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Quinases dependentes de ciclinas (CDKs) compreendem uma família de proteínas que podem ser subdivididas em dois grupos funcionais majoritários baseados na sua função no ciclo celular e/ou controle transcricional. Já foram identificadas mais de 30 CDKs humanas. A CDK10 é uma proteína quinase dependente de ciclina pertencente ao grupo de quinases relacionadas à Cdc2. CDK10 é essencial na fase G2/M do ciclo celular, possivelmente no progresso dessa fase, monitorando a replicação completa do DNA e permitindo que as células passem desse ponto de restrição. Essa proteína é um importante determinante de resistência à terapia endócrina para câncer de mama. Portanto, é um alvo potencial para o desenvolvimento de inibidores, uma vez que está presente em células cancerosas. O estudo da estrutura e função da CDK10 deverá ser realizado após sua clonagem, expressão e purificação. O cDNA da CDK10 foi amplificado por reação em cadeia da polimerase (PCR), e posteriormente, o produto foi aplicado em gel de agarose para análise e purificação. O vetor de clonagem recombinante foi obtido, o qual foi clonado em células competentes e sequenciado. A obtenção do plasmídeo recombinante para expressão deu-se pela inserção do DNA nos vetores de expressão pET28a(+) e pET23a(+) (Novagen). A proteína foi expressa em células competentes e analisada por eletroforese em gel de poliacrilamida. Em seguida...

O perfil metabólico é usado na clínica médica com a finalidade de ajudar o diagnóstico e permite o diagnóstico precoce de alterações metabólicas e também a funcionalidade dos principais órgãos. A transferência nuclear de células somáticas (TNCS - clonagem), apesar de apresentar resultados positivos, ainda possui baixa eficiência, com alta mortalidade embrionária, fetal e pós-natal. Observa-se na primeira semana de vida principalmente nas primeiras 24-48 horas um grande número de bezerros que morrem, devido a distúrbios de adaptação neonatal. Essas alterações placentárias e más formações determinam alterações bioquímicas que são as causas de muitos óbitos verificados nos clones. Este trabalho teve como objetivo estudar o perfil bioquímico de bezerros Nelore clonados durante os 30 primeiros dias de vida, procurando verificar as possíveis modificações no metabolismo de animais obtidos por transferência nuclear de células somáticas (TNCS - clonagem). Foram utilizados 20 bezerros Nelores e realizou-se de cada animal 13 coletas de sangue nos seguintes momentos: ao nascimento, 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 168, 240, 360, 480 e 720 horas de vida. Determinou-se de cada amostra os valores séricos para função renal...

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Pós-graduação em Pesquisa e Desenvolvimento (Biotecnologia Médica) - FMB; Anticorpos monoclonais (mAbs) são ferramentas-chave na investigação de fenômenos biológicos e uma promissora alternativa para o tratamento de muitas doenças, em especial os tumores. A cadeia produtiva de mAbs apresenta pontos cruciais para o desenvolvimento de um produto de qualidade que justifique os altos custos de produção. O procedimento de clonagem celular é a etapa de produção que garante a monoclonalidade das células produtoras, assegurando a especificidade do mAb. Desde os anos 80 existem tentativas de otimização e automação deste procedimento visando a garantia da monoclonalidade e aumento na eficiência de clonagem. A captura celular sob observação direta ao microscópio pode ser considerada a única metodologia de clonagem celular que garante 100% de crescimento monoclonal. Neste trabalho avaliamos indicadores de eficiência de clonagem, tempo de execução e custos de uma metodologia de clonagem celular por micromanipulação em comparação com a metodologia de diluição limitante. Hibridomas murinos secretores de mAbs de diversas especificidades foram clonados em paralelo por ambas as técnicas. Não houve diferença no tempo de execução das metodologias embora a observação dos clones da micromanipulação seja de 4 a 6 vezes mais rápida. A produção de clones por micromanipulação é 4 vezes superior à diluição limitante com redução de 60% no consumo de meio de cultura...

