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Patologia de neonatos bovinos originados por meio da técnica de transferência nuclear de células somáticas – clonagem; Pathology of bovine neonates generated by somatic cell nuclear transfer – Cloning

SANTOS, Caio Rodrigues dos; GRANDI, Fabrizio; MIGLINO, Maria Angélica; MEIRELLES, Flávio Vieira; MAIORKA, Paulo Cesar
Fonte: São Paulo Publicador: São Paulo
Tipo: Artigo de Revista Científica
POR
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36.3%
Os mecanismos de morte em animais clonados a partir de células somáticas são poucos elucidados. Malformações de órgãos, alterações de tamanho e peso desses animais foram anomalias já descritas, porém em casos isolados. Desse modo, estudos nos níveis anatomo e histopatológicos são de suma importância para ajudar a compreensão dos fatores responsáveis pelos altos índices de insucessos com a utilização da TNCS (transferência nuclear de células somáticas). Assim, o presente trabalho foi realizado com o objetivo de descrever, por meio de exames anatomopatológicos, as alterações presentes em um grupo de animais gerados por TNCS, que vieram a óbito entre 1 e 19 dias de vida. Esse experimento foi realizado entre os anos de 2004 e 2008 na fazenda Tambaú, cidade de Tambaú, Estado de São Paulo. No total foram gerados 21 animais da raça Nelore (Bos indicus), sendo que 11 vieram a óbito e dez apresentaram boa evolução clínica no período perinatal. Foram realizadas as necropsias dos animais e posterior análise histopatológica de tecidos alterados. Esse estudo mostrou alta prevalência de alterações cardiopulmonares, que provavelmente foram determinantes nos mecanismos de morte dos animais. Dentre essas alterações a hipertensão pulmonar e modificações hemodinâmicas diagnosticadas através do exame histopatológico foram as mais frequentes; The death mechanisms in cloned animals are not well elucidated. There are few cases describing organ malformation...

Produção de animais transgênicos por transferência nuclear como modelo de estudo biológico; Production of transgenic animals by nuclear transfer: model for biological studies

BRESSAN, Fabiana Fernandes; MIRANDA, Moyses dos Santos; DE BEM, Tiago Henrique Camara; PEREIRA, Flávia Thomaz Verechia; BINELLI, Mario; MEIRELLES, Flávio Vieira
Fonte: Belo Horizonte Publicador: Belo Horizonte
Tipo: Artigo de Revista Científica
POR
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36.2%
O recente progresso na clonagem animal por transferência nuclear (TN) possibilitou a produção de animais transgênicos utilizando linhagens de células doadoras de núcleo modificadas geneticamente. A possibilidade de manipulação genética, o estudo da expressão gênica e a adequada seleção da célula doadora de núcleo não somente podem garantir a presença da construção gênica em toda a prole, como também podem evitar a produção de animais portadores de modificações indesejáveis resultantes da inserção aleatória do inserto em regiões codificantes do genoma. Esta revisão tem como objetivo discutir a utilização da transferência nuclear de célula somática (TNCS) como método de escolha para a transgenia animal.; Recent progress in animal cloning by nuclear transfer (NT) has made possible the production of transgenic animals using previously genetically modified cell lineages. The possibility of genetic manipulation, gene expression studies and adequate selection of the nuclei donor cell for NT not only can guarantee the presence of the gene construction in the offspring, but also can avoid the production of animals that carries undesirable characteristics, often as a result of the random insertion of transgenes in transcripted areas of the genome. This review aims to discuss the use of somatic cell nuclear transfer (SCNT) in animal transgesis.

Princípios básicos, importância e desafios das biotécnicas aplicadas à reprodução animal

FIGUEIREDO, José Ricardo de; GONÇALVES, Paulo Bayard Dias; VISINTIN, José Antonio
Fonte: Brasília Publicador: Brasília
Tipo: Artigo de Revista Científica
POR
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36.2%

"Clonagem em bovinos: uso de fibroblastos fetal e adulto como fonte doadora de núcleo" ; Bovine cloning: fetal and adult fibroblasts as nuclei donor source.

