade Estadual Paulista (UNESP)
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: 84 f.
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Pós-graduação em Biotecnologia Animal - FMVZ; Mesenchymal stem cells (MSCs) are present in most of adult tissues, and are therefore attractive for cell therapy. Because of their high potential for differentiation and proliferation, they are being used in tissue reconstruction. This experiment aimed to enrich knowledge of canine MSCs derived from umbilical cord and amniotic membrane before and after cryopreservation regarding the formation of a cell bank. Thus, eight samples of amniotic membrane and eight samples of Wharton’s jelly were obtained from dogs at birth, which were subjected to enzymatic digestion and basal medium culture. Slow freezing of a sample from each culture was held at the first passage and stored for four weeks. Before and after freezing cells were subjected to characterization being observed adhesion, proliferation, differentiation and expression of surfaces markers using flow cytometry and immunocytochemistry. Based on these analyses it was demonstrated that the cells before and after cryopreservation exhibited similar behavior for proliferation and cell growth. Cell viability of amniotic membrane showed 97.0% of viable cells before freezing and 94.6% after, and the Wharton’s jelly 98.8% before and 93.5% after cryopreservation. The potential of the osteogenic and adipogênica differentiation as well as maintained...

Cultivo in vitro e criopreservação de Alibertia sp.; In vitro culture and cryopreservation of Alibertia sp.

Sarto, Marisa Taniguchi
Fonte: Universidade Federal de Lavras; Programa de Pós-graduação em Agronomia /Fisiologia Vegetal; UFLA; brasil; Departamento de Biologia Publicador: Universidade Federal de Lavras; Programa de Pós-graduação em Agronomia /Fisiologia Vegetal; UFLA; brasil; Departamento de Biologia
Tipo: Dissertação
Publicado em 07/12/2015 POR
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The genus Alibertia has native fruit species of the Cerrado that have economic potential due to the medicinal properties, timber, ornamental and food. The objective was to establish in vitro culture and long-term conservation of Alibertia sessilis Schum, as well as long-term conservation also to Alibertia edulis Rich. In seeds of A. sessilis was performed the caracterization of the water imbibing curve. For the analysis of the chemical composition were held the ether extract determinations, protein, fiber, ash, moisture content, starch, reducing sugar, non-reducing sugar and total soluble sugar. For cultivation in vitro seeds were inoculated in MS culture. In shoot induction were used nodal segments inoculated with different concentrations of BAP (0,0; 0,62; 1,25; 2,5; 5,0 and 10,0 mM). For induction of callus foliar explants were excised and inoculated with different concentrations of 2,4-D and Picloram (0,0; 2,5; 5,0; 10,0 and 20,0 mM). In order to induce calluses on alternative explants, shoot tips were inoculated at different concentrations of 2,4-D (0,0; 2,5; 5,0; 10,0 and 20,0 mM). For cryopreservation of seeds was determined water content...

Toxicity test and cryopreservation of sheep isolated preantral follicles using glycerol, ethylen glycol, dimethil sulfoxyde and propanediol; Teste de toxicidade e criopreservação de folículos pré-antrais ovinos isolados utilizando Glicerol, Etilenoglicol, Dimetilsulfóxido e Propanodiol

Santos, Regiane Rodrigues dos; Rodrigues, Ana Paula Ribeiro; Costa, Sônia Helena Furtado; Matos, Maria Helena Tavares; Silva, José Roberto Viana; Celestino, Juliana Jales de Hollanda; Martins, Fabricio Sousa; Saraiva, Marcia Viviane Alves; Melo, Mônica
Fonte: Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Publicador: Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia
Tipo: info:eu-repo/semantics/article; info:eu-repo/semantics/publishedVersion; ; ; ; ; ; Formato: application/pdf
Publicado em 01/01/2006 POR
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O objetivo deste estudo foi avaliar folículos pré-antrais (FOPA) ovinos isolados após sua exposição e criopreservação utilizando glicerol (GLI), etilenoglicol (EG), propanodiol (PROH) ou dimetilsulfóxido (DMSO) a 1,5 e 3,0 M. Cada par ovariano de 5 ovelhas sem raça definida foi coletado em abatedouro local e submetido ao isolamento folicular. Da suspensão obtida, uma alíquota foi imediatamente destinada à análise da viabilidade folicular com o auxílio do corante vital azul de trypan. O restante da suspensão foi dividida em 16 alíquotas de 0,9 mL, suspensas (v/v) em MEM+ com EG, DMSO, GLI ou PROH a 1,5 ou 3,0 M, para teste de toxicidade e criopreservação. Após o término de cada tratamento, a viabilidade folicular foi analisada e os FOPA considerados viáveis se não corados ou não viáveis, quando corados. A análise dos dados mostrou que após o teste de toxicidade e criopreservação, em todos os crioprotetores e em ambas as concentrações, a percentagem de FOPA viáveis foi significativamente reduzida quando comparada ao controle. No teste de toxicidade, quando os crioprotetores foram comparados entre si nas mesmas concentrações, foram observadas percentagens significativamente menores de FOPA viáveis no PROH 3...