The Coffee Genome Project made available to the scientific community relevant information that made practical the identification and cloning of important genes, as well as the identification of the major sequences involved on their regulation. The aim of the present study was to amplify, clone and sequence coffee promoters with specific expression patterns. For that, coffee ESTs which known expression profiles were employed. First, the promoter regions of coffee genes showing, respectively, fruitspecific and ubiquitous expression were amplified using the Genome Walking strategy. Amplified sequences were then inserted in the pGEM-Teasy vector (Promega) and sequenced. Once completed the sequencing, an expression cassette was constructed using the binary vector pCAMBIA-1381z (Cambia). These expression cassettes were cloned into Agrobacterium tumefaciens, and transgenic tobacco plants were generated aiming the functional characterization of these promoters; O projeto genoma do café disponibilizou para a comunidade científica uma série de informações que têm viabilizado a identificação e clonagem de genes de interesse bem como a identificação das principais seqüências envolvidas na regulação dos mesmos. Utilizando-se de etiquetas de seqüências expressas (EST) de café com padrão de expressão característico...

As proteínas da família TRF2 (“TTAGGG repeat-binding factor 2”) fazem parte de complexos multiprotéicos responsáveis pela manutenção dos telômeros de alguns eucariotos. Elas apresentam domínios funcionais que a caracterizam como proteínas que interagem com DNA telomérico na forma de dupla fita. São eles, o domínio de interação com o DNA do tipo Myb-like, localizado na porção C-terminal, um domínio acídico N-terminal e um domínio de homodimerização TRFH (“TRF homology domain for homodimerization”). A proteína TRF2 também está envolvida na formação de estruturas teloméricas terminais denominadas “t-loops”. O intuito deste projeto é a clonagem, expressão em vetor bacteriano (pMAL) e a purificação de uma proteína homóloga as proteínas teloméricas TRFs humana em parasitas do gênero Leishmania, especificamente a espécie Leishmania amazonensis (LaTRF). Primeiramente foram desenhados iniciadores (primers) utilizados para a amplificação da sequência LaTRF por PCR. O(s) produto(s) de amplificação foram clonados em vetores de clonagem para produtos de PCR e sequenciados para análise. Uma vez obtida a seqüência da LaTRF, o inserto contendo o gene foi subclonado direcionalmente e na mesma fase de leitura do vetor de expressão bacteriano (pMAL-c5x...

Bacillus thuringiensis subsp. Israelensis é uma bactéria entomopatogênica que produz cristais protéicos durante o processo de esporulação. Com o objetivo de se determinar a atividade biológica das proteínas constituintes do cristal foi feita a clonagem molecular dos genes da toxina. A estratégia de clonagem consistiu-se na inserção de fragmentos de DNA plasmidial de B. thuringiensis subsp israelensis no plasmídio pUC8, resultando em plasmídios híbridos. Foram obtidos 8 clones recombinantes com atividade contra larvas de ª fluviatilis e hemolíticos para eritrócitos de carneiros e um clone recombinante com atividade larvicida e não hemolítico. Após análise imunológica com anticorpos produzidos contra as principais frações protéicas de B. thuringiensis subsp israelensis, verificou-se a produção dos peptídeos de 28, 33 e 38 kD nos clones recombinantes larvicidas e hemolíticos e a ausência do peptídeo de 33 kD no clone não hemolítico; Bacillus thuringiensis subsp. Isralensis is a bacteria entomopathogenic that produce proteins crystals during the process of sporulation. The molecular cloning of the toxin genes was carried out to determine the biological activities of the crystal proteins. Fragments of DNA plasmids of Bacillus thuringiensis subsp. Israelensis coli were inserted in the vector pUC8 and cells of Escherichia coli were transformed with the hybrid plasmids. Eight of the recombinants obtained were active against larvae of A.fluviatilis and hemolytic for sheep red blood cells...