Mello, Marco Roberto Bourg de
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 18/12/2003 PT
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O objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade in vitro e in vivo de embriões bovinos reconstruídos com oócitos enucleados em Metáfase II e núcleos de células somáticas (fibroblastos) fetais e adultas. Para tanto, oócitos de ovários colhidos em matadouro foram maturados in vitro por 17 horas e enucleados pela remoção do primeiro corpúsculo polar (CP) e da região do oolema contendo a placa metafásica. Como núcleo doador, foram utilizados fibroblastos de orelha de vaca da raça Nelore e de feto colhido em abatedouro. Para a reconstrução dos embriões, cada célula doadora de núcleo, após indução à G0, foi inserida sob a zona pelúcida de cada oócito enucleado e o complexo citoplasma receptor - núcleo doador (CCN) fundido e ativado por eletrofusão (2 pulsos de 4 KV/cm durante 20µs). Após ativação elétrica, cada CCN foi incubado em solução de ciclohexemide (10µg/ml) e citocalasina D (2,5µg/ml) por 1 hora e, em seguida, em solução de ciclohexemide (10µg/ml) por mais 4 horas. Os embriões reconstruídos e ativados, assim como os fecundados in vitro (controle), foram co-cultivados em monocamada de células da granulosa e TCM 199 acrescido de 10% de SFB por 7-9 dias. Após o co-cultivo por 7-9 dias, parte dos embriões (controle e reconstruídos) foi fixada e corada para determinação do número de células e parte transferida para receptoras. Um total de 668 embriões foram reconstruídos com célula fetal e 569 com fibroblasto adulto. Após eletrofusão...

Patologia de neonatos bovinos clonados; Pathology of cloned bovine neonates

Santos, Caio Rodrigues dos
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 08/09/2008 PT
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36.5%
Clonagem ou técnica de transferência nuclear (TN) permite a geração de um organismo geneticamente idêntico a outro. Inúmeras aplicações da TN têm sido descritas para uso em pecuária e em medicina humana. O sucesso na clonagem de ovinos, bovinos, suínos e caprinos confirma a utilidade da TN para o propósito de expansão clonal de animais de valor zootécnico. Diversos trabalhos mostram que há uma perda de embriões e neonatos de animais clonados, sendo que má formações de órgãos e alterações de tamanho e peso destes animais são freqüentemente descritas. Mediante o exposto este trabalho visa esclarecer do ponto de vista morfológico as principais alterações apresentadas por animais que vieram a óbito, usando como método de estudo a biometria de órgãos e a avaliação dos que apresentam algum tipo de alteração. Este estudo foi conduzido na fazenda Tambaú, no período compreendido entre 2004 e 2008, foram necropsiados 13 animais clonados pela TN, pertencentes à espécie bovina, das raças Nelore e Simental, com idade variando de 1 a 19 dias, de ambos os sexos. Foram registrados o peso do animal, dos órgãos, bem como avaliação morfológica, histológica e imunoistoquímica destes. As alterações do tamanho e da morfologia de órgãos são os problemas mais freqüentemente encontrados...

O uso da cardiotocografia como método de diagnóstico da ocorrência de sofrimento fetal (hipóxia fetal) durante a vida intrauterina de fetos da raça Nelore originados por meio da técnica de transferência nuclear de células somáticas adultas - Clonagem; The use of cardiotocography as a method of diagnosis of the occurrence of fetal distress (fetal hypoxia) during intrauterine life in fetuses of Nellore generated through the technique of somatic adult cell nuclear transfer - Cloning

Nunes, Mariana Tikuma
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 28/08/2009 PT
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46.55%
A presente pesquisa teve a finalidade de padronizar a técnica de cardiotocografia a ser utilizada para avaliar a existência de hipóxia/sofrimento fetal durante a vida intrauterina, procurando estabelecer a partir do 7º mês da gestação os padrões de normalidade da frequência cardíaca fetal para fetos sadios e oriundos de inseminação artificial, bem como avaliar a influência da clonagem nos parâmetros obtidos no exame de cardiotocografia. Foram acompanhadas as gestações de 14 vacas, sendo os animais divididos em três grupos experimentais: Grupo de Clones Mortos composto de 5 vacas gestantes nas quais acompanhou-se a carditocografia de fetos gerados pela técnica de clonagem e nos quais a morte do bezerro ocorreu nas primeiras 36 horas de vida ; Grupo de Clones Vivos composto de 4 vacas gestantes nas quais acompanhou-se a carditocografia de fetos gerados pela técnica de clonagem e que permaneceram vivos após o nascimento; Grupo Controle - composto de 5 vacas gestantes nas quais acompanhou-se a carditocografia de fetos gerados por inseminação artificial e que deram origem a bezerros sadios. Os animais foram acompanhados por exames periódicos de cardiotocografia realizados nos seguintes momentos: 90, 60, 30, 15, 7...

Contribuição ao estudo da hematologia de bezerros da raça nelore, originados por meio da técnica de transferência nuclear de célula somática (TNCS) - Clonagem; Contribution to the study of hematology of Nelore calves produced by somatic cell nuclear transfer

Komninou, Eliza Rossi
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 22/08/2008 PT
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36.18%
A presente pesquisa teve a finalidade de estudar a hematologia de bezerros clonados da raça Nelore, originados por meio da técnica de transferência nuclear de células somáticas (TNCS) por meio da avaliação do quadro eritrocitário, da dinâmica dos tipos de hemoglobina e do metabolismo do ferro destes animais durante o primeiro mês de vida. O delineamento experimental envolveu a colheita de 260 amostras de sangue e soro sanguíneo de 20 bezerros distribuídas nos seguintes momentos: imediatamente após o nascimento, 12 horas após o nascimento, 1 dia de vida, 2 , 3 , 4, 5, 7, 10, 15, 20 e 30 dias de vida. Os animais foram divididos em quatro grupos experimentais: 12 bezerros obtidos por meio da técnica de TNCS pelos laboratórios A e 8, 4 por meio de fertilização in vitro (FIV) e 4 por monta natural (MN). A ocorrência de anemia de grau moderado a grave, do tipo normocítico e normocrômico, foi observada em 100 % (5/5) dos 5 bezerros clonados pelo Laboratório A, enquanto a incidência nos bezerros clonados pelo Laboratório B foi igual a 14,2 % (1/7), nos bezerros obtidos por fertilização in vitro foi igual 50,0 % (2/4) e em bezerros obtidos por monta natural foi igual a 50,0 % (2/4). A avaliação do eritrograma dos bezerros cio nados pelo Laboratório A evidenciou que a anemia instalou-se gradualmente a partir das 12 horas de vida atingindo ao final da primeira semana...

Fisiologia e metabolismo placentário por canulação cordonal em gestações de bovinos normais, FIV e clonados; Placental physiology and metabolism by cordonal canulation in normal, IVF and cloned bovine concepti

Gerger, Renato Pereira da Costa
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 29/04/2010 PT
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26.42%
O desenvolvimento dos sistemas de produção de embriões por fecundação in vitro (FIV) ou transferência nuclear com células somáticas (TNCS) em diversas espécies animais, em especial a bovina, acarretou na manifestação de anormalidades de desenvolvimento in vivo, com a placenta sendo considerada o fator determinante no aparecimento destes distúrbios durante a gestação. A hipótese geral deste trabalho é de que alterações na formação da placenta, decorrentes das manipulações embrionárias in vitro, resultam em elevadas perdas no terço inicial e em anormalidades fetais e placentárias no terço final da gestação, incluindo um crescimento compensatório dos fetos por uma perda da capacidade de regulação da restrição placentária, elevando o fluxo total de nutrientes no sentido materno-fetal. Sendo assim, este estudo foi dividido em Capítulos, buscando-se avaliar os efeitos de algumas variáveis biológicas e técnicas na produção de embriões in vitro por TNCS, e de comparar o desenvolvimento de prenhezes estabelecidas com embriões produzidos in vivo (Controle), in vitro por fecundação (FIV) e in vitro por transferência nuclear (TNCS), pela avaliação de dados morfométricos, morfológicos e bioquímicos coletados em distintos momentos da gestação. No Capítulo 1...