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Educação. Programa de Pós-Graduação em Educação Científica e Tecnológica; A presente pesquisa tem por objetivo oferecer encaminhamentos que possibilitem o acesso de estudantes do ensino médio a novas formas de aprendizagem em biologia, especialmente em genética, que permitam estabelecer relações entre os conhecimentos científicos veiculados pela mídia e pela escola, os conceitos básicos desenvolvidos nas aulas de biologia e as questões cotidianas. Por conta disso, buscamos saber que conhecimentos estudantes do ensino médio possuem sobre clonagem, que relações estabelecem entre esta temática, os conceitos básicos de biologia e questões do cotidiano, bem como conhecer a opinião destes estudantes sobre a pertinência do uso do tema em aulas de biologia. Estes dados foram obtidos através da aplicação de um questionário e realização de entrevistas com estudantes do segundo ano do ensino médio de uma escola pública estadual no município de Itapema. As categorias de análise do questionário e da entrevista foram: meio formal/informal de acesso à temática, clareza conceitual, presença de obstáculos epistemológicos e determinismo genético e tecnológico...

Para este artigo, foram analisadas trezentas matérias extraídas dos principais jornais da mídia impressa brasileira sobre o tema da clonagem, em um período de dezoito meses, a contar do anúncio de Dolly, feito em fevereiro de 1997. A análise do material teve dois grandes objetivos: mapear os constantes morais a que a possibilidade da clonagem de seres humanos esteve associada e identificar alguns dos pressupostos morais da pesquisa científica com animais nãohumanos e que foram reproduzidos irrefletidamente pela mídia. Além do reconhecimento de que houve antes uma difusão irrefletida do medo da clonagem em seres humanos que mesmo um debate ético frente à questão, a conclusão a que os autores chegaram com este estudo foi que há um sério descompasso entre as reflexões bioéticas e a mídia brasileira. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT; This article was based on an analysis of three hundred articles from mainstream Brazilian periodicals over a period of eighteen months, beginning with the announcement of the Dolly case in February 1997. There were two main objectives: to outline the moral constants in the press associated with the possibility of cloning human beings and to identify some of the moral assumptions concerning scientific research with non-human animals that were published carelessly by the media. The authors conclude that there was a haphazard spread of fear concerning the cloning of human beings rather than an ethical debate on the issue...

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2014.; A celulose é o polissacarídeo mais abundante da Terra e pode ser encontrada na parede celular das plantas. Para hidrolisar a celulose em resíduos de glicose é necessário um complexo de enzimas hidrolíticas envolvendo as enzimas endoglucanases, celobiohidrolases ou exoglucanases e as β- glicosidases. O uso industrial dessas celulases é bem diverso, abrangendo desde o processamento de algodão, a fabricação de papel, produção de detergentes, extração de polpa de frutas para a fabricação de sucos, o enriquecimento de ração para animais e na produção de bioetanol a partir da biomassa. Devido a essa grande variedade de usos para celulases é que a contínua busca por enzimas que sejam cada vez mais vantajosas na relação custo-benefício e eficiência se faz tão necessária. Uma técnica que pode ser usada na busca por essas novas enzimas é a metagenômica que permite o acesso ao material genético de micro-organismos não cultiváveis. Para a produção industrial dessas proteínas recombinantes, vários sistemas biológicos são empregados, principalmente a bactéria Escherichia coli e a levedura Pichia pastoris. Nesse trabalho foi feita a triagem de clones provenientes de uma biblioteca metagenômica de rúmen de caprino com fenótipo de degradação de celulases em 4 diferentes substratos: CMC LV...

Para este artigo, foram analisadas trezentas matérias extraídas dos principais jornais da mídia impressa brasileira sobre o tema da clonagem, em um período de dezoito meses, a contar do anúncio de Dolly, feito em fevereiro de 1997. A análise do material teve dois grandes objetivos: mapear os constantes morais a que a possibilidade da clonagem de seres humanos esteve associada e identificar alguns dos pressupostos morais da pesquisa científica com animais não-humanos e que foram reproduzidos irrefletidamente pela mídia. Além do reconhecimento de que houve antes uma difusão irrefletida do medo da clonagem em seres humanos que mesmo um debate ético frente à questão, a conclusão a que os autores chegaram com este estudo foi que há um sério descompasso entre as reflexões bioéticas e a mídia brasileira.

Noções de natureza desempenham um papel na cobertura midiática e nas percepções do público sobre as biotecnologias. Neste estudo, fez-se uma análise de discurso das ideias de natureza e natural usadas na cobertura jornalística brasileira da clonagem e das células-tronco. Nos discursos oponentes, as técnicas biotecnológicas foram postas fora da ordem natural e consideradas imorais. Nos discursos defensores, apareceu uma natureza indiferente ou cruel para com o destino humano, ou obstáculo a ser superado; por outro lado, a clonagem e as células-tronco embrionárias foram naturalizadas, e a ovelha Dolly foi antropomorfizada. As representações mitificantes ou transcendentes da natureza não incidem somente sobre as percepções públicas, têm implicações éticas e políticas.

O anúncio do nascimento de Dolly, ovelha criada em laboratório por transferência nuclear de célula somática, geneticamente idêntica a uma ovelha adulta, atraiu grande interesse por parte da mídia e deflagrou um debate público sobre a clonagem, do qual brotaram as discussões sobre a clonagem terapêutica e sobre as pesquisas com células-tronco embrionárias. Este estudo investiga por meio de uma análise do discurso as representações que Dolly assumiu na cobertura desses temas pela imprensa brasileira entre os anos de 1997 e 2005. Introduzida de forma ambivalente, como signo de triunfo técnico e sinal de que a clonagem humana estava próxima, a ovelha clonada adquiriu com o tempo diferentes representações, com diferentes implicações e efeitos de sentido, que devem afetar de formas distintas as percepções do público geral. Grande parte dessas representações parece atravessada por uma ideologia "cientificista", que faz dos cientistas vozes privilegiadas em discussões sobre novas tecnologias.

O trabalho tem por objeto a análise da diferença no tratamento ético e jurídico da questão das células-tronco embrionárias quando obtidas, de um lado, dos embriões excedentes da técnica de reprodução humana assistida e, de outro lado, de embriões produzidos pelo processo de clonagem terapêutica. A problemática é analisada numa perspectiva dos direitos fundamentais, na interface da Bioética e do Biodireito com o Direito Constitucional. A nova Lei da Biossegurança regulamentou a questão, permitindo a utilização, para fins de pesquisa e terapia, de embriões resultantes da reprodução assistida e não utilizados no procedimento; todavia, vetou a possibilidade de obtenção de células-tronco pela clonagem terapêutica. Busca-se averiguar, assim, as semelhanças e diferenças dessas situações jurídicas, abordando a possibilidade de nova legislação vir a igualar tais procedimentos ora tratados de maneira distinta. A decisão do STF, em sede da ADI 3510, é também analisada, sob a ótica de que as considerações ali lançadas têm direta repercussão no tratamento da clonagem terapêutica. O exame da problemática perpassa a questão do tratamento do embrião in vitro, cuja destruição constitui traço comum entre os dois processos de obtenção de células-tronco embrionárias em confronto...

Resumo: O presente trabalho acadêmico versa sobre a análise da clonagem terapêutica sob o ponto de vista jurídico. Buscou-se verificar a viabilidade jurídica da utilização dessa técnica, no Brasil, para o tratamento de doenças. Partindo-se de conceitos a respeito das características dos direitos da personalidade, objetivou-se averiguar a compatibilidade da utilização desse tipo de técnica com o ordenamento jurídico brasileiro. A seguir, foram analisados os conceitos técnico-biológicos referente à clonagem, seus tipos, e suas técnicas. Em seguida, fez-se uma reflexão sobre o direito à vida e o momento do seu início, a fim de verificar se a clonagem revela-se como prática atentatória a esse direito. Finalmente, debruçou-se sobre o direito positivo vigente, visando verificar como é disciplinado o tema nas legislações pátria e estrangeira, a fim de realizar uma análise comparativa das disciplinas jurídicas diversas existentes, bem como conjecturar a possibilidade de essa técnica vir a ser posta em prática no país