Clonagem, expressão e caracterização de um inibidor de agregação plaquetária proveniente dos complexos salivares de sanguessugas Haementeria depressa.; Cloning, expression and characterization of a platelet aggregation inhibitor from Haementeria depressa leech salivary complexes.

Alves, Jafia Lacerda
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 20/09/2011 PT
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46.5%
Animais hematófagos possuem em sua saliva substâncias que permitem a fluidez do sangue, para o sucesso de sua alimentação. Com isso, têm sido descritos diversos componentes com atividades nos diferentes processos hemostáticos (coagulação, fibrinólise e agregação plaquetária). O complexo salivar da sanguessuga Haementeria depressa vem sendo estudado através de bioquímica clássica e análises transcriptômica e proteômica deste tecido determinaram o perfil dos transcritos e das proteínas produzidas. Dentre os transcritos mais abundantes foram encontrados três clones (H06A09, H06A02 e L02F02) que apresentaram 45%, 87% e 94% de similaridade ao LAPP, um inibidor de agregação plaquetária da sanguessuga Haementeria officinallis, a produção destes componentes pelo tecido foi confirmada pela análise proteômica. O LAPP é um inibidor que age pela via do colágeno e possui cerca de 14 kDa e pI de 4,0 e inibe a ligação da plaqueta ao colágeno tanto pelo epítopo do FvW quanto pelo domínio a2b1. Assim, o objetivo do presente trabalho foi clonar, expressar e caracterizar a proteína recombinante ativa, a partir do clone H06A09 para estudos de atividade desta molécula. Para obter a proteína recombinante de interesse inicialmente a clonagem do transcrito foi realizada com sucesso em vetor pAE...

Clonagem de serino proteases do veneno da cascavel Crotalus durissus terrificus e expressão da giroxina em célula de mamífero; Cloning of serine proteases from the venom of rattlesnake Crotalus durissus terrificus and expression of a gyroxin in mammalian cells

Yonamine, Camila Miyagui
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 05/12/2007 PT
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36.3%
As serino proteases participam de diversos processos fisiológicos (tal como o de coagulação) e patológicos. Essas enzimas estão amplamente distribuídas entre as espécies, são também toxinas dos venenos de serpentes, sendo denominadas SVSPs (snake venom serine proteases). Essas SVSPs são multifuncionais e contêm uma tríade catalítica formada pelos aminoácidos HDS. Algumas SVSPs são comercialmente disponíveis, sendo indicadas para o tratamento de infarto do miocárdio, tromboses e embolia pulmonar. No veneno de Crotalus durissus terrificus estão descritas até o momento, apenas duas SVSPs sendo que a mais estudada é a giroxina que representa cerca de 2,5% do veneno total. No presente estudo foi reportado a clonagem de sete serino proteases amplificadas a partir de uma biblioteca de cDNA de glândula de veneno de um único espécime adulto de Crotalus durissus terrificus. Estes clones foram analisados com relação à organização do cDNA, estrutura e prováveis funções. A construção do modelo tridimensional da giroxina permitiu verificar as similaridades com tripsina, trombina e outras SVSPs. A glicosilação e a presença de muitas pontes dissulfetos dificultam a obtenção das SVSP recombinantes na forma solúvel e com atividade...

Clonagem e expressão do gene E6 do Papilomavírus Bovino do tipo 1.; Cloning and expression of Bovine Papillomavirus type 1 E6 gene.