O veneno de cobras, escorpi?es, aranhas e outros animais venenosos ? uma fonte rica em toxinas. Uma caracter?stica importante de algumas toxinas ? o fato de serem esp?cie espec?ficas. Neste trabalho, n?s realizamos a clonagem da seq??ncia codificante para a toxina LTx2 da aranha Lasiodora sp. no vetor de express?o pET11a. Esta toxina foi previamente identificada, atrav?s da varredura de uma biblioteca de cDNA da gl?ndula de veneno desta aranha. A an?lise de similaridade, feita com o programa de alinhamento local BLAST, mostrou que esta toxina apresenta similaridade com as toxinas huwetoxina-II e huwetoxina-VII da aranha Selenocosmia huwena, bem como com as toxinas LTx1 e LTx3 da Lasiodora sp. Ap?s a clonagem no vetor de express?o, n?s sequenciamos o produto da clonagem pelo m?todo de Sanger e verificamos que o mesmo foi inserido no frame correto. A indu??o da express?o da toxina recombinante foi feita usando IPTG na concentra??o de 0,6 mM, por 3-4 horas. Atrav?s de ensaios imunoqu?micos, n?s constatamos que neste sistema a prote?na recombinante ? expressa sobretudo na forma de corpos de inclus?o. Definimos ent?o, uma estrat?gia para obter a toxina sol?vel renaturada. Utilizando uma solu??o contendo ur?ia na concentra??o de 6 M realizamos a desnatura??o dos corpos de inclus?o...

After making a brief story of cloning in the world the author establishes a sort of classification of cloning, sugests the steps to be taken and summarizes some barriers to be overtaken. After that makes some reflexions on the issue and uses some arguments founded on practical reasons to deffend therapeutic cloning. He ends by saying that any absolute prohibition is morally unjustified, puts upside down the conception of dignity, besides being a theological heresy. The aparent strenght of the impulse to banish cloning, seems to come from a tremendous nostalgia some people possess by the Middle Ages.; Após historiar de modo breve a clonagem no mundo, o autor estabelece a classificação dos quatro tipos de clonagem e lista os degraus a serem galgados e os obstáculos a serem superados. Em seguida procede a uma serie de reflexões e utiliza argumentos fundamentados na razão prática, para defender a clonagem terapêutica. Conclui por afirmar que qualquer proibição absoluta é moralmente injustificada, subverte o conceito de dignidade, além de ser teologicamente uma heresia. A aparente força do impulso para banir a clonagem, em qualquer de suas formas, para vir de uma enorme nostalgia que alguns sentem pela Inquisição.

This study aims to analyze the most important aspects of the human reproductive cloning, from the view point of the Brazilian Federal Constitution of 1988. To achieve the purposed aim, the research and analysis of the recent legal and constitutional aspects which can be related to human reproductive cloning has been performed.; O objetivo do estudo é delinear os principais aspectos da clonagem humana reprodutiva, sob a ótica da Constituição Federal Brasileira de 1988. Para atingir esse objetivo, foram realizadas a pesquisa e análise relativa aos aspectos constitucionais e da legislação atual que podem ser aplicados à clonagem humana reprodutiva.

Para este artigo, foram analisadas trezentas matérias extraídas dos principais jornais da mídia impressa brasileira sobre o tema da clonagem, em um período de dezoito meses, a contar do anúncio de Dolly, feito em fevereiro de 1997. A análise do material teve dois grandes objetivos: mapear os constantes morais a que a possibilidade da clonagem de seres humanos esteve associada e identificar alguns dos pressupostos morais da pesquisa científica com animais não-humanos e que foram reproduzidos irrefletidamente pela mídia. Além do reconhecimento de que houve antes uma difusão irrefletida do medo da clonagem em seres humanos que mesmo um debate ético frente à questão, a conclusão a que os autores chegaram com este estudo foi que há um sério descompasso entre as reflexões bioéticas e a mídia brasileira.