Souza, Jacqueline Mazzuchelli de
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 27/05/2013 PT
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36.29%
O Papilomavírus Bovino do tipo 1 (BPV-1) causa fibropapilomas em bovinos e sarcóide em equinos, associados à expressão de oncoproteínas virais, principalmente E6 e E7. A purificação de oncoproteínas a partir de sistema recombinante possibilita seu estudo. Os objetivos foram expressar o gene E6 do BPV-1, purificar e analisar in silico a proteína recombinante obtida. O amplificado foi clonado em E. coli e os plasmídeos foram sequenciados, confirmando a matriz correta de leitura. Após indução da expressão, a proteína recombinante foi identificada e purificada. A microscopia eletrônica mostrou a formação de corpúsculos de inclusão. As análises in silico apontaram as mutações das sequências gênica e proteica de E6-1 em relação às depositadas. Foi realizada a predição tridimensional da estrutura da proteína recombinante e identificadas as regiões conservadas, antigênicas e capazes de realizar ligações cátion-p. Logo, a proteína recombinante E6 do BPV-1 foi obtida e purificada com sucesso, possibilitando o início de novos experimentos e estudos mais detalhados.; Bovine Papillomavirus type 1 (BPV-1) causes fibropapillomas in cattle and sarcoid in equines, associated with the expression of viral oncoproteins...

Perfil bioquímico de bezerros da raça nelore, originados por meio da técnica de transferência nuclear de célula somática (TNCS) - clonagem; Biochemical profile of Nellore calves, originated by the technique of somatic cell nuclear transfer (SCNT) cloning

Marchese, Flavio José Minieri
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 05/09/2014 PT
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46.59%
O perfil metabólico é usado na clínica médica com a finalidade de ajudar o diagnóstico e permite o diagnóstico precoce de alterações metabólicas e também a funcionalidade dos principais órgãos. A transferência nuclear de células somáticas (TNCS - clonagem), apesar de apresentar resultados positivos, ainda possui baixa eficiência, com alta mortalidade embrionária, fetal e pós-natal. Observa-se na primeira semana de vida principalmente nas primeiras 24-48 horas um grande número de bezerros que morrem, devido a distúrbios de adaptação neonatal. Essas alterações placentárias e más formações determinam alterações bioquímicas que são as causas de muitos óbitos verificados nos clones. Este trabalho teve como objetivo estudar o perfil bioquímico de bezerros Nelore clonados durante os 30 primeiros dias de vida, procurando verificar as possíveis modificações no metabolismo de animais obtidos por transferência nuclear de células somáticas (TNCS - clonagem). Foram utilizados 20 bezerros Nelores e realizou-se de cada animal 13 coletas de sangue nos seguintes momentos: ao nascimento, 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 168, 240, 360, 480 e 720 horas de vida. Determinou-se de cada amostra os valores séricos para função renal...

Otimização dos sistema de produção de clones por transferência nuclear com a utilização de oócitos vitrificados e diferentes tipos celulares como doadores de núcleo.

Forell, Fabiana
Fonte: Universidade Federal do Rio Grande do Sul Publicador: Universidade Federal do Rio Grande do Sul
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
POR
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36.55%
A técnica de transferência nuclear é uma ferramenta que possibilita a produção de embriões clones que podem ser utilizados tanto na clonagem reprodutiva, proporcionando o nascimento de produtos, como modelo para o estudo de diversos mecanismos fisiológicos durante o desenvolvimento embrionário. Este trabalho teve como objetivos a otimização da técnica de clonagem no Laboratório de Embriologia e Biotécnicas de Reprodução (FAVET, UFRGS), avaliar a taxa de sucesso da clonagem interespécie, e testar e eficiência da utilização de oócitos vitrificados como citoplasmas receptores para a reconstrução dos embriões clones, sendo realizado em três etapas. A primeira teve por objetivo o estabelecimento da técnica de clonagem, bem como sua otimização nas nossas condições, dando condições para que os experimentos subseqüentes pudessem ser realizados. Para isto foram realizados experimentos in vitro comparando diferentes meios de manipulação, sistemas de ativação química, meios de cultivo e fontes protéicas no cultivo dos embriões, e células oriundas de diferentes origens e animais como doadores de núcleo. Os resultados obtidos in vitro alcançaram taxas de 64,7% de clivagem e de 19,5% de blastocistos. Um grupo de embriões foi transferido para receptoras (n=24)...

Efeitos da clonagem na inativação do cromossomo X e da regulação nutricional do metabolismo da metionina na qualidade ovocitária em bovinos

Ferreira, Allice Rodrigues
Fonte: Universidade Estadual Paulista (UNESP) Publicador: Universidade Estadual Paulista (UNESP)
Tipo: Tese de Doutorado Formato: 123 f.
POR
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36.39%
Pós-graduação em Medicina Veterinária - FMVZ; Os objetivos deste estudo foram: 1) Avaliar a expressão alelo-específica do gene monoamina oxidase de tipo A (MAOA), presente no cromossomo X e sujeito a inativação, em embriões produzidos in vivo e por transferência nuclear (TN). Para análise foram utilizadas biópsias da massa celular interna (MCI) e do trofoblasto (TF) dos embriões; 2) Avaliar se a carência de S e Co (Grupo -S-Co) na dieta, ou a suplementação com Metionina e Colina encapsuladas (Grupo +Met+Col) afetaria os níveis bioquímicos sanguíneos de componentes do ciclo da metionina e do metabolismo de glicose, expressão de genes ligados ao ciclo de um carbono em células do cumulus, qualidade ovocitária e taxa de embriões. Foram oferecidas três dietas com níveis diferentes de Co e S para novilhas da raça Nelore, alocadas em 10 animais/grupo. Após 3 meses de dieta os folículos ovarianos das novilhas foram aspirados semanalmente durante 7 semanas. Para a ICX, nos embriões in vivo detectou-se a presença dos dois alelos, tanto na MCI quanto no TF. Da mesma forma, encontrou-se a expressão dos dois alelos do gene MAO-A em embriões TN, mas com uma prevalência da detecção do alelo A comparado ao G na MCI e no TF. Nenhuma diferença foi encontrada entre +Met+Col e o grupo controle. O grupo -S-Co teve diferença do grupo controle para homocisteína (13...

Clonagem de sequências codificantes de citocinas felinas para construção de curva padrão para PCR em tempo real

Uehara, Elaine Uchima
Fonte: Universidade Estadual Paulista (UNESP) Publicador: Universidade Estadual Paulista (UNESP)
Tipo: Trabalho de Conclusão de Curso
POR
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36.3%
A quantificação de citocinas felinas possibilita uma avaliação do sistema imune do animal em diferentes doenças, permite também a identificação de diferentes fatores que alteram sua secreção, e colabora na compreensão da patogênese das enfermidades. Em humanos e camundongos essa mensuração é feita principalmente pelo método de ELISA, mas para os felinos há uma menor disponibilidade de kits específicos para determinadas citocinas, e estes possuem um custo elevado. Assim, uma alternativa é utilizar a reação de PCR em tempo real com transcrição reversa (RT-qPCR) para quantificação absoluta dos RNAs mensageiros das citocinas felinas, uma técnica bastante sensível e específica para analisar a expressão desses genes. Com esse intuito, esse trabalho teve como objetivo clonar as sequências gênicas codificantes de citocinas, para construir uma curva padrão para a qPCR. Assim, foi feita extração de RNA de amostras de sangue total de gatos domésticos, e estes foram tratados com DNAse para evitar contaminação por DNA genômico. O cDNA foi sintetizado, e amplificado com os primers específicos para cada fragmento codificante de citocina e o GAPDH felino. Cada amplicon purificado foi inserido em um plasmídeo comercial...

Aspectos anatomopatológicos de clones bovinos abortados e neonatos

Pereira, Lídia dos Santos
Fonte: Universidade de Brasília Publicador: Universidade de Brasília
Tipo: Dissertação
POR
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26.48%
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2013.; A transferência nuclear de células somáticas ou clonagem é um técnica que permite produzir um indivíduo geneticamente igual a um outro indivíduo adulto. Esta técnica abre inúmeras possibilidades para a medicina e para a reprodução animal. Porém, existem inúmeros relatos de problemas associados à clonagem. A taxa de perda nos períodos embrionário e fetal ainda é muito alta quando comparado a outras biotécnicas, além disso, há uma maior incidência de hidropisias e distocias, diminuindo a eficiência e aumentando o custo da técnica. Os animais que vem a termo frequentemente apresentam uma síndrome chamada de macrossomia e apresentam dificuldades de adaptação à vida extrauterina e por isso muitas vezes vem a óbito. No presente trabalho realizou-se necropsia e coleta de fragmentos de órgãos para avaliação histopatológica de 69 bezerros clonados, destes, 28 foram abortados e 41 com óbito neonatal. As principais alterações observadas foram no fígado, rins e pulmões tanto nos animais abortados quanto com óbito neonatal. No fígado, 85% dos animais avaliados apresentaram degeneração hepática. Nos rins identificou-se a presença de um pigmento acastanhado no interior dos túbulos corticais em aproximadamente 90% das amostras avaliadas...

Sequenciamento, análise, clonagem e expressão de genes de celulases e hemicelulases oriundos de bibliotecas metagenômicas de solo e rúmen

Ramos, Talita Gabriela Salles
Fonte: Universidade de Brasília Publicador: Universidade de Brasília
Tipo: Dissertação
POR
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36.52%
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2014.; A celulose é o polissacarídeo mais abundante da Terra e pode ser encontrada na parede celular das plantas. Para hidrolisar a celulose em resíduos de glicose é necessário um complexo de enzimas hidrolíticas envolvendo as enzimas endoglucanases, celobiohidrolases ou exoglucanases e as β- glicosidases. O uso industrial dessas celulases é bem diverso, abrangendo desde o processamento de algodão, a fabricação de papel, produção de detergentes, extração de polpa de frutas para a fabricação de sucos, o enriquecimento de ração para animais e na produção de bioetanol a partir da biomassa. Devido a essa grande variedade de usos para celulases é que a contínua busca por enzimas que sejam cada vez mais vantajosas na relação custo-benefício e eficiência se faz tão necessária. Uma técnica que pode ser usada na busca por essas novas enzimas é a metagenômica que permite o acesso ao material genético de micro-organismos não cultiváveis. Para a produção industrial dessas proteínas recombinantes, vários sistemas biológicos são empregados, principalmente a bactéria Escherichia coli e a levedura Pichia pastoris. Nesse trabalho foi feita a triagem de clones provenientes de uma biblioteca metagenômica de rúmen de caprino com fenótipo de degradação de celulases em 4 diferentes substratos: CMC LV...

Um novo sistema de clonagem baseado na lipoproteína OprI para obtenção de formulações imunogénicas derivadas da parede celular bacteriana

Basto, Afonso Silva Pinto
Fonte: Universidade Técnica de Lisboa. Faculdade de Medicina Veterinária Publicador: Universidade Técnica de Lisboa. Faculdade de Medicina Veterinária
Tipo: Tese de Doutorado
Publicado em 21/10/2011 POR
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36.3%
Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias. Especialidade de Sanidade Animal; A modulação de imunidade específica por conjugação de antigénios com ligandos de receptores de reconhecimento de padrão (PRR) constitui uma estratégia emergente para o desenvolvimento de vacinas subunitárias. Neste trabalho, desenvolve-se um novo sistema de clonagem em Escherichia coli para expressão de antigénios em fusão com a lipoproteína OprI, um ligando TLR da membrana externa de Pseudomonas aeruginosa. O sistema permite um controlo apertado da expressão proteica e a purificação por cromatografia de afinidade com iões metálicos, ultrapassando as principais limitações de versões anteriores. Confirmou-se o processamento, translocação e triacilação da lipoproteína e desenvolveram-se protocolos para a produção de outras formulações recombinantes derivadas da parede bacteriana (fragmentos e vesículas de membrana externa) com potencial distinto para activação PRR. Como modelo, clonaram-se as sequências dos antigénios A104R do vírus da peste suína africana (VPSA), ovalbumina e EGFP. Demonstrou-se a capacidade adjuvante das três formulações, avaliando a resposta humoral e a indução de linfócitos T CD8+ in vivo e o perfil de citocinas e quimiocinas induzidas em células dendríticas estimuladas in vitro. Os resultados observados validam o sistema para a obtenção de formulações imunogénicas com aplicação no desenvolvimento de vacinas subunitárias experimentais e em estudos de modulação de resposta adaptativa.; ABSTRACT - A new cloning system based on the OprI lipoprotein for the production of bacterial cell wall-derived immunogenic formulations - The modulation of specific immunity through the conjugation of antigens with ligands of pattern recognition receptors (PRR) is emerging as a promising strategy for the development of subunit vaccines. Here...

Seleção, caracterização e clonagem dos genes fljB e groEL agonistas dos receptores de reconhecimento de padrão do sistema imune inato das aves

Soares,Bruno A.; Ságio,Solange A.; Peconick,Ana P.; Barrios,Priscilla R.; Chalfun-Júnior,Antônio; Costa,Geraldo M.; Barçante,Joziana M.P.; Martins,Nelson R.S.
Fonte: Colégio Brasileiro de Patologia Animal - CBPA; Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA) Publicador: Colégio Brasileiro de Patologia Animal - CBPA; Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA)
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/03/2014 PT
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A produção recombinante de agonistas dos receptores do reconhecimento de padrão do sistema imune inato tem fornecido uma nova ferramenta para a produção de imunoestimulantes para animais. O padrão molecular associado ao patógeno (PAMP), flagelina, codificado pelo gene fljB de Salmonella Typhimurium e o padrão molecular associado ao dano (DAMP) HSP60, codificado pelo gene groEL da S. Typhimurium e S. Enteritidis, são reconhecidos por receptores de reconhecimento de padrões (RRPs) do sistema imune inato das aves. No presente estudo, foi feita a clonagem de fragmentos genéticos dos genes fljB de S. Typhimurium e groEL de S. Typhimurium e S. Enteritidis inseridos no vetor de expressão pET100/D-TOPO e transformados em células de E. coli TOP10. Os clones foram avaliados pela PCR de colônia, PCR de DNA plasmidial e sequenciamento genômico para a confirmação da presença desses genes. Na PCR de colônia, foram identificadas em 80%, 60% e 80% das colônias transformadas, a presença dos genes groEL (S. Enteritidis), groEL (S. Typhimurium) e fljB (S. Typhimurium) respectivamente. O sistema de clonagem adotado possibilitou a produção de clones dos fragmentos genéticos da HSP60 e flagelina das cepas de Salmonella, permitindo a utilização posterior desses clones em ensaios de expressão gênica...

Efeito da progesterona exógena na produção de embriões em novilhas leiteiras; Effect of exogenous progesterone on embryo production in dairy heifers

SANTOS, Klayto José Gonçalves dos
Fonte: Universidade Federal de Goiás; BR; UFG; Doutorado em Ciência Animal; Ciências Agrárias Publicador: Universidade Federal de Goiás; BR; UFG; Doutorado em Ciência Animal; Ciências Agrárias
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
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The reproductive and productive index of dairy cattle in Brazil are below the desirable rates, and, in recent decades, the increase in milk production occurred, partly, more because of the expansion of explored areas and the increase of herds than due to an effective productive increment. The development and application of reproductive biotechnologies are essential conditions for improving reproductive efficiency, especially for domestic ruminants, and techniques such as artificial insemination and embryo transfer have been successfully used. Other biotechnologies such as in vitro embryo production, cloning and genetic modification help to accelerate genetic improvement, because they include animals with superior desirable traits, although the results in terms of production are not so good. The main goal of an embryo transfer program is to obtain a high number of viable embryos per donor, after exogenous hormones administration, by increasing the number of oocytes released, enabling the embryo transfer to recipient cows in order to complete the gestation. Cows are born with more than 100,000 oocytes in ovarian follicles, but by natural via, only 0.01% of viable products can be generated, or a number close to 10 calves throughout their reproductive life. One of the proposed solutions to this problem was the development of in vitro production (IVP) of bovine embryos...